地黄中梓醇的大孔吸附树脂纯化工艺

摘要：采用优选大孔吸附树脂纯化梓醇，以分光光度法测定梓醇浓度，对纯化地黄中梓醇的大孔吸附树脂工艺进行了研究。结果表明，Ｈ１０３树脂吸附与纯化梓醇的效果较好，上样液浓度为４．０８ ｍｇ／ｍＬ、上样液体积为７个柱体积、洗脱剂为体积分数１０％的乙醇、洗脱剂体积为８个柱体积、静态吸附时间为4 h为纯化的最优条件。

关键词：大孔吸附树脂；地黄；梓醇；纯化

中图分类号：Ｑ９４９．７７７．８；Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）14－3062-03

Separation and Purification of Catalpol from Radix Rehmanniae by Macroporous Adsorption Resins

ＨＯＮＧ Ｃｈｏｎｇ１，ＦＵ Ｘｉａｎｇ－ｂｉｎ２，ＬＩＵ Ｈｏｎｇ－ｊｉ１，ＳＨＩ Ｙａｎ－ｇｕａｎｇ１，ＷＡＮＧ Ｍｉｎｇ－ｄａｏ１

（１． Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００２，Ｃｈｉｎａ；

２． Ｈｅｎａｎ Ｓｃｈｏｏｌ ｆｏｒ Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００６，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｃａｔａｌｐｏｌ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Radix Rehmanniae ｂｙ ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ ｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ｒｅｓｉｎｓ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｈ１０３ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｒｅｓｉｎｓ ｆｏｒ ｃａｔａｌｐｏｌ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ， ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏａｄｉｎｇ ｓａｍｐｌｅ， ４．０８ ｍｇ／ｍＬ； ｓａｍｐｌｉｎｇ ｖｏｌｕｍｅ， ７ ＢＶ； ｅｌｕｅｎｔ， １０％ ｅｔｈａｎｏｌ； ｅｌｕｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ，8 ＢＶ， static obsorption time， 4 h．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ｒｅｓｉｎ； Radix Rehmanniae； ｃａｔａｐｏｌ； ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ

梓醇是一种环烯醚萜葡萄糖苷类化合物，主要存在于地黄等植物中。目前，梓醇是从天然植物中提取后经高效液相色谱纯化而制得的，还没有人工合成梓醇的相关报道，也没有商品化，仅有少量毫克级梓醇标准品出售且价格昂贵。人们从多方面探讨了地黄梓醇的分离纯化工艺，取得了一定的进展［１－５］，但大规模的生产制备工艺还未得到解决。采用大孔吸附树脂静态吸附方法对地黄梓醇的分离纯化进行了工艺研究，为进一步工业化生产打下理论基础。

１ 材料与方法

１．１ 材料

地黄为河南省温县怀地黄种植基地的“８５－５”品种，大孔吸附树脂购自沧州宝恩化工有限公司，梓醇标准品来源于中国食品药品检定研究院。所用试剂均为分析纯。

１．２ 方法

１．２．１ 梓醇粗提液的制备 将鲜地黄榨汁，向渣、汁中均加入体积分数为８０％的乙醇，用超声波辅助处理３０ ｍｉｎ，过滤，收集滤液，通过旋转蒸发除去乙醇，所得水溶液即为梓醇粗提液。

１．２．２ 单因素试验

１）树脂型号的筛选。树脂的预处理方法见文献［１］，准确量取预处理过的各型号湿树脂１０ ｍＬ置于具塞三角瓶中（表1），加入相同体积、相同浓度（以吸光度表示）的梓醇粗提液，以１４０ ｒ／ｍｉｎ恒温振荡２４ ｈ，测定平衡液的Ａ４６３ ｎｍ；将达到吸附平衡的树脂取出，除去表面水分，再加入相同体积、体积分数为９５％的乙醇，在相同条件下进行解吸，测定解吸液的Ａ４６３ ｎｍ，计算比吸附量和解吸率。

２）上样液浓度的选择。取４份１０ ｍＬ粗提液，分别稀释５、８、１０、１５倍作为上样液，各加入１０ ｍＬ湿树脂，以１４０ ｒ／ｍｉｎ恒温振荡２４ ｈ，测定平衡液的Ａ４６３ ｎｍ，计算比吸附量。

３）上样液体积的选择。量取４份１０ ｍＬ湿树脂，加入相同浓度、不同体积（４、５、７、８个柱体积）的粗提液作为上样液，以１４０ ｒ／ｍｉｎ恒温振荡２４ ｈ，测定平衡液的Ａ４６３ ｎｍ，计算比吸附量。

４）洗脱剂的选择。量取１００ ｍＬ湿树脂，加入适量粗提液，以１４０ ｒ／ｍｉｎ恒温振荡２４ ｈ，测定平衡液的Ａ４６３ ｎｍ，计算平衡液浓度；将达到吸附平衡的树脂过滤取出，吸干表面水分，按１０ ｍＬ／份量取７份，分别加入相同体积的体积分数为１０％、２０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９５％的乙醇，以１４０ ｒ／ｍｉｎ恒温振荡２４ ｈ，测定解吸液的Ａ４６３ ｎｍ，计算梓醇的纯度。

５）洗脱剂体积的选择。量取１０ ｍＬ湿树脂装柱，以恒定的速率吸附适量的上样液，收集吸附残液，先用去离子水洗至柱子颜色变浅，再用体积分数为１０％的乙醇洗脱，一个柱体积收集一管，依次标号１～１１，测定平衡液浓度、解吸液浓度，计算每管梓醇的浓度。将洗脱液在５０ ℃水浴锅上蒸干，计算梓醇得率。

６）静态吸附时间的选择。平行量取４份１０ ｍＬ湿树脂，加入适量的上样液，以１４０ ｒ／ｍｉｎ恒温振荡，分别在静态吸附１、２、４、８ ｈ时取吸附残液，测定Ａ４６３ ｎｍ。

７）静态吸附与动态吸附的比较。称取等量树脂２份，加入同浓度、同体积的上样液，在吸附平衡后加入同体积、体积分数为１０％的乙醇解吸，静态吸附时间为６ ｈ，动态吸附时上样液重复吸附２次。比较吸附残液与解吸液的Ａ４６３ ｎｍ。

１．２．３ 梓醇浓度的测定 梓醇浓度的测定采用分光光度法［６］，对待测溶液进行适度稀释，取０．３ ｍＬ梓醇溶液，加入０．７ ｍＬ无水乙醇，制成以体积分数为７０％的乙醇为溶剂的不同浓度的梓醇溶液，以体积分数７０％的乙醇为空白对照。ρ＝（Ａ－０．０６２ ６）／７．５８３ １；其中ρ为梓醇浓度（ｍｇ／ｍＬ），Ａ为吸光度。