安捷伦1260高效液相色谱仪日常维护要点探讨

摘 要：高效液相色谱仪是一种高精密的仪器，其对于日常维护有很高的要求。为做好高效液相色谱仪的日常维护，我们以安捷伦1260高效液相色谱仪为例从仪器运行环境、开机维护、柱前维护、关机维护四个环节来分析。

关键词：安捷伦1260；高效液相色谱仪；日常维护；维护环节

中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A

高效液相色谱仪（HPLC），它具有高分辨率、高灵敏度、速度高效、色谱柱可以多次反复利用、流出组很容易收集等优良性能，是我国实验室中使用频率很高的分析型仪器。现今已经被大量使用到生物医药研究、大气环境分析、农业食品检测、无机分析等诸多领域。

安捷伦1260大大提高了HPLC 的压力上限。等度泵、四元泵和二元泵系统压力上限可以高达600bar，其最高流速可以达到每分钟5mL。而等度泵和四元泵系统达压力上限200 bar时，流速可以实现10mL/min，另外再加之80 Hz的检测速率和提高了10倍左右的高灵敏度，使安捷伦1260通用性达到了新的很高的水平，安捷伦1260并可实现更高的分离度和更快的分离速度。安捷伦1260是一种高精密的仪器，其对日常维护有很高的要求：

1 安捷伦1260高效液相色谱仪的运行环境

为了仪器的正常合理运转及其保养，应该将仪器放置在平稳固定的台面上，要求台面无振动，周围无辐射和磁场。“要保持干净无灰尘，仪器工作的温度大致范围要求是在15～30℃，周边空气的相对湿度在30%～80%之间”[1]。另外，因为流动相大多数是有机溶剂，我们还要保持室内有一些排风扇等通风换气的设施设备。

2 安捷伦1260高效液相色谱仪的开机维护

首先检查检测使用的流动相以及色谱柱是否准确无误，然后再打开仪器的稳压电源，而后再开输液泵、柱箱。设置好色谱柱的最大保护柱压，进行排气工作，并要确保流路时不会有气泡。这是因为气泡会扩大基线的噪声率，造成安捷伦1260高效液相色谱仪灵敏度不断下降，如果有气泡，气泡里的氧气还会氧化仪器组件，影响机器的性能指标。而关于流速切不可操之过急，我们应该从小到大一点点地加速，这样是为了更好地保护色谱柱。与此同时，还要注意仔细观察，观察柱压与流速能否保持相对应的平稳和合理增加，待到流速已经达到所需要的流速并最终让柱压稳定之后，然后再让检测器工作，这样有利于延长检测器的使用寿命。

3 安捷伦1260高效液相色谱仪柱前维护

由于临床上的样本多为较为复杂的混合物，而这些填料都是很细小的，并且色谱柱的内腔容积非常小，这就会导致堵塞现象。同样，溶液里的细小微粒也会加大进样阀、泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的堵塞和磨损概率。安捷伦1260高效液相色谱仪用缓冲盐的时候，缓冲盐溶液会产生高压析盐情况，会产生一些小的盐粒，这些盐粒会附着在活塞杆上，并会随着活塞杆运动，这就很容易使仪器产生划痕现象，磨损仪器中的密封垫，从而产生漏液等问题。

在使用中应当注意，过滤是非常重要的环节，有效过滤才能够有效保护色谱柱、仪器。为了避免这种情况，不能使用已经存放日期过长的蒸馏水及磷酸盐溶液，如果条件许可的话，可以采用“在溶液中加入0.0001-0.001M的叠氮化钠”[2]的方法来处理解决。也可以在溶剂瓶内溶剂的上方不断地吹入比较稳定的氩气从而实现隔绝空气的目的。还要注意不要把溶剂瓶放在光线强烈的地方，这样会导致溶液失效，为了缓解阳光的失效作用，尽量使用琥珀色的溶剂瓶放置。还可以在色谱柱前加上保护柱，从而避免色谱柱的污染，进而延长柱子的使用寿命。同时要定期用水冲洗所有的通道，从而有效除去阀口上可能出现的盐沉淀。

使用梯度比例阀时，当盐溶液与有机溶剂溶液混合时，盐溶液能够实现与有机溶液有效重新融合并不会出现沉淀现象。假如在比例阀的混合点上，由于重力的因素使盐颗粒慢慢沉淀下来，通常阀A接水相盐溶液，D接有机溶剂，此连接法可有效使盐回落到盐溶液中并被溶解。但是，假若把这个连接法颠倒过来，这些盐可能落在有机溶剂之中，从而容易出现问题。因此，当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时，建议要将缓冲盐的通道接在A通道上，而将有机溶液的通道直接接在D通道上。

4 安捷伦1260高效液相色谱仪关机维护

实验完成后，要把色谱柱冲洗干净。首先要去完成的就是关掉检测器，之所以要这样做是为了节约光源，保证仪器灯的有效使用年限。另外，还要切断色谱柱与检测器的连接程序，之所以这样是为了防止污染检测池。用流动相冲洗流路30多min，然后再用15%的甲醇水洗10min左右，最后再用纯甲醇冲30min左右，并用一些纯化水同时冲外流路等地方。输液泵的流速应慢速减小到0时，才可关闭泵和稳压器。“反相系统用90%～95%有机相+10%～5%水相封存反相色谱柱”[3]，两端封死。如长时间存放可将柱子完全浸泡在有机相内，以防用纯有机相封存反相色谱柱，如果长期保存有机相会挥发。

参考文献

[1] 黄大炜.高效液相色谱仪在使用中的几个问题[J].中国药事，2010（3）：26.

[2] 丰昌云.高效液相色谱仪的故障对策[J].精细化工中间体，2011（7）：54-55.

[3] 何晓书.色谱仪色谱柱的保养[J].医院学报，2004（2）：66.

作者简介：张秀英（1979-），女，农艺师，主要从事农、畜、水产品检测工作。