连钱草的化学成分研究

[摘要] 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、ODS和HPLC等色谱技术对连钱草全草进行化学成分研究，得到14个化合物。通过理化数据和波谱等手段鉴定其结构，化合物分别鉴定为 stilbostemin B（1），trilepisiumic acid（2），3，4-二羟基苯基乙醇酮（3），岩白菜素（4），oresbiusin A（5），norbergenin（6），stilbostemin D（7），ehretioside B（8），阿魏酸乙酯（9），反式对羟基肉桂酸（10），没食子酸甲酯（11），原儿茶酸（12），对羟基苯乙酮（13），E-3-2，4-二羟基苯基-2-丙烯酸（14），其中化合物1～10及化合物13为首次从该植物中分离得到。

[关键词] 连钱草；唇形科；化学成分

连钱草为唇形科活血丹属植物活血丹 Glechoma longituba （Nakai） Kupr的全草，为民间常用药。目前从连钱草的分离得到化学成分主要黄酮及其苷类、萜类化合物，得到的芳香类化合物较少，本文的研究成果对于阐明连钱草的物质基础和生理活性具有一定的意义。本实验对连钱草全草进行了系统的化学成分分离，从中分离得到14个化合物，分别为 stilbostemin B（1），trilepisiumic acid（2），3，4-dihydroxyphenyl ethanol ketone（3），岩白菜素（4），oresbiusin A（5），norbergenin（6），stilbostemin D（7），ehretioside B（8），阿魏酸乙酯（9），反式对羟基肉桂酸（10），没食子酸甲酯（11），原儿茶酸（12），对羟基苯乙酮（13），E-3-2，4-二羟基苯基-2-丙烯酸（14）。其中化合物1～10及化合物13，14为首次从该植物中分离得到。

1 材料

紫外光谱（UV）用JASCO UV-550紫外光谱仪测定；红外光谱（IR）用JASCO FT/IR-480 Plus Fourier Transform 红外光谱仪测定（KBr压片）；熔点用X-5型显微熔点测定仪测定（温度计未校正）；NMR用BRUKER AV-400型核磁共振仪测定；ESI-MS用Finnigan LCQ Advantage MAX质谱仪测定。柱色谱用硅胶为青岛海洋化工厂产品；旋光值用JASCO P-102旋光仪测定；硅胶GF254薄层预制板为烟台化学工业研究所产品；RP-18 F254S薄层预制板和ODS柱色谱材料为Merck公司产品；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品；所用试剂均为化学纯或分析纯。

实验药材于2012年11月购自康美药业股份有限公司，经暨南大学药学院周光雄教授鉴定为唇形科植物活血丹G. longituba干燥全草。标本（20110321） 现存放于暨南大学中药及天然药物研究所。

2 提取与分离

连钱草干燥全草20.0 kg，粉碎，用4倍量体积分数为95乙醇常温渗漉提取4次，每次48 h，提取液减压浓缩得总浸膏1.3 kg。将总浸膏溶于水并分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得乙酸乙酯层浸膏254.5 g，将乙酸乙酯层浸膏用硅胶柱（氯仿-甲醇100∶1，100∶3，100∶7，100∶10～1∶1） 梯度洗脱，TLC分析后合并，得到9个流分（Fr.1-5）。Fr. 1经硅胶柱（氯仿-甲醇100∶3，100∶5）梯度洗脱，分离纯化得到化合物1（23.7 mg），3（33.1 mg）。Fr. 2依次过Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1）梯度洗脱分离纯化得到化合物2（5.2 mg），Fr. 3经过ODS色谱（甲醇-水100∶30，100∶50，100∶70）梯度洗脱和制备型HPLC（55%乙腈）分离纯化得到化合物4（38.4 mg，tR=17.5 min），6（2.3 mg，tR=18.2 min）7（19.3 mg，tR=10.4 min），8（27.5 mg，tR=15.1 min），9（11.6 mg，tR=21.0 min），10（16.7 mg，tR=22.0 min），11（18.5 mg，tR=23.7 min）。Fr. 5依次经过Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1），ODS柱（甲醇-水100∶60）和制备型HPLC（55%乙腈），分离纯化得到化合物5（15.2 mg，tR=13.0 min），12（16.1 mg，tR=23.4 min），13（9.8 mg，tR=15.0 min）。

