耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三种筛查方法比较

[摘要] 目的: 以PCR检测的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA基因为金标准，比较耐甲氧西林金葡菌快速胶乳凝聚检测法、头孢西丁纸片法、苯唑西林纸片法三种检验方法在MRSA筛查中的特异性和敏感性。方法：采用NCCLS推荐的30 μg头孢西丁纸片法和苯唑西林纸片法，以及快速乳胶法检测。结果：苯唑西林纸片法检测MRSA阳性47株，阴性36株，敏感性94%，特异性94.7%。头孢西丁纸片法检测MRSA阳性49株，阴性38株，敏感性98%，特异性100%。快速胶乳检测法检测MRSA阳性49株，阴性37株，敏感性98.0%，特异性97.4%。结论：头孢西丁纸片法、快速胶乳检测法与PCR法这个金标准有很高的一致性。

[关键词] 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）；头孢西丁纸片法；快速乳胶检测法；苯唑西林纸片法；筛查

[中图分类号] R446[文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）07（b）-108-02

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 的临床院感率不断上升，在世界各地医院都有感染流行，甚至发生暴发流行，几乎在所有使用抗生素的地方都有MRSA 存在，已引起全球范围内的广泛关注[1]。PCR法检测MRSA特异的青霉素结合蛋白2α（PBP2α）的mecA 基因，是国际公认的金标准，但因为设备、试剂费用高，实验要求严格等因素临床实验室难以常规开展。本实验通过检测已经经过PCR法检测过的菌株88例，探讨苯唑西林纸片法、头孢西丁纸片法、快速乳胶检测法三种方法的敏感性、特异性和临床实用性。现报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验材料和试剂

1.1.1 菌株来源实验菌株为2003年5月来本院微生物实验室从临床标本分离出的金黄色葡萄球菌88株，标准参考菌株ATCC 25923来自军事医学科学院微生物流行病研究所。

1.1.2 材料和试剂MRSA快速胶乳检测试剂由英国Oxoid公司生产。头孢西丁纸片（30 μg）、苯唑西林纸片（1 μg）购自北京天坛药物生物技术公司。水解酪蛋白（M-H）琼脂为杭州天和微生物试剂有限公司产品。革兰阳性球菌鉴定板条，由温州市康泰生物科技有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 菌株鉴定以常规方法培养分离，采用革兰染色，血浆凝固酶，耐热核酸酶和甘露醇发酵实验，并用革兰阳性球菌鉴定板条进行鉴定，确定为金黄色葡萄球菌。

1.2.2 PCR检测以PCR法检测88株实验菌株的mecA基因，mecA基因阳性50株，阴性38株。（本文主要探讨另外三种方法的临床实用性，故PCR法的仪器、试剂、实验过程等环节不再详细叙述。）

1.2.3 快速乳胶凝集检测试剂检测将3～5 μl（15～20个菌落）金黄色葡萄球菌悬浮于200 μl试剂盒所带的提取液Ⅰ中，100 ℃加热3 min，室温下自然冷却加入25 μl提取液Ⅱ，混匀后3 000 rpm室温离心5 min，取50 μl上清液于对照圈，加入PBP2α无特异性单克隆抗体致敏的乳胶颗粒溶液25 μl，作为阴性对照；再取50 μl上清液于试验圈中，加入25 μl 的PBP2α特异性单克隆抗体致敏的乳胶颗粒溶液；摇动3 min，于自然光下观察有无凝集颗粒出现。试验圈有凝集颗粒出现的菌株为阳性。

1.2.4 苯唑西林纸片法检测此方法为临床检验科常用方法。苯唑西林含量为1 μg/片，平皿中M-H 琼脂厚度为4 mm，菌液调至0.5麦氏单位涂布于含40 g/L NaCl的M-H 平板上，贴上苯唑西林纸片，在35 ℃环境下孵育24 h。抑菌直径≤10 mm即判断为耐甲氧西林菌株阳性。

1.2.5 头孢西丁纸片法检测 按2004年NCCLS的标准进行。菌液浊度调至0.5麦氏单位，均匀涂布在M-H平板上，贴上头孢西丁纸片（30 μg／片），37℃培养24 h观察结果。抑菌环直径≤19 mm判断为MRSA阳性。

2 结果

2.1 PCR法mecA基因检测结果

备检的88株金黄色葡萄球菌中，阳性株50株，阴性株38株。

2.2头孢西丁纸片法、苯唑西林纸片法和快速胶乳检测法筛查MRSA检测结果

在PCR法这个金标准检测的50株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌阳性株中，快速胶乳凝聚法检测出49株，敏感性为98%。头孢西丁纸片法检测出耐药株49株，敏感性为98%。苯唑西林纸片法检测出耐药株47株，敏感性为94%。在PCR法检测的38株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌阴性株中，快速胶乳凝聚法检测出37株，特异性为97.4%。头孢西丁纸片法检测出敏感株38株，特异性为100%。苯唑西林纸片法检测出敏感株36株，特异性为94.7%。 实验结果见表1。

3 讨论

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是引起化脓性感染的重要致病菌，其所致的感染已经成为临床治疗中非常棘手的难题[2]。怎样快速准确地筛查出该菌，为临床的诊疗提供更好的帮助，是我们要解决的问题。苯唑西林纸片法是临床实验室使用较早的筛查MRSA的常规方法，但我们的实验结果其敏感性只有94%，特异性只有94.7%。易造成漏检。相关报道也指出其对一些异质性、低水平的MRSA敏感性不够好[3]。2004年美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐用头孢西丁纸片法检测MRSA。快速胶乳凝聚实验也是近年来国外学者推出的检测MRSA的新方法，它的基本原理是检测细菌是否合成PBP2a 而判断细菌是否为MRSA。通过本文的实验结果可以看出这两种方法的敏感性高达98%，特异性分别达到了100.0%和97.4%。和国际公认的PCR法这一金标准具有很好的一致性。而且，设备要求不高，操作简便，易于基层医院临床实验室开展，可以作为临床鉴定MRSA的常规方法。

[参考文献]

[1]李兴禄， 张莉萍， 黄长武.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA 基因快速检测方法的评价[J].中华医院感染学杂志，2003，13（2）：105-106.

[2]张庆玲， 刘明华， 王仙园.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌研究的进展[J].中华医院感染学杂志，2002，12：（10）797-798.

[3]周宏伟，张嵘，陈功祥.头孢西丁纸片法筛查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价[J].临床检验杂志，2006，24（1）52-53.

（收稿日期：2008-03-11）

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