木瓜籽提取物抗感染镇痛活性研究

[摘要] 目的：研究木瓜籽乙醇提取物镇痛、抗感染的作用。方法：采用热板刺激法和醋酸刺激扭体法研究木瓜籽提取物的镇痛作用，采用木瓜籽提取物对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性、二甲苯致小鼠耳廓肿胀和大鼠棉球肉芽肿形成的抑制研究其抗感染作用。结果：木瓜籽提取物能明显延长小鼠的疼痛域值，抑制小鼠腹腔毛细血管通透性、二甲苯致小鼠耳廓肿胀和大鼠棉球肉芽肿形成。结论：木瓜籽乙醇提取物有明显的镇痛、抗感染作用。

[关键词] 木瓜籽；抗感染镇痛；风湿

[中图分类号] R96[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）01（b）-013-03

Study on anti-inflammatory and analgesic effect of seeds of Fructus Chaenomelis

LIU Shu-xia1， LIU Shu-qin1，WANG Shi-jie2， KANG Xu3

（1.Center for Teaching and Learning of Chemical College, Jilin University, Changchun 130021, China；2. Biology Engineering Institute, Changchun University of Technology, Changchun 130000，China；3. Changchun GenSci, Changchun 130012, China)

[Abstract]Objective: To study the anti-inflammatory and analgesic effect of seeds of Fructus Chaenomelis. Methods: Analgesia experiments employed hot-plate procedure and the torsion body induced by acetum method. Three animal model was used to study Anti-inflammatory experiments， including the mice pinna swelling induced by xylene， increased vascular permeability induced by histamine phosphate in mice and the rats proliferation of granuloma led by implanting cotton pellet was selected．Results:seeds of Fructus Chaenomelis could improve the mice’s pain threshold. It could significantly inhibit the inflammatory edema induced by various inflammatory agents and reduce the time of writhe induced by acetic acid in mice， too. Conclusion: seeds of Fructus Chaenomeli can release the pain， and significantly inhibit acute and chronic inflammatory，too.

[Key words] Fructus Chaenomelis; Anti-inflammatory; Analgesia; Rheumatism

木瓜籽为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles Speciosa(Sweet)Nakai的干燥成熟种子，主产于安徽、山东、浙江、湖北、云南、贵州、四川等地。木瓜属植物全世界约有5种，我国均产。其中产于安徽省宣城地区的道地药材，称为宣木瓜。明代李时珍《本草纲目》中就有“木瓜处处有之，而宣城者为佳”的记载。木瓜作为一种常用中药，味酸、温，入肝、脾经。《本草纲目》记载木瓜主治湿痹脚气，霍乱吐下，转筋不止[1]；《本草分经》亦载其酸涩而温，有平肝和胃、敛肺伐肝、化湿止渴、调营卫、利筋骨、去湿热等功效[2]。药理实验表明,木瓜具有抗肿瘤、保肝及抑菌作用，临床上多用于治疗急性病毒性肝炎[3]。同时，木瓜亦为一种可食瓜果，近年来已利用木瓜果实研制成药品[4]、加工罐头、果脯、果酒、果醋、果汁等保健食品及美容护肤化妆品。木瓜临床效果独特，有重要的经济价值及应用前景。但在木瓜果实中占很大比重的木瓜籽的研究应用却并不多。本课题组现已从宣木瓜籽中分离并经过波谱学鉴定出包括有机酸类、三萜类、黄酮类等在内的二十多种化合物。本次实验是通过药理学方法，筛选出木瓜籽中抗感染镇痛的活性部位，为这种可食用性植物深入开发成抗感染镇痛新药及新的食品添加剂奠定了基础。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1 动物SD大鼠，体重(140.0±27.0) g，均为雄性；昆明种小鼠，体重(22.0±2.0) g，雌雄兼用，由吉林大学动物实验中心提供。

1.1.2 木瓜籽提取液的制备宣木瓜购自湖北宣城水果批发市场，经吉林大学药学院张静敏教授鉴定为宣木瓜Chaenomeles Speciosa(Sweet)Nakai。去果肉，取木瓜籽1 kg用75％乙醇加热回流提取3次，每次2 h，过滤，合并滤液，除去乙醇以后制成1 L的溶液（简称原液），取原液100 ml，稀释成500 ml（简称稀释液）。

1.1.3 仪器和试剂实验用药野木瓜注射液购自北京中医药大学，每支2 ml(含总黄酮不少于0.24 mg)，生产批号：061109，批准文号：ZZ-5982-粤卫药准字(1994)第502006号；伊文思蓝为上海化学试剂采购供应站经销，Koch Light进口分装，批号20305；722型光栅分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司）；梅特勒AB135-S十万分之一天平（德国）；HH-42快速恒温数显水箱（常州国华电器有限公司）；其他试剂购于北京化工。

1.2方法

1.2.1 对热刺激所致小鼠疼痛的影响（热板法）[5，6]在恒温水浴锅上固定一块铁板，把水浴锅温度定在（55.0±0.5）℃，预热10 min。用药前计算小鼠在热板上出现舔后足所需时间（s），筛选出合格昆明种小鼠（小于5 s或大于25 s为不合格）。取合格昆明种小鼠雌雄各20只，随机分成4组，每组10只。用药组分别灌胃原液和稀释液20 ml/kg， 对照组灌胃等量生理盐水，阳性组直接用野木瓜注射液（20 ml/kg）腹腔注射给药。药后30 min，60 min再次测定每只小鼠的痛阈值。