3 结构鉴定

化合物1 无色针晶（氯仿-甲醇），香草醛-浓硫酸显橘红色，mp 154～155 ℃；UV（MeOH） λmax：247，290 nm；IR（KBr） νmax： 3 386，3 019，2 945，1 573，1 342，692 cm-1；ESI-MS m/z 251 [M+Na]+；1H-NMR（CH3OD，500 MHz）δ： 7.27（1H，dd，J=7.6，7.2 Hz，H-5′），7.22（1H，dd，J=7.6，7.2 Hz，H-3′），7.18（3H，m，H-2′，4′，6′），6.19（2H，s，H-2，6），2.82（1H，m，H-7），2.72（2H，m，H-7′），2.02（3H，s，-CH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：157.3（C-3），157.1（C-5），143.3（C-1′），141.2（C-1），129.5（C-2′），129.5（C-6′），129.3（C-3′），129.3（C-5′），126.8（C-4′），109.6（C-4），107.7（C-2），107.7（C-6），39.0（C-7），39.0（C-7′），8.3（-CH3）。以上数据与文献[2]报道的stilsbostemin B数据一致。

化合物2 白色无定形粉末（氯仿），香草醛-浓硫酸显橘红色，UV（MeOH）λmax： 213，280 nm；IR（KBr）νmax： 3 437，2 970，1 738，1 622，1 515，1 026，766 cm-1；ESI-MS m/z 339 [M+Na]+；1H-NMR（CH3OD，500 MHz）δ： 7.54（1H，d，J=16.2 Hz，H-9），7.52（1H，d，J=2.4 Hz，H-2），7.46（1H，dd，J=2.4，9.4 Hz，H-6），7.17（1H，d，J=2.4 Hz，H-2′），6.90（1H，d，J=9.4 Hz，H-5），6.27（1H，d，J=16.2 Hz，H-8 ）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：168.7（C-9），149.5（C-4），147.3（C-3），145.3（C-7），126.0（C-1），122.3（C-6），116.1（C-5），115.9（C-2），111.4（C-8），56.3（-OCH3）。以上数据与文献[2]报道的trilepisiumic acid数据一致。

化合物3 黄色无定形粉末（甲醇），香草醛-浓硫酸显蓝色；UV（MeOH）λmax：205，242 nm；IR（KBr）νmax： 3 514，2 595，1 668，1 297，1 135，1 090，936，713 cm-1；ESI-MS m/z 191 [M+Na]+；1H-NMR（CH3OD，500 MHz）δ： 7.38（1H，d，J=2.4 Hz，H-2），7.36（1H，dd，J=8.8，1.9 Hz，H-5），6.83（1H，d，J=8.0 Hz，H-6），2.86（2H，s，H-8）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：198.7（C-7），152.6（C-4），146.7（C-3），127.7（C-1），122.3（C-6），116.0（C-5），115.4（C-2），65.8（C-8）。以上数据与文献[3]报道的3，4-二羟基苯基乙醇酮数据一致。

化合物4 白色结晶（氯仿-甲醇），mp 236～237 ℃，香草醛-浓硫酸显粉红色，UV（MeOH）λmax： 209，245 nm；IR（KBr）νmax： 3 376，1 739，1 543，1 471，1 066，685 cm-1；ESI-MS m/z 951 [2M+Na]+；1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ： 7.10（1H，s，H-7），5.08（1H，d，J=10.0 Hz，H-10b ），4.10（1H，t，J=8.0 Hz，H-2），3.95（1H，m，H-4a），3.91（1H，m，H-4），3.88（3H，s，9 -OCH3），3.76（1H，t，J=8.4 Hz，H-3），3.68（1H，m，H-11），3.31（1H，m，H-11a）；13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：163.3（C-6），150.9（C-8），148.0（C-10），140.7（C-9），118.0（C-6a），116.0（C-10a），109.5（C-7），81.8（C-4a），79.8（C-2），73.8（C-4），72.2（C-10b），70.9（C-3），61.2（C-11），59.9（9-OCH3）。以上数据与文献[4]报道的岩白菜素数据一致。

化合物5 黄色粉末（甲醇），香草醛-浓硫酸显紫红色，[α]25D-1.6（c 1.0，MeOH）；UV（MeOH）λmax： 257，289 nm；IR（KBr）νmax： 3 503，1 720，1 600，1 510，1 450，1 212 cm-1；ESI-MS m/z 211[M-H]-；1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：6.68（1H，br s，H-2′），6.66（1H，d，J=10.0 Hz，H-5′），6.53（1H，dd，J=10.0，2.3 Hz，H-6′），4.29（1H，dd，J=9.2，6.3 Hz，H-2），3.69（3H，s，-OCH3），2.89（1H，dd，J=13.7，5.0 Hz，H-3α），2.76（1H，dd，J=13.7，7.6 Hz，H-3β）；13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：175.9（C-1），146.0（C-3′），145.0（C-4′），129.8（C-1′），121.8（C-6′），117.6（C-2′），116.2（C-5′），73.3（C-2），52.3（-OCH3），41.1（C-3）。以上数据与文献[5]报道的化合物oresbiusin A数据一致。

