CD55、CD59、CD34对PNH早期诊断研究应用

王 颖 王永才 王忠利 赵成艳 王 敏

【摘要】 目的 探讨CD55、CD59、CD34抗原对阵发性血红蛋白尿（PNH）的早期诊断的价值，寻找PNH早期诊断敏感指标进而达到早期发现、早期诊断、早期治疗的目的。方法 应用流式细胞仪测定PNH综合症患者的CD55、CD59、CD34抗原变化关系，并与PNH、AA等疾病组以及正常对照组CD55、CD59、CD34抗原相互变化关系，经过统计学处理，找出相关性。结果 结果表明PNHCD55、CD59、CD34抗原较AA及其他疾病组及正常对照组明显减低，并与溶血程度呈正相关，且早于其他溶血指标。结论 CD55、CD59、CD34抗原表达率可做PNH早期诊断最敏感指标，并与预后转归密切相关。

关键词：CD55 CD59 CD34 PNH 诊断

文章编号：1008-6919（2006）07-0070-03

中图分类号:R730.21

文献标识码：A

The study of application of CD55、CD59、CD34 on the early diagnosis of PNH

[ Abstract ] ObjectiveTo study the significance of CD55、CD59 and CD34 in the early diagnosis of paroxysmal nocmmal hemoglobin nuria(PNH),and to search for a sensitive marker of the early diagnosis , so as to achieve the objective of early fmding, early diagnosis and early treatment.MethodCD55、CD59 and CD34 in PNH were detected by Flow cytometry, the relationship among CD55、CD59 and CD34 in PNH, AA patients and control group were studied to fred out their statistic relevance.ResultThe levels of CD55、CD59 and CD34 of PNH were significantly lower those AA, of group and any other diseases and control group, the markers were positively correlated with hemolysis degree and their increase were earlier than other markers of hemolysis.ConclusionCD55、CD59 and CD34 antigens may act as the most sensitive marker of early diagnosis in PNH syndrome, and have a close correlation with prognosis.

Keyword： CD55CD59CD34PNH

再生障碍性贫血是常见血液病，其中11.1%-28.8% AA 患者可演变PNH，而且1/3PNH病可有AA临床表现，传统方法通过酸溶血、糖水实验诊断，但敏感性、特异性较差，本文应用流式细胞仪检测患者CD55、CD59、CD34抗原表达的数量，并与PNH、AA及其他疾病对照组及正常组比较，探讨PNH早期诊断及鉴别诊断敏感指标，现报道如下：

资料与方法

1.研究对象：收集我院1998年8月-2004年3月门诊、住院患者192例，其中男88例，女104例，年龄16-86岁，平均49岁，各种贫血疾病均按国内外统一诊断标准，同时选50名健康人做正常对照组（体检证实）其中男21例，女29例，年龄19-68岁，平均42岁。

2.方法：⑴仪器：流式细胞仪（美国BD公司）；⑵试剂：CD55、CD59、CD34（库尔特公司提供）；⑶方法：外周血肝素抗凝0.5ml，加入荧光标记单克隆抗体20μl,避光20min,加溶血素10min,再加去离子水0.5ml,10min,用pH7.4PBS0.5ml洗涤2资助，上机检测，测定阳性细胞表达百分率；⑷锌原卟啉（ZPP）测定仪，国产ZPP-3800型血液锌原卟啉测定仪；⑸Ham、P-Hb、Hb-Hp等其他溶血检测指标，按照国内外统一溶血检验操作规程，王永才教授编《血液骨髓细胞检验诊断学》，1995年大连出版社出版。

结果

详见表1、表2。

1.PNH CD55、CD59、CD34 抗原阳性表达率：从表可见，PNH CD55、CD59抗原阳性表达率较正常对照组及其他疾病组明显减少，异常率明显增多，粒细胞膜上CD55、CD59异常细胞分别>5%，分别为（53.4%-56.8%）,CD59(27.8%-35.5%),明显高于正常组和其他疾病组，经统计学处理有显著差异，P

2.PNH Ham、糖水、罗氏试验及其他溶血指标异常改变：Ham试验在20例PNH患者中有16例阳性，糖水试验除了PNH全部呈阳性反应外，其他贫血也有不同程度溶血反应，假阳性高达36.4%-57.1%，本文应用溶血定量试验，除了PNH外，无一例假阳性反应，与CD55、CD59、CD34较酸溶血及糖水试验更敏感、更可靠。

讨论

PNH是造血干细胞基因（PIG-A）突变的单克隆性疾病。其异常细胞膜上糖基磷脂酰肌醇（GPI）生成障碍，导致PNH患者膜上GPI链接锚蛋白异常，如体内缺乏补体衰变加速因子CD55及膜反应性溶解抑制物CD59缺陷，导致红细胞加速破坏，而发生血管内溶血。近年临床研究发现，PNH与AA关系密切，部分AA（10.4%-28.8%）的患者可转化为PNH，并且还有20%-38.5%的PNH患者可有再障表现或演变成再障，因此，研究开发PNH形成机理及早期诊断指标具有重大意义[1，2]。

