白花木组织培养技术研究

[摘 要] 白花木的作用较多，在其培养中，组织培养技术是重要的培养手段，本文主要探究白花木组织培养技术，将植物的茎尖、腋芽置于培养基中，探究组织培养技术的成活率，通过分析，可以为白花木的组织培养提供一定的借鉴。

[关键词] 白花木 组织培养技术

[中图分类号] S792.99 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650（2017）02-0178-01

在对白花木的培养中，扦插、嫁接以及压条等技术虽然可以培养白花木，但是繁殖率较低，因而探究组织培养技术具有重要的意义。

1 实验方案培养基

1.1 最优启动培养基设计

在本次实验中，探究最优的启动培养基设计方案，采用改良MS、WPM，生长素采用BA0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L，细胞分裂素采用IBA0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L。附加30g/L蔗糖和0.07%琼脂，Ph5.6～5.8。在实验的理念中，选择4因素3水平正交试验，L9（34），共9个处理，在每个试管中，均接种一个外植体，每次处理28管，重复3次。

1.2 继代培养基设计

在初代培养基设计完成后，需要设计继代培养基，其是植物组织培养的重要阶段，关系着植物的繁殖和生长，在继代培养过程中，选择的材料为初代培养的苗，通过调整激素的含量，来提升芽苗的数量与质量。在实验中，依然采用L9（34），共9个处理，在每个试管中，均接种一个外植体，但是在处理中，每次仅仅处理10瓶，重复3次。

1.3 生根培养基设计方案

在经过继代培养之后，需要对外植体的生根培养方案进行设计，在选择芽苗的过程中，需要选择粗壮的芽苗，将基本培养基设计为1/2改良MS，选择IBA以及蔗糖的最佳配比，在实验过程中，同样采用4因素3水平正交实验设计，在每个试管中，均接种一个外植体，但是在处理中，每次仅仅处理15瓶，在40d后观察小苗的生根情况。

1.4 移栽方案设计

外植体生根后，经过一定条件的驯化，植物可以适应自然环境的发展，可以提升移栽的成果率。在实验过程中，当外植体成长到5cm左右，需要将无菌膜打开，逐步降低植物的环境温度，并且增强光照，在3d后，吸净并且移栽到土壤中，经过喷雾的保湿处理，在30d后计算其移栽的成活率。

2 实验材料与方法

2.1 实验材料

从成熟的白花木母株上提取茎尖、腋芽以及成熟叶片作为研究的外植体。

2.2 实验方法

2.2.1 初代培养

将采集的枝条经过水流的冲洗，去除表面的污染物，切取植物的茎尖、腋芽以及成熟叶片，运用洗洁精浸泡5min，之后采用清水冲洗1h，采用无菌滤纸吸净水分，用70%酒精在无菌室内浸泡5s，冲洗干净后，再用0.1%汞溶液浸泡5min，用无菌水冲洗5次，吸净水分，在工作台去掉包片，切成6*6mm的样本，置于培养基中，叶片分为正面和反面放置。

2.2.2 样本诱导与分化

在植物的诱导中，观察植物的污染率、枯死率以及存活率，在诱导40d后，可以直接诱导茎尖以及腋芽的一部分，部分样本底部切口向外膨胀，长出愈伤组织，上部生长成为芽，叶片正面放置的植物均枯死，未诱导出丛生芽，而叶片反面放置的植物中，1个生长出丛生芽，其余植物均枯死。

2.2.3 继代培养

在外植体的培养中，在培养基培养40d后，丛生芽生长到2cm，切割后置于增殖培养基继续培养20d，获取大量的丛生芽。

2.2.4 生根培养

切取丛生芽，选择高度为3-4cm的苗，置入生根培养基进行培养。

2.2.5 培养条件

采用MS基本培养基，附加植物生长调节剂。采用改良MS、WPM，生长素采用BA0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L，细胞分裂素采用IBA0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L。培养的PH值为5.8，蔗糖浓度为3%，琼脂的浓度为0.6%，培养的温度为25℃，光照时间为12h，光照度保证在2000lx。

3 实验结果与分析

3.1 灭菌时间的影响

在白花木的培养中，不同的灭菌时间对白花木的诱导具有较大的影响，根据实验结果显示，在诱导的过程中，随着霉菌时间的不断延长，植物的污染数量会呈现逐渐降低的趋势，在9min以后，会趋于0；在枯死数量方面，随着灭菌时间的不断延长，枯死数量会呈现不断增加的趋势，并且在6min左右为最佳。在诱导率方面，随着时间的延长，诱导率呈现先增加后降低的趋势，并且在6min达到最佳的T导率。总之，由实验可以看出，在白花木的培养中，灭菌时间设置在6min最为合理。

3.2 接种方式对分化的影响

在外植体的培养过程中，叶片的接种方式对诱导具有较大的影响，根据本次的实验分析发现，在叶片正面放置时，接种的存活率为0，而反面放置时，接种的存活率为6.7%。可见，在植物的培养中，外植体的选择应该尽量选择茎尖以及腋芽，在必须选择叶片的情况下，应该尽量选择反面放置，这样可以提升植物的诱导分化率。

3.3 丛生芽的分化与激素浓度关系

在本次实验中，将丛生芽置于不同浓度的培养基中，发现如果激素的浓度较低，则会限制丛生芽的繁殖速度，如果激素的浓度过高，则会导致丛生芽底部产生愈伤组织，影响上部的生长。

3.4 生根移植

在植物的培养中，切取3-4cm的苗进行生根移植，经过研究发现，65%的小苗可以生长出较为完整的植株，经过30d的培育后，可以将生根苗进行继续移植。

本文主要探究白花木的组织培养技术，将植物的茎尖以及腋芽置于激素不同的MS中，发现在最佳培养基下，其诱导率可以达到66.7%，并且其灭活时间应该设置在6min左右。总之，只有采用科学的组织培养技术，才可以提升白花木的成活率。

参考文献

[1]张亮亮，柳新红，林新春，等.白花树组织培养技术研究[J].浙江林业科技，2013，（03）：16-19.