小柴胡化学成分研究

作者简介：齐志众（1982-），男，助理实验师，研究方向：药物化学。

摘要：目的：为了开发利用小柴胡（Bupleurum tenue Buch.-Ham.ex D.Don）的天然资源，阐明其有效成分，对小柴胡根进行了化学成分研究。方法：运用色谱手段和波谱方法分离并鉴定化合物。结果：分离并鉴定8个化合物，它们的结构分别被鉴定为Kaerophyllin（1），Isokaerophyllin（2），咖啡酸乙酯（3），柴胡皂苷元F（4），槲皮素（5），山柰酚3-O-葡萄糖（6），芦丁（7），β - 谷甾醇（8）。结论：化合物1，2，3，4，6，8均为首次从小柴胡中分得。

关键词：柴胡；化学成分；分离；鉴定

小柴胡（Bupleurum tenue Buch.-Ham.ex D.Don）为伞形科（Umbelliferae）柴胡属（Bupleurum L.）植物，又名金柴胡（四川凉山雷波县）、芫荽柴胡（四川甘洛县、会东县）、竹叶柴胡（四川南川县）、滇银柴胡（云南）等。广泛分布于湖北、广西、四川、贵州、云南等省区。多生长在向阳山坡草丛中，或干燥沙地瘠土中，海拔600—2900米，以1500米以上为多[1]。本品有和解少阳，疏利肝胆，通达表里的功效，临床上用于少阳病，往来寒热，胸胁胀满，默默不欲饮食，心烦喜呕，口苦咽干目眩；或腹中痛，或胁下痛，或渴，或咳，或利，或悸，或小便不利，或汗后余热不解，及症发寒热，妇人伤寒热入血室等症。

有关小柴胡的化学成分研究国内外报道很少[2，3]，为了进一步开发利用小柴胡药用资源，阐明其有效成分，为小柴胡临床用药提供合理依据，我们对小柴胡进行了化学成分研究。从小柴胡的95%乙醇提取物的乙酸乙酯部分分离鉴定了8个化合物，其中6个为首次从该植物分离得到。

1 仪器和试剂

XT-4型显微熔点测定仪（北京泰克仪器有限公司，温度计未经校正）；WZZ-3型自动旋光仪（上海精密科学仪器有限公司）；Broker ACF-300（400MHz）型NMR仪，TMS为内标；柱色谱硅胶（200-300目）、薄层色谱板均为青岛海洋化工厂出品；其余试剂均为分析纯。小柴胡药材购自湖北省中药材公司，经贾效成副教授鉴定为小柴胡（Bupleurum tenue Buch.-Ham.ex D.Don）。

2 提取与分离

小柴胡根粉78kg经95%乙醇超声提取（温度在40℃），合并提取液，减压回收溶剂后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚部分65 g，乙酸乙酯部分210 g，正丁醇部分248g。其中乙酸乙酯部分以硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇（100：0～0：100）梯度洗脱，得到Fr.l- Fr.32共32个部分。Fr.3重结晶得到化合物1（203 mg），Fr.5重结晶得到化合物2（10 mg），Fr.9经硅胶柱色谱（石油醚一乙酸已酯=96：4）得到化合物8（34 mg），Fr.20经反复硅胶柱色谱（石油醚-丙酮=3：1），凝胶柱色谱（氯仿-甲醇 = 1：1）得到化合物3（46 mg）、4（58 mg），Fr.27经硅胶柱色谱（氯仿-甲醇 = 9：1）得到化合物5（91 mg）。Fr.23经Sephadex LH-20凝胶柱色谱（甲醇）分离及重结晶，得化合物6（23 mg）；Fr.24洗脱部分，经反复Sephadex LH-20凝胶柱色谱（甲醇）及硅胶柱色谱分离，得化合物7（18 mg）。

