时间：2022-08-20 11:33:40
【摘要】 目的：建立测试复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺含量的高效液相方法，并对此方法进行系统的方法学验证，以确保应用该方法测试的结果准确、可靠。方法：采用蒸发光散射检测器，色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，Agilent，美国），流动相：甲醇-1%醋酸铵缓冲溶液（用醋酸调至pH 3.5）（22∶78），流速：1 ml/min，检测温度为104 ℃。结果：盐酸金刚烷胺在20～120 μg/ml范围内线性关系良好，相关系数为0.9990（n=6）；本法灵敏度高，精密度和重复性良好；平均加样回收率为101.96%，RSD为0.89%；供试品溶液室温放置8 h稳定。结论：本方法测定盐酸金刚烷胺的含量准确、可靠，测得的盐酸金刚烷胺灵敏度高，操作简单、用时短，可用于复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺的含量测定。
【关键词】 蒸发光散射检测； 复方氨酚烷胺胶囊； 盐酸金刚烷胺； 含量测定
中图分类号 R927.2 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2013）29-0131-02
复方氨酚烷胺胶囊由对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏、人工牛黄、咖啡因几种主要成分组成，是临床常用的解热镇痛药。中国药典中盐酸金刚烷胺的含量测定方法采用的是滴定法[1]，该方法操作较为繁琐，认为误差较大。为更有效、快速、可靠的测定盐酸金刚烷胺含量，2006年修虹等[2]建立了HPLC-ELSD方法测定复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺的含量。笔者在此基础上对盐酸金刚烷胺的测定方法进行了适当的改进，经过方法学验证，该方法回收率、准确度及重现性均为良好，且灵敏度与峰形更好，现报告如下。
1 实验材料
1.1 仪器与设备
Agilent 1260型高效液相色谱仪（配有脱气机、自动进样器、恒温箱、液相色谱泵、柱温箱及蒸发光散射检测器），由Chemstation化学工作站系统控制（Agilent，德国）； METTLER TOLEDO AB135-S型十万分之一天平（METTLER，瑞士）；XW-80A涡旋混合器（上海沪西分析仪器厂）；TGL16M型冷冻离心机（长沙英泰仪器有限公司）；AHL-2001-P痕量型分析型超纯水机（艾科浦，重庆颐洋企业发展有限公司）。
1.2 试药与材料
盐酸金刚烷胺对照品：由中国药品生物制品检定研究院提供，批号：100426-200301；复方氨酚烷胺胶囊：由四川某制药有限公司提供，批号：130408、1304010、130412、130415、130417；醋酸铵：天津科密欧化学试剂有限公司，分析纯，批号：120315；醋酸：天津科密欧化学试剂有限公司，分析纯，批号：121009；甲醇：美国Tedia公司，色谱纯，批号：1202257；纯水：自制去离子超纯水。
2 方法
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，Agilent，美国）；保护柱：Gemini C18（4 mm×3.0 mm，10 μm，Phenomenex，美国）；流动相：甲醇-1%醋酸铵缓冲溶液（用醋酸调至pH 3.5）（22∶78）；流速：1 ml/min；蒸发光散射检测器检测温度为104 ℃，雾化气（N2）流速：3.0 L/min；柱温：35 ℃；进样量：10 μl。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取盐酸金刚烷胺对照品100 mg，置于100 ml容量瓶中，加适量超纯水溶解后，再用水稀释至刻度线，摇匀，即得浓度为1 mg/ml的盐酸金刚烷胺对照品储备溶液，置于4 ℃冰箱保存。
2.2.2 供试品溶液的配制 取复方氨酚烷胺胶囊10粒，精密称定内容物，研细成粉末，精密称取适量（约相当于盐酸金刚烷胺100 mg），置于100 ml的容量瓶中，加20 ml水，超声约15 min，使盐酸金刚烷胺充分溶解，摇匀，再用水定容至刻度，充分摇匀后用0.45 μm的微孔滤膜过滤后，取续滤液，精密移取续滤液5 ml置于50 ml容量瓶中，加水定容至刻度线，摇匀。即得供试品溶液。
2.3 系统适用性考察
分别取盐酸金刚烷胺对照品溶液、供试品溶液适量，进行热破坏试验后，在上述色谱条件下各进样10 μl。记录色谱图。结果得出，盐酸金刚烷胺峰的理论塔板数均不低于2000，盐酸金刚烷胺峰周围无干扰峰干扰测定，分离度符合要求，对照液与供试液中盐酸金刚烷胺峰的保留时间一致，基质不干扰测定，本方法系统实用性良好。典型色谱图如下图1所示。
图1 对照品溶液和供试品溶液色谱图
2.4 线性关系考察
精密移取浓度为1 mg/ml的盐酸金刚烷胺对照品储备溶液适量，用水分别稀释成含盐酸金刚烷胺浓度为120、100、80、60、40、20 μg/ml等6个浓度级别的系列对照品工作溶液，进样10 μl。记录各浓度盐酸金刚烷胺对照液的峰面积。结果得出，盐酸金刚烷胺在20～120 μg/ml范围内线性关系良好，以盐酸金刚烷胺浓度为横坐标，所得峰面积为纵坐标，得线性回归方程为Y=518.3X+26.11，相关系数为0.9990（n=6）。
2.5 精密度考察
配制盐酸金刚烷胺浓度为50 μg/ml的对照品工作溶液，平行配制5份，分别进样10 μl，记录峰面积。结果得出5份盐酸金刚烷胺峰面积RSD值为0.72%，表明精密度良好。
2.6 重复性考察
取同一批次的供试品，按照“2.2.2”项下方法平行配制成6份供试品溶液，进样10 μl，记录峰面积。结果得出6份盐酸金刚烷胺峰面积的RSD值为0.84%，表明该方法重现性良好。
2.7 加样回收率考察
精密移取已知浓度的供试品溶液1 ml，平行5份，分别加入50 μg/ml盐酸金刚烷胺对照品工作溶液1 ml，混匀，进样并记录峰面积。本实验所得盐酸金刚烷胺的平均加样回收率为101.96%，RSD为0.99%。
2.8 稳定性考察
取同一份供试品溶液，分别在室温下放置0、4、6、8 h后测定，记录色谱峰。结果得出，在室温下放置8 h后测定的RSD值为1.22%，可说明盐酸金刚烷胺供试品溶液室温放置8 h稳定。
2.9 样品含量测定
将5个批次的待测样品按上述“2.2.2”项下方法配制成供试品溶液，进样，记录峰面积，采用外标法计算复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺的含量。具体结果见表1。
表1 含量测定结果
批号 盐酸金刚烷胺（标示量%） RSD（%）
130408 99.20
130410 101.40
130412 99.78 1.03
130415 98.92
130417 99.03
3 小结
本文建立了一套灵敏度高，精密度和重现性良好，回收率高的高效液相方法，用于测定复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺的含量。一方面有效解决了中国药典中滴定法测定盐酸金刚烷胺人为误差大，测定效率低的问题，另一方面，在修虹等人研究的方法的基础上，对方法条件进行适当的优化，盐酸金刚烷胺的响应有所提高。总之，该方法适用于复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺的含量测定。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2010：736.
[2]修虹，黄榕珍，付梅春.HPLC-ELSD法测定复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺及对乙酰氨基酚的含量[J].中国药品标准，2006，7（1）：23-25.
（收稿日期：2013-05-07） （编辑：连胜利）