1.PNH形成机理：PNH异常克隆是由于骨髓严重损伤，造成基因不稳定而发生PIG-A基因的突变，并且是在造血微环境特定条件下产生的免疫介导骨髓损伤，是再障发病的重要机制之一，膜表面的GPI链接蛋白CD、CD59都具有与T细胞结合并激活T细胞的作用[3，5，7，8]，而PNH异常细胞由于PIG-A基因突变造成细胞表面GPI链接蛋白的缺失，从而有利于细胞逃脱机体免疫系统的杀伤而生存下来，导致异常克隆的激活、扩展[2，6，10，11]。PNH异常克隆往往是在正常造血严重受损基础上形成的，因而起消长与体内正常造血状态有关，在某些不利正常造血而有利于异常克隆扩增的条件下，PNH往往发生、发展，而在另一些条件下，PNH得到恢复，则PNH可以减轻乃至消失[2，5]。从上可见，PNH、AA二者关系密切，均与细胞膜表面GPI链接蛋白CD55、CD59缺陷有关[1，3]。

2.PNH的诊断标准：按国内外有关PNH诊断标准[1，4]：⑴临床表现符合PNH；⑵实验室检查Ham、糖水实验、蛇毒溶血实验、尿Rous等项实验中，凡符合下属任何一种情况即可诊断。①两项以上阳性；②一项阳性但多项具备下列条件：两次以上阳性或一次阳性，但操作正规，有阴性对照，结果可靠，即使复查仍阳性；有溶血的其他直接和间接证据，或肯定Hb尿出现；能排除其他溶血，特别是遗传球形红细胞增多症、自免贫、G6-P缺乏溶血、PCH等。

3.CD55、CD59、CD34可做AA-PNH早期诊断及特异性诊断指标。⑴CD55、CD59、CD34不同窗口的细胞抗原异常差异较大，一般PNH患者中GPI锚链蛋白缺陷可同时出现红细胞、粒细胞、单核细胞、血小板、部分淋巴细胞，原幼红细胞表面，PNH、AA患者粒细胞、单核细胞CD55、CD59、CD34可早于红细胞出现，这是由于粒细胞虽然有GPI锚链蛋白的异常，受影响较小且增殖旺盛，因此异常细胞可先于红系被检测出来，与红细胞相比，粒系异常率略高，也容易被检测出来，可用PNH早期诊断及鉴别诊断指标，淋巴细胞及血小板敏感度较低，一般不用。但在恢复期粒细胞、红细胞消失，由于淋巴细胞寿命长，可做疗效观察及回顾必诊断指标[2，3]。

骨髓因原幼细胞过多，不如周围血敏感，因此，临床多选用周围血检测粒细胞窗口的CD、CD59抗原表达率。CD34是造血干细胞，故周围血含量极少，文献报告仅为0.15%,脐血为0.83%，骨髓CD34较高（1.68%），一般选用骨髓为佳。CD34由于AA患者干细胞生成缺欠，故AA患者本组最低，仅为0.15%,而AA演变PNH时，由于细胞逃避机体免疫系统的损伤导致异常克隆增生、扩增，使造血干细胞得到一时恢复或发展，故CD34在PNH明显回升，并伴有CD55、CD59抗原明显减低，是PNH早期诊断重要佐证。AACD55、CD59抗原表达率正常，而CD34造血干细胞明显减少，与前者有明显区别。

⑵CD55、CD59二者关系：CD55补体是衰亡加速因子，CD59是膜补体溶血抑制因素，二者对膜补体均有较强的破坏作用，但最近研究表明CD59其对膜溶解破坏抑制作用更强，故CD59较CD55抗原表达率更敏感[1，4，8]。

⑶CD55、CD59、CD34与酸溶血、糖水试验及其他相关试验关系：Ham、蛇毒溶血试验特异性较强，但敏感性较差，本文看到2例早期PNH以及4例AA-PNH早期酸溶血试验及蛇毒试验均为阴性，但CD55、CD59却呈明显减低，异常细胞出现率>5%（26.8-63.4%）后，酸溶血及其他相关试验才呈阳性或弱阳性反应，而且其敏感度较传统方法高32倍之多，仅有3%微量异常细胞即可检出，因此CD55、CD59、CD34可做AA-演变PNH早期敏感准确诊断指标[1，3，7]。

糖水试验，我们曾用5种不同糖类（10%葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖），并对PNH、AA、溶血、MDS、ACD、MA、AG、LAK、HS不同全血细胞减少患者进行溶血检测，

为阳性，其阳性程度与临床诊断接近，因此我们建议临床在缺少流式细胞仪，不能做CD55、CD59、CD34的情况下，可用糖水基本溶血强度检测，有利于PNH的早期诊断。

⑷CD55、CD59、CD34可做疗效观察、预后转归重要指标：由于传统酸溶血、糖水、PNH、Hb-HP等诊断指标，其用血量大，方法复杂，时间长。影响因素多，操作不规范，不能质控，检测结果相关较大，而流式细胞仪是高精密仪器，专人操作、标准化、电脑显示，具有结果准确，重复性高，便于疗效观察，预后转归、跟踪随访等优点，并且CD55、CD59、CD34缺陷程度与患者溶血程度及患者临床表现密切相关，如CD55、CD59缺陷明显，证明患者红细胞补体明显增多，PNHⅡ、Ⅲ异常增多，说明异常克隆在体内占优势，提示PNH处于频发的血红蛋白尿期及临床危重期，反之，CD55、CD59、CD34抗原表达正常，提示患者异常细胞消失，临床处于恢复期[1，3，6]。值得注意的是，PNH当发生急性大溶血，由于异常细胞大量破坏，或输入大量新鲜正常血，CD55、CD59、CD34抗原表达也可以正常。

总之CD55、CD59、CD34检测指标能为PNH提供更为敏感、可靠、准确的早期诊断指标和鉴别诊断指标，同时又在反映病情的变化、疗效、转归和指导治疗方面具有传统方法无法比拟的优势的特点，并对探讨AA、AA-PNH、PNH发病机理有重大意义。

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