3 结构鉴定

Kaerophyllin（1）白色针晶（丙酮），mp.150～152℃。1H NMR（400 MHz，pyridine-d5）δ：401（1H，m，H-3），786（1H，d，J=20 Hz，H-5），264（1H，dd，J：148，96 Hz，H-6a），304（1H，dd，J=l48，46 Hz，H-6），725（1H，d，J=20 Hz，H-2），701（1H，d，J=84 Hz，H-5），735（1H，d，J=84 Hz，H-6），690（1H，s，H-2”），686（1H，d，J=78 Hz，H-5），675（1H，d，J=78 Hz，H-6），378（3H，s，OCH3），385（3H，s，OCH3），596（2H，s，OCH2O）；13C NMR（100 MHz，pyridine-d5）δ：1726（C-1），12741（C-2），396（C-3），697（C4），1372（C-5），374（C-6），1323（C-1），1098（C-2），1515（C-3），1484（C-4），1139（C-5），1242（C-6），1267（C-1”），1087（C-2”），1469（C-3”），1499（C4”），1123（C-5”），1226（C-6”），55.8（OCH3），55.9（OCH3），1016（OCH2O）。上述数据与文献报道的Kaerophyllin[4]数据一致，故化合物l鉴定为Kaerophyllin。

Isokaerophyllin（2）白色结晶（氯仿），mp.122～123℃。1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：344（1H，m，H-3），4.04（1H，dd，J=90，42 Hz，H-4α），427（1H，dd，J：90，72 Hz，H-4β），692（1H，d，J=06 Hz，H-5），275（1H，dd，J=135，90Hz，H-6α），296（1 H，dd，J=138，60 Hz，H-6β），794（1H，d，J=18 Hz，H-2′），682（1H，d，J=78Hz，H-5′），738（1H，dd，J=84，18 Hz，H-6′），690（1H，d，J=12 Hz，H-2”），674（1H，d，J=8.4Hz，H-5”），697（1H，d，J=8.4 Hz，H-6”），378（3H，s，OCH3），381（3H，s，OCH3），599（2H，s，OCH2O）；13C NMR（100 MHz，DMS0-d6）δ：1692（C-1），1267（C-2），431（C-3），694（C4），1398（C-5），409（C-6），1321（C-1′），1094（C-2′），1501（C-3′），1473（C-4′），l109（C-5′），1254（C-6′），12527（C-1”），1081（C-2”），1457（C-3”），1478（C-4”），1093（C-5”），1221（C-6”），554（OCH3），554（OCH3），1007（OCH2O）。上述数据与文献报道的Isokaerophyllin[4]的数据一致，化合物2鉴定为Isokaerophyllin。

咖啡酸乙酯（3）淡黄色针晶（丙酮），mp.121～122℃。1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：126（3H，t，CH3），414（2H，q，CH2），623（1H，d，J=158 Hz，H-1），678（1H，d，J=84 Hz，H-5′），702（1H，dd，J=80，18 Hz，H-6′），703（1H，d，J=18Hz，H-2′），745（1H，d，J=162 Hz，H-2），913（1H，brs，Ar-OH），952（1H，brs，Ar-OH）；13C NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：1455（C-1），1140（C-2），1665（C-3），1254（C-1′），1147（C-2′），1449（C-3′），1483（C-4′），1157（C-5′），1212（C-6′），145（CH3），598（OCH2）。上述数据与文献报道的咖啡酸乙酯[5]的数据一致，化合物3鉴定为咖啡酸乙酯。

柴胡皂苷元F（4）白色粉末（甲醇），mp.216～218℃。Liebermann-Burchard反应阳性。1H NMR（400 MHz，CD3OD）δ：072，091，094，096，102，109（各3H，s，CH3），191（1H，brs，H-9），305（1H，d，J=72 Hz，H-28α），391（1H，d，J=66 Hz，H-28β），416（1H，dd，J=105，60 Hz，H-16），539（1H，dd，J=105，30 Hz，H-12），596（1H，d，J=l08 Hz，H-11）；13C NMR（100 MHz，CD3OD）δ：122（C-24），185（C-6），l88（C-25），202（C-26），213（C-27），241（C-30），262（C-22），273（C-2），322（C-7），323（C-20），339（C-29），351（C-21），360（C-15），372（C-10），385（C-19），392（C-1），429（C-8），436（C-4），465（C-14），476（C-l4），482（C-5），531（C-30），539（C-9），653（C-16），668（C-23），735（C-28），736（C-3），856（C-13），1305（C-12），1342（C-11）。上述数据与文献报道的柴胡皂苷元F[6]的数据一致，化合物4鉴定为柴胡皂苷元F。