1.2.2对醋酸所致小鼠疼痛的影响（扭体法）选取昆明种小鼠雌雄各20只，随机分成4组，每组10只。用药组分别灌胃原液和稀释液20 ml/kg， 对照组灌胃等量生理盐水，阳性组直接用野木瓜注射液（20 ml/kg）腹腔注射给药。连续给药3 d，末次给药后1 h，每只小鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2 ml。观察并记录注射醋酸后小鼠扭体潜伏期及15 min内扭体次数。

1.2.3对小鼠腹部毛细血管通透性的影响[4]选取昆明种小鼠雌雄各20只，随机分成4组，每组10只。用药组分别灌胃原液和稀释液20 ml/kg， 对照组灌胃等量生理盐水，阳性组直接用野木瓜注射液（20 ml/kg）腹腔注射给药。连续给药3 d，末次给药1 h后，每只小鼠尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液0.1 ml，然后立即腹腔注射0.6%醋酸0.2 ml，20 min后处死动物，将10 ml生理盐水冲洗腹腔数次，收集冲洗液装入试管，以3 000 r/min离心10 min后，用722型光栅分光光度计记于590 nm下测其吸光度值。

1.2.4对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响[4]选取昆明种小鼠雌雄各20只，随机分成4组，每组10只。用药组分别灌胃原液和稀释液20 ml/kg， 对照组灌胃等量生理盐水，阳性组直接用野木瓜注射液（20 ml/kg）腹腔注射给药。连续给药3 d，末次给药后1 h用注射器在小鼠左耳前后两面均匀涂抹0.1 ml二甲苯致炎，右耳对照，致炎后4 h处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用8 mm打孔器分别在两耳相同部位打下圆耳片，称重，以两耳片重量之差为肿胀度，并计算肿胀抑制率，肿胀率（％）＝[（左耳重量-右耳重量）/右耳重量]×100％。

1.2.5对大鼠棉球肉芽肿的影响[4]取雄性SD大鼠40只，随机分成4组，在乙醚麻醉下，腹部去毛消毒，将两个脱脂棉球（20±0.5） mg，高压灭菌，各加入氨苄青霉素每个1 mg/0.5 ml，50℃烘干，分别埋于大鼠双侧背部皮下，左右各一个，手术次日给药组分别灌胃原液和稀释液20 ml/kg， 对照组灌胃等量生理盐水，阳性组直接用野木瓜注射液（20 ml/kg）腹腔注射给药，1次/d，连续6 d，在末次给药后处死大鼠，取出棉球和肉芽组织，于60℃烘箱内干燥后称重，计算肉芽组织质量及抑制率。

1.3统计学方法

应用SPSS 13.0统计分析软件进行处理，实验数据以均数±标准差（x±s）表示，实验结果进行多变量方差分析及t检验。

2结果

2.1 镇痛作用

2.1.1 对热刺激所致小鼠疼痛的影响（热板法）结果见表1。

2.1.2 对醋酸所致小鼠疼痛的影响（扭体法）结果见表2。

表2 各组用药前后扭体法测定情况（x±s）

2.2 抗感染作用

2.2.1 对小鼠腹部毛细血管通透性的影响结果见表3。

3讨论

风湿性关节炎是一种与溶血性链球菌感染有关的变态反应性疾病，病情发作时伴有明显的红、肿、热、痛。急性风湿性关节炎常对称累及膝、踝、肩、肘、腕等大关节，慢性风湿性关节炎关节多为酸痛，呈游走性窜痛或限于一两个关节轻度肿痛，关节功能因疼痛轻度受限。具有反复发作、致残率高等特点，是一种顽固性疾病，目前国内外尚无特效治疗方法[7]。传统中药乌头类植物疗效好，但是毒性极大，用药十分不安全。因而急需开发一种安全有效的治疗药物。

炎症和免疫是一个问题的两个侧面，单独应用非甾体抗感染药治疗风湿性关节炎疗效均不理想，长期应用还可能加重病理过程[8]。研究开发应用既有抗感染活性又有免疫调节活性的药物，即抗感染免疫调节药将是抗感染免疫药理发展的主要方向之一。近十几年来，植物药的抗感染免疫药理作用己受到广泛重视[9]。通过以上急性、亚急性炎症模型实验研究结果表明，木瓜籽提取物（原液）对小鼠毛细血管通透性增加、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和大鼠棉球肉芽肿增生均有非常显著的抑制作用(P

[参考文献]

[1]李时珍.本草纲目(卷三十・果部)[M].北京：中国书店，1988.67.

[2]姚澜.本草分经[M].上海：上海科技出版社，1989.12.

[3]郑智敏,王寿源,周迪秀,等.木瓜冲剂对急性病毒性黄疸性肝炎的临床疗效分析[J].福建中医药，1987，18(2)：24-25.

[4]吴一福.中药镇痛新药――精制野木瓜注射液[J].世界药品信息，2002， 3(1)：50.

[5]闵定宏，谢建祥，杨建英， 等. 复方烧伤止痛液镇痛作用的研究[J]. 中国医药学报，2004，19(12):754-756.

[6]Gerhard Vogel H（编），杜冠华（译）. 药理学实验指南――新药发现和药理学评价[M]. 北京：科学出版社，2001.511.

[7]印联群.中医药治疗类风湿性关节炎进展[J].湖南中医学院学报，1995，15 (4) ：66-69.

[8]徐叔云，魏伟，梁君山.我国抗炎免疫药理研究现状[J].中国药理学通报，1992，8(3)：161-165.

[9]徐叔云.抗炎免疫药理研究十年进展[J].中国药理学通报，1996，12(1)：1-6.

[10]Kostova I, Iossifova T. Chemical components of Fraxinus species[J]. Fitoterapia, 2007,78(1):85-106.

（收稿日期：2007-09-06）

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