固相萃取—超高效液相色谱—质谱联用技术检测大鼠血浆中T—2毒素及其主要代谢产物

摘 要 应用固相萃取-超高效液相色谱-三重四极杆-线性离子阱串联质谱技术，建立了高灵敏度的大鼠血浆中单端孢霉烯族（T-2）毒素及其5种主要代谢物的分析方法。在优化的固相萃取条件下，大鼠血浆经HLB固相萃取柱净化富集后，以XDB-C18色谱柱（50 mm×4.6 mm， 1.8 m）分离，以5 mmol/L乙酸铵溶液和甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱，以玉米赤霉酮为内标，在正离子多反应监测模式下对各分析物进行定性和定量分析。各分析物在0.1～500.0

g/L范围内线性良好（R2>0.997）；检出限介于0.02～0.3 g/L之间；加标回收率为93.5%～120.3%；相对标准偏差均小于13%。本方法快速、重现性好、灵敏度高，已成功应用于T-2毒素中毒的溯源性研究。

关键词 单端孢霉烯族毒素；代谢物；固相萃取；液质联用；血浆

1 引 言

单端孢霉烯族毒素是自然界存在的最危险的食品污染源之一[1]。在数十种单端孢霉烯族毒素中，T-2毒素毒性最强，极易污染农作物和储存的粮食。T-2毒素对哺乳动物的半数致死量为 3～10 mg/kg BW[2]。我国规定了配合饲料中T-2毒素的允许量≤1 mg/kg[3]。T-2毒素在许多动物体内代谢较快，30 min后即检测不到原型，因此，T-2毒素在体内的毒性作用主要由其代谢产物所引起[4]。一般认为，T-2结构中的环氧基团是其毒性基团，其体内主要代谢产物结构中的环氧环仍然存在，或多或少表现出毒性作用[5]。T-2毒素进入机体后，主要的代谢方式如图1解所示。

图解1 T-2毒素的主要代谢方式Scheme 1 Main metabolic ways of T-2 toxin

目前，检测T-2毒素方法有薄层色谱法[6]、酶联免疫法[7]、气相色谱法[8]、气相色谱-质谱联用法[9～11]、液相色谱法[12～14]及液相色谱-质谱联用法[15～24]等，其中，液相色谱-质谱联用法因其灵敏度高、样品无需衍生化处理等优点，近几年被广泛使用。

研究T-2毒素在动物体内的代谢途径及其主要代谢物、毒性化合物和残留标志物，将有助于T-2毒素中毒后的溯源性研究。目前，有关生物体液（包括尿液、胆汁和血浆）中的单端孢霉烯族毒素[23，24]的测定仅有少数报道，针对T-2毒素及其5种主要代谢产物的同时测定尚未见报道。本研究建立了超高效液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱同时检测血浆中T-2毒素及其主要代谢产物的方法。方法简单快速，回收率高，准确可靠，对T-2毒素中毒的溯源性检测具有重要意义。2 实验部分

2.1 仪器与试剂