化合物6 浅黄色粉末（甲醇），香草醛-浓硫酸显深蓝色；UV（MeOH）λmax： 208，242 nm；IR（KBr）νmax： 3 363，1 637，1 381，1 057，679 cm-1；ESI-MS m/z 1077 [M+H]+；1H-NMR（CH3OD，500 MHz）δ： 6.55（1H，s，H-6），5.20（1H，d，J=5.5 Hz，H-1′），4.98（1H，t，J=5.5 Hz，H-2′），4.53（1H，br d，J=10.5 Hz，H-6′），4.47（3H，s，-OCH3），3.56（1H，m，H-5′），3.55（1H，t，J=10.0 Hz，H-3′），3.20（1H，t，J=8.9 Hz，H-4′）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：163.4（CO），151.0（C-2），148.1（C-3），140.6（C-4），118.1（C-1），116.0（C-5），109.5（C-6），81.8（C-5′），79.8（C-2′），73.8（C-3′），72.2（C-1′），70.7（C-4′），61.2（C-6′），59.9（4-OCH3）。以上数据与文献[2]报道的 norbergenin数据一致。

化合物7 无色针晶（甲醇），mp 154～155 ℃，UV（MeOH）λmax： 213，262 nm；IR（KBr）νmax： 3 347，2 924，2 359，1 421，1 240，1 067，745 cm-1；ESI-MS m/z 257[M-H]-；1H-NMR（CH3OD，500 MHz）δ： 7.17（1H，ddd，J=7.9，7.8，1.2 Hz，H-4′），7.09（1H，br d，J=7.8 Hz，H-6′），6.85（1H，m，H-5′），6.84（1H，m，H-3′），6.25（2H，m，H-2，6），3.81（3H，s，2′-OCH3），2.91（1H，m，H-7），2.77（1H，m，H-7′），2.10（3H，s，-CH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：157.1（C-2′），154.9（C-5），154.7（C-3），141.9（C-1），131.5（C-1′），130.8（C-6′），128.2（C-4′），121.4（C-4），121.4（C-5′），111.4（C-3′），107.7（C-2，6），55.8（2′-OCH3），37.3（C-7），33.6（C-7′），8.3（4-CH3）。以上数据与文献[6]报道的stilbostemin D数据一致。

化合物8 白色无定形粉末（氯仿），香草醛-浓硫酸显砖红色，UV（MeOH）λmax：203.5，277 nm；IR（KBr）νmax： 3 504，2 595，1 668，1 135，1 090，713 cm-1；ESI-MS m/z 324 [M+Na]+；1H-NMR（CH3OD，500 MHz）δ：7.14（1H，d，J=8.5 Hz，H-6），6.70（1H，d，J=2.5 Hz，H-4），6.49（1H，dd，J=10.0，2.5 Hz，H-3），3.90（1H，d，J=11.5 Hz，H-2′），3.79（1H，t，J=9.8 Hz，H-6′），3.73（1H，m，J=9.8 Hz，H-5′），3.50（1H，t，J=8.9 Hz，H-4′），3.45（1H，m，H-3′），3.42（1H，s，H-1α）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：160.0（C-4），157.5（C-2），130.9（C-6），120.3（-CN），112.5（C-1′），110.9（C-1），104.8（C-5），103.2（C-3），78.4（C-5′），78.2（C-3′），75.0（C-2′），71.3（C-4′），62.6（C-6′），18.2（C-1α）。以上数据与文献[7]报道的ehretioside B数据一致。

化合物9 白色粉末（甲醇），香草醛-浓硫酸显淡蓝色，UV（MeOH）λmax：227，257 nm；IR（KBr）νmax： 3 204，2 535，1 764，1 060，1 034，824 cm-1；ESI-MS m/z 193[M-H]-；1H-NMR（CH3OD，500 MHz）δ： 7.65（1H，dd，J=14.0，2.0 Hz，H-7），7.16（1H，m，H-5），7.09（1H，m，H-6），6.93（1H，d，J=8.5 Hz，H-3），6.37（1H，dd，J=14.0，2.0 Hz，H-8），4.28（2H，m，-CH2-），3.93（3H，d，J=4.0 Hz，-OCH3），1.37（3H，m，-CH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：168.9（C-9），150.0（C-4），148.8（C-3），146.2（C-7），127.4（C-1），123.7（C-6），116.2（C-5），115.4（C-2），111.4（C-8），61.2（-CH2-），56.2（-OCH3 ），14.5（-CH3）。以上数据与文献[8]报道的阿魏酸乙酯波谱数据一致。