槲皮素（5）黄色粉末，mp>300℃，三氯化铁-铁氰化钾反应为蓝色斑点，盐酸-镁粉反应阳性。1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：619（1H，d，J=18 Hz，H-6），641（1H，d，J=18Hz，H-8），768（1H，d，J=18 Hz，H-2），755（1H，dd，J=84，24 Hz，H-6），690（1H，d，J=84 Hz，H-5）；13C NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：1476（C-2），1356（C-3），1757（C-4），1608（C-5），982（C-6），1639（C-7），934（C-8），1562（C-9），1032（C-10），1218（C-1），1151（C-2），1452（C-3），1466（C-4），1157（C-5），1199（C-6）。以上数据与文献报道的槲皮素[7]数据一致，故确定该化合物为槲皮素。

山柰酚（6）黄色针晶（甲醇），mp 251～252℃，三氯化铁-铁氰化钾反应为蓝色斑点，盐酸-镁粉反应阳性，锆盐枸椽酸反应颜色褪去，Molish反应阳性，说明可能是糖苷，且糖连在3位。酸水解，其中水层部分纸色谱示有葡萄糖存在。苷元进行1H NMR（DMSO-d6，400 MHz）测定，数据如下： δ：1247（1H，s，5-OH），1078（1H，s，7-OH），1010（1H，s，4′-OH），939（1H，s，3-OH），803（2H，d，J = 87 Hz，2′，6′-H），692（2H，d，J = 87 Hz，3′，5′-H），641（1H，brs，8-H），618（1H，br.s，6-H）。苷元部分氢谱数据与文献[8]对照一致，故鉴定化合物6为5，7，4′-三羟基黄酮-3-O-葡萄糖，即山柰酚3-O-葡萄糖。

芦丁（7）黄色针晶（甲醇），mp 223～224℃，三氯化铁-铁氰化钾反应为蓝色斑点，盐酸-镁粉反应阳性，锆盐枸椽酸反应颜色褪去，Molish反应阳性，说明可能是糖苷。酸水解，其中水层部分纸色谱示有葡萄糖和鼠李糖存在，苷元与已知化合物槲皮素进行共TLC，分别用三种展开系统展开，不同显色剂显色，其Rf值均相同，故鉴定该化合物为槲皮素-3-O-葡萄糖-鼠李糖，即芦丁。

β - 谷甾醇（8）无色针晶（甲醇），mp.170-171℃。与已知对照品β - 谷甾醇进行共TLC，分别用三种展开系统展开，不同显色剂显色，其Rf值均相同，故鉴定该化合物为β - 谷甾醇。（作者单位：1.武汉生物工程学院； 2.武汉生物工程学院现代教育技术中心）

参考文献：

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京：科学出版社，1979，55（1）：281.

[2]Li Hong-ying，Lu Chang-gen and Li Xiu-hua.Isolation and Indentification of Flavonoids from Aerial Part of Bupleurum tenue Buch-Ham-ex D.Don [J].Acta Bot.Sin.27（1）：75-79，1985.

李鸿英，陆长根，李秀华.1985.小柴胡黄酮的分离及结构鉴定[J].植物学报（英文版），27（1）：75-79，1985.

[3]Khetwal K S，Mani N，Pant N.Constituents of high altitude Himalayan herbs：Part Ⅺ-Xylitol and lignan from Buplearum tenue [J].Indian J Chem，39B：448-450，2000.

[4]Gonzalez AG，Estevez-Reyes R，Mato C，et a1.Isokaerophyllin，a butyrolactone from Bupleurum salicifolium.Phytochemistry，29：675-678，1990.

[5]Zhang WD（张卫东），Kong DY（孔德云），Li HT（李惠庭），et.o1.Study on chemical constituents of Erigeron breviscapus（I）[J].Chin.J Pharm.（中国医药工业杂志），1998，29（11）：498-500.

张卫东，孔德云，李惠庭等.灯盎花的化学成分研究（I）[J].中国医药工业杂，1998，29（11）：498-500.

[6]Ebata N，Nakajima K，Hayashi K，et.al.Saponins from the root of Bupleurum faleatum [J].Phytochemistry，1996，41：895-901.

[7]朱占军，潘瑞乐，斯建勇，符 颖，黄倩倩，锥叶柴胡化学成分研究[J].天然产物研究与开发，2008，20：833-835.

[8]莫顺燕，杨永春，石建功.桑黄化学成分研究[J].中国中药杂志，2003，28（4）：339.