龙葵药材薄层鉴别研究

[摘要] 目的 研究中药龙葵的薄层鉴别方法。 方法 依据现行《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B试验方法考察了不同提取方法、薄层板、展开剂、显色剂下龙葵的薄层鉴别方法。 结果 用硅胶G薄层板，二氯甲烷-甲醇-氨水（8∶1.5∶0.4）为展开剂，以10%硫酸乙醇试液显色，再置紫外灯（365 nm）下检视斑点，分离效果最佳。 结论 本实验研究可作为龙葵药材质量标准的修订内容。

[关键词] 龙葵；质量标准；薄层色谱法；鉴别

[中图分类号] R931.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）04（c）-0106-04

中药龙葵（Solani nigri herba）为茄科茄属一年生草本植物龙葵Solanum nigrum L.的新鲜或干燥地上部分，俗称黑星星、黑天天，我国各地均有分布，易采集。该药苦、微甘，寒；有小毒[1]，主要含澳洲茄边碱（solamargine），澳洲茄碱（solasonine）等生物碱类成分和黄酮类成分[2]。夏、秋二季割取全草，拣净杂质，鲜用或晒干。龙葵具有清热解毒、消肿散结、活血利尿的功效，用于疮疖肿痛、跌打扭伤、小便不利、癌肿、膀胱炎、痢疾、咽喉肿痛等多种疾病。目前，《中国药典》1977年版和《山西省中药材标准》1987年版等地方标准对龙葵药材规定了性状鉴别，可控性差。鉴于上述原因，本文对10批龙葵药材进行了薄层鉴别研究，探索了龙葵简单易行的鉴别方法，为龙葵药材质量控制提供了依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

KQ-500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），HH-2型数显恒温水浴锅（金坛市科析仪器有限公司），QE-100二两装高速中药粉碎机（武汉市屹立工具有限公司），KFBW2电子天平（浙江凯丰集团有限公司），薄层层析硅胶G（化学纯，青岛海洋化工厂分厂），薄层层析硅胶H（化学纯，青岛海洋化工厂分厂），薄层层析硅胶H（化学纯，青岛基亿达硅胶试剂厂）。

1.2 试药

甲醇（批号：20080901，分析纯，天津市大茂化学试剂厂），二氯甲烷（批号：20111118，分析纯，天津市北辰方正试剂厂），乙酸乙酯（批号：20070703，分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司），氨水（批号：20080421 ，分析纯，天津时大茂化学试剂厂），95%乙醇（批号：20110226，分析纯，天津市北辰方正试剂厂），硫酸（批号：051109，分析纯，天津市翔宇化工工贸有限责任公司），其他试剂均为分析纯。

本实验所用的龙葵10批药材经山西药科职业学院副教授刘林凤鉴定为茄科植物龙葵Solanum nigrum L.的干燥地上部分。药材信息见表1。

2 方法与结果

2.1 实验条件的考察

薄层鉴别的影响因素包括有效成分的提取方法、薄层层析板的种类、展开系统的组成、显色剂、点样量等。试验分别对以上影响因素进行了考察，以获得理想的薄层鉴别条件。

2.1.1 提取方法的考察

2.1.1.1 方法一 取本品粉末3 g，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解即得。

2.1.1.2 方法二 取本品粉末3 g，加80%乙醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解即得。

实验结果表明两种方法的提取效果好，两种方法所得斑点清晰，分离度好，基本无差别。但方法一较方法二简单。最终确定以方法一制备供试品溶液。分离鉴别见图1。

1：80%乙醇提取；2：甲醇提取；展开剂为二氯甲烷∶甲醇∶氨水（8∶1.5∶0.4）

2.1.2 层析板的考察

采用羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板、硅胶H板作为固定相，所得药材斑点均显色清晰且分离度好，确定以硅胶G板进行薄层鉴别。见图2、3。

2.1.3 展开剂的考察

采用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水（8∶2∶0.4）、二氯甲烷∶甲醇∶氨水（8∶2∶0.4）、二氯甲烷∶甲醇∶氨水（8∶1.5∶0.4）为展开剂，其中以二氯甲烷∶甲醇∶氨水（8∶1.5∶0.4）为展开剂的展开效果最好，所得斑点多、清晰、圆整、分离度好。根据试验结果采用二氯甲烷∶甲醇∶氨水（8∶1.5∶0.4）为展开剂。见图4、5、6。

2.1.4 显色剂的考察

10%硫酸乙醇显色，斑点清晰；再置于紫外灯（365 nm）下检视，与对照品药材相同位置出现同颜色荧光斑点，且斑点清晰、数量较多。故采用硫酸乙醇显色后，再置于紫外灯下检视的方法。见图7、8。

2.1.5 点样量考察

取对照药材粉末3 g，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解。分别吸取2、5、10 μL点于同一薄层板上，以二氯甲烷∶甲醇∶氨水（8∶1.5∶0.4）为展开剂。硫酸乙醇显色后置于紫外灯下检视，以5 μL点样量的斑点最清晰、圆整，故定点样量为5 μL。见图9。

2.2 耐用性考察

观察在不同厂家生产的薄层板上的层析效果。将相同的供试品溶液和对照药材溶液，分别点样于青岛市基亿达硅胶试剂厂生产的薄层板、青岛海洋化工厂分厂生产的薄层板上，用相同的展开系统展开，结果显示两个薄层板上的展开效果均较理想，所得斑点清晰，且分离效果好。见图10、11。

2.3 实验结果

根据以上实验，确定龙葵的薄层鉴别方法为：取本品粉末3 g，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取龙葵对照药材3 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录Ⅵ B试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-氨水（8∶1.5∶0.4）为展开剂，取出，吹干，喷以10%硫酸乙醇试液，加热至斑点显色清晰，再置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。

3 讨论

3.1 样品的采集与收集

本实验为山西省中药材地方标准的研究内容之一。课题组从山西各地采集到5批样品，从河北和山西药材市场收集到10批样品，在15批样品中选择了地域不同、采集时间不同的10批有代表性的药材进行实验，可靠性强。

3.2 显色方法的确定

本实验曾用5%硫酸香草醛乙醇溶液作为显色剂，但斑点少，也不清楚，后又改用改良碘化铋钾试液显色，但龙葵中生物碱含量低，且药材中叶绿素干扰大，斑点不清晰，又改用10%硫酸乙醇显色斑点清晰，但数量少，吹干后继续在紫外灯下（365 nm）检视斑点分离效果佳，确定选用此种显色方法。

3.3 展开剂的选择

薄层条件以乙酸乙酯-甲醇-氨水（8∶2∶0.4）为展开剂，分离效果差[3-4]；以二氯甲烷-甲醇-氨水（8∶1.5∶0.4）为展开剂，以10%硫酸乙醇试液显色，再置紫外灯（365 nm）下检视斑点分离效果佳[5-6]，然而由于采用硅胶薄层来分离生物碱，略有影响，部分斑点出现拖尾现象[7-8]。

因展开剂中的二氯甲烷沸点低，易挥发，故有明显的边缘效应[9-12]。通过饱和，有一定效果，需待进一步研究。

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（收稿日期：2013-01-05 本文编辑：卫 轲）