辣椒碱纳米乳注射剂的溶血性与血管刺激性试验

【摘要】 目的 对辣椒碱纳米乳注射剂进行溶血性与血管刺激性评价。方法 采用家兔体外溶血性试验与家兔体内血管刺激性试验。结果 0.004%辣椒碱纳米乳注射剂3 h内无溶血以及无红细胞凝集反应，按20 μg/kg家兔耳缘静脉注射无血管刺激性。结论 在有效剂量下辣椒碱纳米乳注射剂无溶血及血管刺激性反应，为进一步研究提供 参考 。

【关键词】 辣椒碱;纳米乳;注射剂;溶血性;血管刺激性

abstract:objective to evaluate the hemolysis and vascular irritation of nanoemulsion injection of capsaicin.methods experiments including in vitro hemolytic test in rabbits and in vivo vascular irritation test in rabbits were carried out.results hemolysis and erythrocyte agglutination were not observed in in vitro test after adding 0.004% capsaicin nanoemulsion for 3 hours. vascular irritation in rabbits was not observed also after intravenous administration of the preparation at the dosage of 20 μg/kg.conclusion there was no hemolysis and vascular irritation reactions concerned with nanoemulsion injection of capsaicin at the effective dosage in rabbits.

key words:capsaicin; nanoemulsion; injection; hemolysis; vascular irritation

辣椒碱(capsaicin)[1]是辣椒辛辣物质和具有药物活性的主要成份，通过选择性拮抗神经肽p物质而发挥抗炎镇痛效果[2]，可有效 治疗 带状疱疹后遗神经痛、糖尿病神经痛、风湿性关节炎和骨关节炎等疼痛，是新型非成瘾性抗炎镇痛药[3]。由于疗效肯定，美国药典从24版开始收载。将辣椒碱制成纳米乳注射剂，达到起效快、镇痛时间长、副作用低的目的，克服市场上辣椒碱皮肤局部用制剂的起效慢、药物吸收不完全、皮肤刺激性大的缺点[4～6]。

根据《 中国 药典》2005版中药安全性检查法应用指导原则与国家食品药品监督管理局制定《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》，采用溶血性与血管刺激性试验对辣椒碱纳米乳注射剂进行临床前安全性评价，为进一步研究提供依据。

1 仪器、试药与动物

1.1 仪器

jb?2型恒温磁力搅拌器(上海智光仪器仪表有限公司)，十万分之一 电子 分析天平(bp211d，德国赛多利斯)，800型电动离心机(广州富城仪器厂)，数显恒温水浴锅(金坛市富华仪器有限公司)。

1.2 试药

0.004%辣椒碱纳米乳注射剂(自制)，空白纳米乳(自制)，生理盐水(自制)。

1.3 动物

新西兰家兔，普通级，体质量2.0～2.5 kg，雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供(合格证号：0044303)。

2 方法与结果

2.1 辣椒碱纳米乳注射剂的制备

依据辣椒碱纳米乳处方设计与工艺研究，得辣椒碱纳米乳由mct：吐温80：豆磷脂：丙二醇按质量比为1.5∶2.5∶1.25∶1.5组成。按处方量称取药物、油、复合乳化剂、助乳化剂，50 ℃水浴加热溶解，得均匀透明的溶液;在磁力搅拌下，将常温蒸馏水倾入该溶液乳化30 min，形成淡黄色、澄清透明辣椒碱纳米乳。0.22 μm微孔滤膜过滤，灌封于2 ml安瓿，121 ℃、0.1 mpa热压灭菌15 min。

2.2 溶血试验[7～11]

2.2.1 红细胞混悬液的制备

兔红细胞混悬液：取新西兰家兔，耳缘静脉取血约15 ml，用玻棒轻轻搅动血液以除纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入生理盐水约10倍量，摇匀，2 000 r/min离心10 min，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水按上述方法洗涤3～4次，直至上清液不显红色为止，按所得红细胞容积用生理盐水配成2%兔血红细胞混悬液，备用。

人红细胞混悬液：6名志愿者，每人抽血约8 ml，同法处理得2%人血红细胞混悬液，备用。

2.2.2 溶血试验

取洁净试管7支，1～5号管为供试品，按表1依次加入2%兔或人血红细胞混悬液、生理盐水、0.004%辣椒碱纳米乳注射剂(供试1)或空白纳米乳(供试2);6号管为阴性对照;7号管为阳性对照。混匀1～7号管，置(37±0.5) ℃恒温水浴箱中温育。3 h后观察溶血与凝集现象，按表2判断是否溶血，结果见表3。表1 辣椒碱纳米乳注射剂溶血试验加样表表2 溶血试验判断标准　现象结果红细胞全部下沉，上层液无色澄明无溶血溶液澄明红色或棕红色，管底有少量红细胞残留部分溶血溶液澄明红色，管底无红细胞残留全溶血溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，摇匀后不分散红细胞凝聚表3 辣椒碱纳米乳注射剂溶血试验结果

结果表明，7号阳性对照管液体澄明鲜红色，管底几乎无红细胞残留，为全溶血;6号阴性对照管上层液无色澄明，红细胞逐渐沉于管底，颜色呈鲜红色，轻轻振摇后管底沉积的红细胞均能完全分散，为无溶血;兔或人血红细胞的1～5号各浓度辣椒碱纳米乳供试管(供试1)、空白纳米乳供试管(供试2)上层液无色澄明，红细胞逐渐沉于管底，轻摇后红细胞能完全分散，表明无溶血及无红细胞凝集反应。但辣椒碱纳米乳注射剂与空白纳米乳使红细胞呈紫红色，与阴性对照的鲜红色不一致，此原因尚待查明。