食品卫生微生物学检验菌落总数测定方法的效果分析

摘要：目的 比较分析在食品微生物学中检验菌落总数时用到的平板菌落计数法、菌落总数测试片法检验方法以及TTC培养基3种测定方法的检测效果，以达到提高食品菌落总数检验的检出率和灵敏度的目的。方法 对需要测定的153个样品，按照国家相关标准采用标准平板菌落计数法、菌落总数测试片法检验方法和TTC培养基法进行培养，培养一段时间后记录菌落检出数。结果 在测定的153个样品中，标准平板菌落计数法、菌落总数测试片法和TTC培养基法三种测定法中合格的份数分别为137、129、126，三中测定方法之间无显著性差异（P＞0.05）。结论 三种测定方法进行食品微生物学检验，得到的效果相当，但是TTC培养基法的检出率和灵敏度要明显优于其他两种测定方法。

关键词：菌落总数检验；标准平板菌落计数法；菌落总数测试片法检验方法；TTC培养基法对食品中的细菌总数进行微生物学检验，目前常采用的方法主要有两种，一种是测试纸片法，另一种是计数琼脂倾注皿培养计数法[1]。然而在实际的检测工作中，送检样品中常出现含有一些体积较小的沉渣和颗粒等物质，它们不容易被乳化，在倾倒琼脂时常随着培养基一起注于培养皿中，并夹杂在琼脂深层，形态与细菌菌落类似，因此容易与细菌菌落发生混淆从而不利于准确检测样品中的菌落总数，对检测结果造成一定影响。因此，在本研究中选取了标准平板菌落计数法、菌落总数测试片法检验方法和TTC培养基法（在计数培养基中加入0.5%的氯化三苯四氮唑，即TTC，作为染色剂，对菌落进行染色）3种方法对送检的153个样品进行细菌总数测定，比较3中方法的检出效果，现报道如下。

1资料与方法

1.1测定材料

1.1.1平板计数琼脂选用国内某厂家生产的处于有效期内的平板计数琼脂培养基。

1.1.2菌落总数测试片选用国内某厂家生产的处于有效期内的菌落总数测试片。

1.1.3 TTC琼脂按照体积比100:1的比例在琼脂中加0.5%的氯化三苯四氮唑（TTC），的琼脂中的TTC浓度为0.005%。

1.2测定样品所有的153个测定样品均来源于我中心所辖区域内的食品加工厂企业。

1.3方法

1.3.1平板标准平板菌落计数法1：10样品母液的配制：首先准备一定数量的内盛有225ml磷酸缓冲液的三角瓶，瓶内预装适当数量的玻璃珠，用灭过菌的无菌移液管吸取25ml待检样品，轻微振摇、混匀三角瓶内液体。1:100样品母液的配制：用移液器吸取配制的1:10样品母液1ml，沿着试管壁缓慢注入预先盛有9ml稀释液的无菌试管中，轻微振摇、混匀试管内液体。以同样的方法，配制1:1000,1:10000的样品母液。注意在配置过程中，各个浓度梯度所用的无菌枪头不能重复使用，以防止交叉污染。根据待检样品受到污染的程度，选择1～3个适宜浓度的样品母液，每个浓度梯度均吸取1ml样品母液与无菌的培养皿中，同时取1ml样品母液于两个无菌的培养皿中作为空白对照。并立即将事先准备好的琼脂培养基倒入无菌培养皿中，待琼脂凝固后，在37℃条件下倒置培养48h。

1.3.2菌落总数测试片法将事先准备好的测试片置于水平台面上，将纸片上附着的薄膜去掉，从上述4个浓度梯度的样品母液中选取1～3个适宜浓度的母液，用移液器吸取1ml的样品原液或者稀释后的母液均匀地加至测试片的中间位置，并盖上上盖膜，静置1min待培养基凝固，并用压板的平板将纸片压紧，使样品分布均匀，每一个浓度梯度接种2片[2]。37℃条件下培养48h。

1.3.3 TTC培养基法吸取0.5%的TTC溶液1ml于100ml琼脂培养基中，制成0.005%的TTC琼脂培养基，其余接种步骤和培养方法同平板标准平板菌落计数法。

1.4统计学方法采用SPSS 17.0 软件包对数据进行分析，计量资料采用χ2检验，P＜0.05为具有统计学差异。

2结果

标准平板菌落计数法、菌落总数测试片法检验方法和TTC培养基法三种测定法中合格的份数分别为137、129、126，TTC培养基法与标准平板菌落计数法和菌落总数测试片法相比，检出的菌落数均不存在统计学差异（P＞0.05）。见表1。

3讨论

随着人们生活水平的改善，食品安全问题也越来越受到人们的重视，特别是近年来我国食品安全问题多发，更将食品卫生问题推到了风口浪尖之上。食品在加工、贮存、运输过程中都有可能接触到各种微生物，从而导致食品变质，给人的身体埋下重大健康隐患。因此，对食品中的微生物数量进行检测是十分必要的，摸索探究微生物检测的新手段也具有十分重要的意义。

本研究中，TTC培养基法菌落与标准平板菌落计数法和菌落总数测试片法相比，检出率较高。这主要是因为部分细菌体积小或者生长于琼脂内部，用肉眼难以观察到，从而导致计数不准确。由于大多数细菌都含有脱氢酶，TTC作为一种氢受体可以接受脱氢酶脱下的氢，并且颜色由白色变成红色，从而可以达到对细菌进行染色的目的，有利于检验人员准确有效地对细菌菌落数进行观察和计数。在本研究中，运用3种方法检测食品中的菌落总数，差异不具有统计学意义，这说明TTC培养基法能够特异地使细菌着色而食品残渣仍然保持原来的颜色不变，并且对细菌的生长情况也不会产生影响，便于菌落的鉴别。

综上所述，TTC培养基法检测食品中的菌落总数具有速度快、灵敏度高的优点，值得广泛推广。

参考文献：

[1]Turner KM．Efficacy of chromocult coliform agar for coliform and escherichia coil detection in foods［J］．J Food Port，2002，63(4)：539-547.

[2]Gunasekera TS,Attfield PV,Veal DA.A flow cytometry method for rapid detection and enumeration of total bacteria in milk［J］．Appl Environ Microbiol，2000，66(3)：1228-1232．