明志胶囊对老年痴呆性模型大鼠学习记忆及脑组织AchE*和Na+-K+-ATP酶活性的影响

【摘 要】目的：研究明志胶囊对老年痴呆型大鼠脑组织学习记忆及脑组织ACHE和Na+-K+-ATP酶活性的影响。方法：采用AlCl3溶液连续50天(隔日1次)背部皮下注射，造成大鼠慢性铝中毒老年性痴呆模型，并给予明志胶囊灌胃治疗，Y型电迷路法检测大鼠学习记忆水平;生化检测脑内AchE､Na+-K+-ATP酶活性变化。结果：明志胶囊可明显提高衰老大鼠学习记忆水平，显著降低脑内AchE水平，提高脑内Na+-K+-ATP酶活性。结论：明志胶囊增强衰老大鼠学习记忆活动与改变脑内AchE､Na+-K+-ATP酶活性有关。

【关键词】：衰老 明志胶囊 学习记忆 AchE Na+-K+-ATP酶

【中图分类号】R96; 【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2008)4-0042-03

阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)作为常见的老年期痴呆类型，严重地威胁着老年人的健康，寻找有效的AD防治方法已成为医学界亟待解决的研究课题[1]。笔者使用AlCl3复制实验性AD大鼠模型，观察了明志胶囊对于该模型学习记忆的影响，测定了脑组织中乙酰胆碱酯酶(AchE)､Na+-K+-ATP酶活性的变化，对其抗衰老作用机理进行了初步探讨。

1 材料与方法

1.材料

1.1.实验动物：采用Wistar大鼠50只，体重180±20g，雌雄各半，由温州医学院实验动物中心提供。

1.1.药品及试剂：明志胶囊浓缩液由温州医学院药剂教研室提供，原药材购于温州医学院附属第一医院药房，经中药鉴定教研室主任林观样鉴定为正品药材，符合部颁或国家标准，组成：黄芪20g､西洋参10g､当归15g､川芎15g､枸杞子10g､三七粉10g､远志10g､菖蒲15g､首乌10g､淫羊藿10g。综合各味药的现代研究资料，工艺设计为：①方中三七和西洋参粉碎入药。②提取川芎､当归､菖蒲所含挥发油。③其余各味水煎，以淫羊藿苷､三七皂苷､黄芪甲苷的含量和药效学指标，筛选水提工艺的参数，经过预试验，宜用11倍量水提取3次，分别2小时､2小时､1.5小时。将上述所得提取液与提取挥发油的药液混合，浓缩､干燥，将挥发油用β-环糊精包合加入，考察适当的辅料制成胶囊剂。浓度为12.5g/kg，置冰箱备用;脑复康，批号：20050346(天津今世制药有限公司);AlCl3由温州九泰公司提供;乙酰胆碱酯酶(AchE)､Na+-K+-ATP酶试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.1.3 试验仪器：XD811型生化分析仪､XYJ80-2离心机､Y型电迷路

1.实验方法

1.2.动物分组及造模：将实验大鼠按体重随机分为5组，每组10只，分别为正常对照组，模型组，脑复康组， 明志胶囊小剂量组， 明志胶囊大剂量组。给药第5天开始，正常对照组背部皮下注射0.9%的生理盐水，其余各组均以1.5%AlCl3溶液，pH6.5，60mg/kg背部皮下注射，隔日1次，连续50天，造成慢性铝中毒老年性痴呆模型[2]。

1.2.给药及饲养：给予脑复康组0.84g/kg.d，明志胶囊大､小剂量组分别以12.5g/kg.d､6.25g/kg.d给予，以上各药均配成2ml液体，ig给药，连续60天，正常对照组和模型组给予等量生理盐水;普通饲料喂养。

1.2.3 标本采集及处理：第8w做Y型迷路实验(该装置一般分为三等份，分别称之为I､II､III臂，如以I臂为起步区，则II臂为电击区，III臂为安全区，训练时将大鼠放入起步区，操纵电击控制器训练大鼠获得遭遇电击时直接逃避至安全区为正确反应，反之则为错误反应，我们固定训练次数，记录10次训练中的正确与错误次数，24h后重试，作为记忆成绩)，学习记忆能力测试完毕，断颈处死迅速取脑组织200mg，加生理盐水2ml，制成10%脑组织匀浆，以4000r/min离心10-15min，取上清液按乙酰胆碱酯酶试剂盒说明操作，同时取上清液按Na+-K+-ATP酶试剂盒说明操作

