膀胱癌组织中hnRNP K及Hugl-1的表达及临床意义

【摘要】 目的 研究hnRNP K及Hugl-1的表达与人膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of bladder,TCCB)的临床病理的关系，探讨hnRNP K及Hugl-1与TCCB细胞发生、侵袭的相关性。方法 对68例TCCB标本和38例前列腺增生症患者的膀胱壁应用单克隆抗体、免疫组化SP法检测hnRNP K及Hugl-1蛋白表达情况。结果 TCCB组织中Hugl-1表达水平显著低于正常膀胱组织(P

【关键词】膀胱移行细胞癌；人源幼虫巨大致死性基因；不均一核糖白；膀胱肿瘤/病理学

Expressions of hnRNP K and Hugl-1 proteins in transitional cell carcinoma of bladder and their clinical significance

ZHAN Min,XIE Bing-zhu,TANG Jia-bu,et al.Department of Urology,The 3rd Affiliated Hospital of Guangdong college,525000 Guangdong,China

【Abstract】 Objective To investigate the expressions of hnRNP K and Hugl-1 proteins in bladder carcinoma and their clinical significance.Methods HnRNP K and Hugl-1 protein expressions of 68 bladder carcinoma and 38 normal bladder tissues were assayed by immunohistochemistry.Results The expression level of Hugl-1 was found to be significantly lower while hnRNP K was significantly higher in bladder carcinoma tissues than in normal bladder tissues(P

【Key words】Transitional cell carcinoma of bladder; Human lethal-giant lavae 1; The heterogeneous nuclear ribonucleoproteins; Bladder neoplasms/pathology

膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of bladder,TCCB)是泌尿系统中最常见的肿瘤，位居世界肿瘤第七位，其发病率占癌症总数的3．2%。TCCB发病机制涉及原癌基因的激活及抑癌基因的失活等。

大量的研究表明hnRNP K(the heterogeneous nuclear ribonucleoproteins K)是hnRNP家族中的一种多功能蛋白，在直肠癌及乳腺癌等多种肿瘤中均有高水平的表达，但在膀胱癌发生、发展中的作用尚不清楚。人源幼虫巨大致死性基因Hugl-1(human lethal-giant-lavae 1)是1997年发现的一个基因，其同源的幼虫巨大致死性基因Lgl(Lethal giant lavae)最近在果蝇中已经被证实是一个抑癌基因。现已证实Hugl-1与多种肿瘤的发生发展及转移密切相关。关于TCCB肿瘤细胞生长过程与hnRNP K及Hugl-1的关系，目前在国内外研究较少。本研究采用免疫组化SP方法检测hnRNP K及Hugl-1在TCCB及正常膀胱组织中的表达及其分布情况，探讨hnRNP K及Hugl-1与TCCB组织病理分级及临床分期等的关系，初步探讨hnRNP K及Hugl-1在TCCB发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1．1 临床资料 选自三附院2005年12月至2008年3月活检病例中已确断为膀胱移行细胞癌68例标本，所有标本术前均未进行放射、化学治疗及激素治疗。男43例，女25例，年龄32~81(平均54)岁。世界卫生组织(WHO)病理分级系统：I级22例，II级22例，III级24例。国际抗癌联盟(UICC-TNM)标准临床分期：T1期25例，T2期29例，T3期14例。以38例前列腺增生症患者的膀胱壁作为正常阴性对照。

1．2 实验方法

1．2．1 免疫组化检测hnRNP K及Hugl-1蛋白表达 所有TCCB组织、前列腺增生症患者膀胱壁标本均采用-80℃冰箱保存备用。将标本制成4 μm的连续切片，经脱蜡、脱苯、水化后，用SP即用型试剂盒进行免疫组化染色，其余操作步骤严格按说明书进行。SP即用型试剂盒及即用型抗人Hugl-1、hnRNP K单克隆抗体均购自美国Santa-Cruz公司。采用试剂盒所带的阳性切片作阳性对照，采用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照。

1．2．2 结果判断 显微镜下观察实验结果，结果判定标准：hnRNP K阳性染色主要为肿瘤细胞核及细胞浆内出现黄色或棕黄色颗粒，Hugl-1阳性染色主要为肿瘤细胞膜呈棕黄色颗粒状。根据癌细胞染色程度、范围和分布的不同进行判断。阴性(-)：整个切片未见阳性染色；轻度阳性(+)：阳性细胞50%。

1．3 统计学方法 所有数据均用SAS8．0统计软件包处理，相关分析采用Spearman秩和检验对数据进行统计分析。

2 结果

2．1 Hugl-1在膀胱癌组织中的表达与TCCB临床分期及病理特征的关系 所有正常膀胱组织均有显著的Hugl-1阳性染色,68例TCCB组织中Hugl-1蛋白阳性表达25例，阳性率为36．76%，所有阳性信号大多定位于细胞膜，极少数定位于细胞浆，细胞核无表达。膀胱癌I级与III级、II级与III级间相比，Hugl-1阳性表达率的差异有统计学意义(P0．05)；膀胱癌T1和T2期Hugl-1阳性表达率的差异无统计学意义P>0．05)，其余各组相比均具有统计学意义(P

