关于HIV抗体检验中酶联免疫吸附法和快速法的比较

(辽宁省鞍山市铁西区卫生防疫站辽宁鞍山114012)【摘要】艾滋病是当前严重威胁人类健康和生命的一种传染病,由早期的静脉吸毒者共用注射器传播,发展到当今性传播和母婴垂直传播,即向普通人群的传播, 艾滋病的流行给人类的健康、生命安全以及经济社会发展带来了严重影响。最常用的艾滋病诊断方式是进行抗体检测，要了解和掌握HIV的感染情况，关键就是实验室的检测技术，下文就关于在HIV抗体检测中酶联免疫吸附法和快速法的比较分析及其注意事项的总结。【关键词】酶联免疫吸附法;胶体金快速法;HIV抗体;检测【中图分类号】R446.6【文献标识码】B【文章编号】1004-5511（2012）04-0594-01 一、引言进入20世纪90年代，HIV在我国迅速传播，感染人数成倍增长，艾滋病的防治已经成为全世界面临的重要课题。HIV感染的诊断以HIV抗体的检测为金标准，为了达到早诊断、早治疗、早管理的目的，全国先后建立了大量的HIV抗体初筛实验室，对HIV抗体检测的准确性要求也越来越高。现简述关于我站用酶联免疫吸附法及胶体金快速法检测HIV抗体的思考。二、酶联免疫吸附法对HIV抗体的检测HIV抗体检测是发现HIV感染的有效途径，酶联免疫吸附法（ELISA）是一种敏感性高、特异性强、重复性好的试验诊断方法，由于其试剂具有稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适用于 规模筛查试验，又可以使用于少量标本的检测等优点，一直以来，成为艾滋病初筛试验室检测HIV抗体普遍使用的方法之一 1、试剂的选择:试剂盒的质量直接影响到结果的准确性，因此，要选择灵敏度和准确度较高，而且特异性较强的试剂盒。选择试剂盒的原则是，必须是经国家食品药品监督管理局注册批准，批检合格，临床评估质量优良，在有效期内的试剂，并经常了解同行对试剂盒使用的反馈情况一级卫生部临床检验中心对参加室间质评实验室试剂盒的综合评价。本站检测HIV抗体主要采用北京万泰生物药业有限公司试剂盒。另外，也应该注意试剂的保存，试剂从冰箱中取出后，应先平衡到室温后再使用，用多少取多少，防治反复冻融。2、仪器设备的校准与检定: 对实验结果起关键作者用的仪器，水浴箱、洗板机和酶标仪等均需按周期进行计量检定，并在检定周期内进行期间核查，同时，建立仪器设备的维护及操作规程，进行日常维护，保持仪器设备的最佳状态。3、样品样品的采集与保存: 样品采集时候应该尽量避免溶血和细菌污染、霉变，否则会导致假阳性。尽量不用抗凝血，保存时间不宜太长，一般2°C-8°C冰箱中保存一周内完成检验，长期保存最好在零下20oC度低温冰箱存放，并避免反复冻融，浑浊或有沉淀的样品要离心。作HIV抗体检测的血样不宜用塑料试管，应用玻璃试管装。4、检测中关键点的控制：（1）加样：微孔板条从冰箱中取出后应平衡至潮气干尽方可使用，用微量加样器按规定量加入孔底，避免加在孔壁上部，尽量慢慢快放，以免溅出或产生气泡，同时不要使吸头碰到酶标板孔上的包被抗原。（2）温育：调节水溶箱至合适的温度，不能过高也不能过低，放在水溶箱的隔板上或放在温箱的温盒里均可。（3）洗涤： 一定要用洗板机，防治污染。注意洗板机上的每一个放液和吸液纤孔都一致的插入孔底，将孔内液体吸干，严格按照要求设置一定的浸泡时间和洗涤次数，不要将各种试剂盒的洗涤液混用。（4）.显色： 严格按照说明书规定的时间温度恒定反应后终止，不可以随意更改。在加液和混均过程中避免产生气泡，洗涤后反应板用纸吸干后再置酶标液中比色。5、实验室内质量控制： 室内质控一般使用质控品和质控图。联合应用即刻法质控图法进行室内质控也是一种很使用的方法，可以借鉴。并积极参加室间质控活动，了解本实验室的实验误差情况。三、胶体金快速法对HIV抗体的检测与ELISA法相比，胶体金快速法具有快速，安全，操作简单等有点，但是在实际应用中要注意假阳性和假阴性结果。本站主要采用上海科华的胶体金快速检测法检测HIV抗体，其原理是采用HIV特异性抗原gp160和gp36等包被微孔反应板，用gp36、gp41标记辣根过氧化物酶。当待测标本中存在HIV抗体时，该抗体与固相化的抗原结合于反应板上，并进一步与酶结合物相结合，在TMB底物参与反应的情况。对于弱阳性样本的处理要慎重，不能轻易舍去，宜用正常血清稀释后与原液对照一起测定，往往可以收到很好的效果。四、结论ELISA法是实验室检测HIV抗体普遍使用的方法，但影响ELISA法测定结果的因素很多。与ELISA法相比，胶体金快速法具有快速，安全，操作简单等优点，但是在实际应用中要注意假阳性和假阴性结果。将胶体金快速法和ELISA法联合使用，并力求控制各个影响因素，可以大大降低假阳性和假阴性结果，提高检测的准备性，为艾滋病的防治工作提供更有效的依据。参考文献［1］中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范（2009年版）.北京：中国疾病预防控制中心，2009：6.［2］李秀华，宋爱京，王佑春.HIV抗体快速诊断试剂与酶联免疫诊断试剂灵敏度比较.中国生物制品学杂志，2004；17（3）：175-176.［3］胡静云，陈善昌.胶体金快速检测法与ELISA法检测HIV抗体效果观察.华夏医学，2009；22（3）：488.