1.2.4 统计学处理：各组实验数据均采用均数±标准差(x±s)表示，样本均数组间比较采用instat统计软件包进行处理。

2 结果

2.明志胶囊对AD大鼠学习记忆过程的影响大鼠应用1.5%AlCl3后，记忆能力明显降低，表现为在电迷宫内正确次数减少，准确率降低，模型组与各用药组之间存在显著性差异。电迷宫实验各用药组之间无显著性差异。结果见表1。

2.明志胶囊对AD大鼠脑内AchE､Na+-K+-ATP酶活性的影响：大鼠应用1.5%AlCl3后，脑内AchE活性明显升高，Na/K-ATP酶活性明显降低，模型组与各用药组之间存在显著性差异。各用药组之间无显著性差异。结果见表2。

3 讨论

AlCl3所致的退行性痴呆模型，已为大多数人所公认，表现为学习记忆能力下降，大脑皮层和海马等脑区神经递质的改变。学习记忆是大脑的高级功能，是构成人脑最高级能-智能的要素。目前已认为，学习记忆与中枢胆碱能神经系统关系极为密切，中枢胆碱能神经系统在学习记忆中起着非常重要的作用，中枢胆碱能通路是构成学习记忆的主要通路，乙酰胆碱(Ach)是其中最重要的神经递质，它由胆碱乙酰化酶合成，胆碱酯酶分解，通过Ach受体发挥生物学效应[3]。近年来研究表明，老化与AD病人脑组织胆碱乙酰化酶活性明显降低，胆碱酯酶活性明显升高，造成Ach含量不足，导致中枢神经系统功能障碍，出现学习和认知能力下降甚至丧失[4]。脑组织中Na+-K+-ATP酶存在于细胞膜上，通过水解ATP逆化学剃度转运离子，是维持神经元兴奋传导､突触传导细胞内环境的物质基础。老年痴呆产生大量自由基，可直接氧化酶蛋白氨基酸残基，使酶失活。ATP酶活性可影响神经元细胞内Na+的积聚，K+流失，细胞内环境紊乱，更加重细胞的损伤[5，6]。明志胶囊是依据中药补肾益气活血治则组方而成，方中黄芪､西洋参补气，黄芪大补元气，使气旺以促血行，祛瘀而不伤正。《神农本草经》列本品为：参补气而不伤阴，它有人参之功，而无温燥之弊，如《医学衰中参西录》所说：“西洋参性凉而补。凡欲用人参而不受人参温者，皆可以此代之。”当归､川芎､三七粉等活血。当归活血养血，有祛瘀而不伤好血之妙。正如《本草从新》所赞：“(当归)血滞能通，血虚能补，血枯能润，血乱能扶。”川芎古有“血中之气药”之称，它与三七粉共奏活血散瘀之功。远志､菖蒲安神益志，开通心窍。《神农本草经》有曰“(远志)益智慧，耳目聪明，不忘强志倍力。”“石菖蒲……开心孔､补五藏､通九窍､明耳目､出音声､久服轻身､不忘､不迷惑､延年。”《万病回春》亦说：“人若忘事多，用石草蒲､远志，每日煎汤服，心通万卷书”。首乌补肝肾､益精血。诸药合用共奏益气活血､醒脑开窍之功。本文从明志胶囊补肾益气活血的理论出发，探讨复方对治疗老年性痴呆的作用机理，实验性的研究了明志胶囊对模型老年痴呆大鼠的影响。实验结果表明，明志胶囊能明显提高模型老年痴呆大鼠的学习记忆能力，其机理与降低脑组织内AchE､升高Na+-K+-ATP酶活性有关。

参考文献

[1]谢宁，何秀丽，周妍研等.地黄饮子对老年痴呆模型大鼠行为学､AchE及Na+-K+-ATP､Ga2+-ATP酶活性的影响[J].中医药学刊，2004，22(7)1160-1163

[2]王北婴，李仪奎.中药新药研制开发技术与方法[M]. 上海科学技术出版社，2001，626-627

[3]Giancarlo P，Giancomo S. Nootropic drugs and brain cholinergic mechanism[J].Pro Neuro Psychopharmacal and Psychist，1989，13：77-78

[4]刘旺华，周小青，李花等.丹龙醒脑片对拟血管性痴呆大鼠脑组织AchE､ATP酶活性的影响[J].中西医结合心脑血管杂志，2003，1(7)378-379

[5]Jrgensen P L.Purication and characterization of(Na+-K+)-ATPase[J].Biochem Biophys Acta，1974，356：36-39

[6]谢静平.(Na+-K+)-ATPase的研究概况[J].生物化学与生物物理进展，1989，16：256-257

(收稿日期：2007.12.08)