2．2 hnRNP K蛋白在膀胱癌组织中的表达与TCCB临床分期及病理特征的关系 正常膀胱组织中hnRNP K阳性表达率为28．95%(11/38)。TCCB组织中 hnRNP K的阳性率为58．82%(40/68)。hnRNP K阳性信号主要分布于肿瘤细胞核及细胞浆内。另TCCB转移组及未转移组hnRNP K阳性表达率及阳性强度无显著性差异(P>0．05)。经相关分析结果显示，hnRNP K蛋白表达的强度与膀胱癌病理分级、临床分期呈正相关关系，即 hnRNP K随肿瘤细胞病理分级、临床分期的增高呈增高趋势，见表1。

2．3 膀胱癌组织中Hugl-1蛋白和hnRNP K表达强度的相关性 统计学分析结果显示，TCCB组织中Hugl-1蛋白和hnRNP K表达强度呈明显负相关，即Hugl-1蛋白表达愈强，hnRNP K表达就愈弱，反之亦然，见表2。

3 讨论

3．1 膀胱癌中Hugl-1表达与膀胱癌的关系 膀胱癌的发生过程十分复杂，与多种癌基因和抑癌基因的参与和调控有关。Hugl-1是果蝇抑癌基因LgI在人类的同源基因，位于17号染色体(17p11．2-12)上的基因，近来的分子学研究显示这一区域可能存在神经外胚层肿瘤相关基因[1，2]。在果蝇中LgI起着抑癌基因的作用，如果LgI缺失,可导致蛋白功能丧失，原有的组织结构紊乱，以至消失，表现出恶性肿瘤的特征。更进一步的研究还显示LgI及Hugl-1和肿瘤的转移也密切相关，当将LgI缺失的增生果蝇组织接种到成虫果蝇体内，此组织会不停的增生并发生广泛的转移[3，4]。另外，还有研究显示LgI同源蛋白可以在膜上调节高尔基体后的囊泡运输的方向，从而调节细胞极性[5]。LgI或Hugl-1基因缺失，细胞失去细胞极性，不能维持非对称性分裂，没有细胞周期，导致细胞处于未分化状态过度增生[6]。细胞极性的丧失与癌症发生相关。

目前，有关膀胱癌Hugl-1蛋白表达的研究较少，国内未见文献报道。我们采用免疫组化方法检测膀胱癌组织中Hugl-1蛋白染色大多定位于细胞膜，极少数定位于细胞浆，细胞核无表达。本组38例正常膀胱组织中Hugl-1全部呈阳性表达，而68例膀胱癌组织中Hugl-1蛋白阳性表达25例，阳性率为36．7%。说明在膀胱癌组织Hugl-1蛋白阴性表达率较高，提示膀胱癌中存在Hugl-1基因的突变或缺失等致其表达减少的可能；另有结果显示，膀胱癌组织中Hugl-1蛋白表达与病理分级、临床分期呈负相关，随肿瘤细胞病理分级、临床分期的增高呈下降趋势，提示在膀胱癌发生及发展过程中，Hugl-1基因的失活及其表达丢失可能起着重要作用；且膀胱癌转移组的Hugl-1阳性表达率较未转移组显著降低，提示其可能参与了膀胱癌的转移过程，与先前的研究结果一致[3-4]。但其与膀胱癌的关系仍有待更多的研究加以证实。

3．2 膀胱癌中hnRNP K表达与膀胱癌的关系 核内不均匀核糖白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)是存在于细胞核中的一类RNA结合蛋白，是由30多种组成不固定的蛋白质小分子构成的复合体。这些hnRNP蛋白连结pre-mRNAs被认为在转录调节，premRNAs剪接，mRNA输出，降解等多种生物过程中担当重要角色[7]。

hnRNP K是hnRNP家族中的特异成员[8]，与其他的hnRNP蛋白有不同的结构特征，是一种多功能蛋白，具有RNA和DNA连结位点，能在胞浆和胞核中起作用并参与很多细胞进程，除具有其它hnRNP的功能如mRNA的剪接和mRNA向胞浆的运输外，还包括调节DAN的转录及RNA的加工和RNA的翻译[9]，从面参与细胞功能调节。并参与细胞周期及细胞调亡的调节，同时在信号转导中发挥着作用[10]。本实验通过免疫组化方法发现实验组中的hnRNP K表达明显高于对照组(P

3．3 膀胱癌组织中hnRNP K与Hugl-1关系 本文实验结果相关性分析表明膀胱癌组织中的Hugl-1表达强度与hnRNP K蛋白的表达水平呈明显负相关，Hugl-1蛋白表达愈强，hnRNP K表达愈弱，反之亦然。提示在膀胱癌发生中，可能由于Hugl-1蛋白表达降低或缺失，不能有效抑制由致癌因子异常激活的hnRNP K，或者为后者异常激活后抑制了Hugl-1蛋白的表达，使膀胱细胞异常增殖和恶性转化，甚至发生转移。但有关膀胱癌发病机制中hnRNP K与Hugl-1关系，仍有待进一步研究证实。

参考文献

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