化合物10 白色针状结晶（甲醇），mp 211～212 ℃，UV（MeOH）λmax： 209，237，255 nm；IR（KBr）νmax：3 373，1 662，1 613，1 557，1 513，1 243 cm-1；ESI-MS m/z 163[M-H]- ；1H-NMR（CH3OD，500 MHz）δ： 7.60（1H，d，J=16.0 Hz，H-2），7.44（2H，m，H-2′，6′），6.81（2H，m，H-3′，5′），6.28（1H，d，J=16.0 Hz，H-2）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（C-1），161.2（C-4′），146.6（C-3），131.1（C-2′，6′），127.2（C-1′），116.8（C-3′，5′），115.6（C-2）。以上数据与文献[9]报道的反式对羟基肉桂酸一致。

化合物11 白色粉末（氯仿），mp 147～148 ℃；UV（MeOH）λmax： 205，263 nm；IR（KBr）νmax ：3 353，1 652，1 611，1 547，1 313，1 213 cm-1；ESI-MS m/z 183[M-H]-；1H NMR（CH3OD，500 MHz）δ：7.03（2H，s，H-2′，6′），3.80（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：169.0（C-1），146.5（C-3′，5′），139.7（C-4′），121.5（C-1′），110.0（C-2′，6′），52.3（C-8）。以上数据与文献[10]报道的没食子酸甲酯数据一致。

化合物12 黄褐色针状结晶（甲醇），mp 199～201 ℃；UV（MeOH）λmax： 236，303 nm；IR（KBr）νmax ：3 253，1 672，1 601，1 527，1 463，1 383 cm-1；ESI-MS m/z 153[M-H]-；1H-NMR（CH3OD，500 MHz）δ： 7.44（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），7.42（1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-6），6.79（1H，d，J=9.0 Hz，H-5）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.7（-COOH），151.4（C-4），146.0（C-3），123.8（C-1），117.7（C-2），115.7（C-5）。以上数据与文献[11]报道的原儿茶酸数据一致。

化合物13 黄色粉末（氯仿），UV（MeOH）λmax： 223，289 nm；IR（KBr）υmax： 3 447，2 925，1 688，1 529，1 476，1 112，759 cm-1；ESI-MS m/z 135[M-H]-；1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：7.86（2H，dd，J=8.8，2.3 Hz，H-2，6），7.09（2H，dd，J=8.8，2.3 Hz，H-3，5），2.53（3H，s，-CH3）；13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：198.9（CO），163.2（C-4），131.6（C-2，6），129.7（C-1），125.7（C-3，5），25.7（-CH3）。以上数据与文献[12]报道的对羟基苯乙酮数据一致。

化合物14 白色粉末（甲醇），UV（MeOH）λmax：235，265 nm；IR（ KBr）νmax ：3 343，1 672，1 603，1 547，1 503，1 045 cm-1；ESI-MS m/z 179[M-H]- ；1H-NMR（CH3OD，500 MHz）δ： 8.37（1H，m，H-6′），8.01（1H，d，J=16.0 Hz，H-3），7.62（1H，s，H-5′），7.22（1H，m，H-3′），6.79（1H，d，J=16.0 Hz，H-2）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：176.5（C-1），164.2（C-4′），158.8（C-2′），155.4（C-3），127.6（C-6′），118.3（C-1′），115.9（C-2），112.9（C-5′），103.4（C-3′）。以上数据与文献[13]报道的E-3-（2，4）-二羟基苯基-2-丙烯酸一致。

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Chemical constituents from Glechoma longituba

LIU Jie，LI Guo-qiang，WU Xia，LI Yao-lan，WANG Guo-cai*

（Institute of Traditional Chinese Medicine & Natural Products，College of Pharmacy，

Guangdong Province Key Laboratory of Pharmaceutical Constituents of TCM and New Drugs Research，

Jinan University，Guangzhou 510632，China）

[Abstract] Fourteen compounds were obtained from Glechoma longituba by the chromatographic methods of silica gel，ODS，Sephadex LH-20 and preparative of HPLC. According to physicochemical properties and spectral data，these compounds were identified as stilbostemin B（1），trilepisiumic acid（2），3，4-dihydroxyphenyl ethanol ketone（3），bergeninmonohydrate（4），oresbiusin A（5），norbergenin（6），stilbostemin D（7），ehretioside B（8），ethyl ferulate（9），E-p-hydroxy-cinnamic acid（10），methyl gallate（11），protocatechuic acid（12），4′-Hydroxyacetophenone（13），and E-3-2，4-dihydroxyphenyl-2-acrylic acid（14）. Among them，compounds 1-10，13 and 14 were isolated from this plant for the first time.

[Key words] Glechoma longituba；Lamiaceae；chemical constituents

doi：10.4268/cjcmm20140428