养胃进食颗粒提取工艺研究

摘要：目的 优选养胃进食颗粒的最佳提取工艺。方法 采用正交试验设计，以养胃进食颗粒中药材的出膏率、浸出物及其主要有效成分橙皮苷的含量为指标，用多指标综合评分法进行数据处理，优选提取条件。结果 最佳提取工艺为提取2次，第1次加10倍量水回流1.5 h，第2次加8倍量水回流1 h。结论 优选出的养胃进食颗粒提取工艺合理、稳定、经济。

关键词：养胃进食颗粒；正交试验；提取工艺；橙皮苷；多指标综合评分法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.018

中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）12-0049-03

养胃进食颗粒是根据养胃进食丸的药物处方改进而成，处方来源于《御药院方》[1]，由人参、陈皮、苍术、厚朴、甘草等中药组成，有滋养脾胃、消痰导气、祛风寒暑湿冷邪气之功效，用于治疗脾胃虚弱、心腹胀满、面色萎黄、全不思食等。将丸剂改为颗粒剂，具有易于储存、携带、服用等优点。本研究以方中陈皮的主要有效成分橙皮苷含量及复方药材的出膏率、浸出物为考察指标，采用正交试验设计，优选水提取工艺条件，为养胃进食颗粒的研究提供基础。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（Waters 2695-2996），数控超声波清洗器（KQ-250DE，昆山市超声仪器有限公司），电子天平（AL204，上海梅特勒-托利多仪器有限公司），电子分析天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司CPA225D）。

药材购于哈药集团世一堂中药饮片有限责任公司，中药饮片由黑龙江中医药大学药学院药用植物教研室鉴定，经检验符合2010年版《中华人民共和国药典》（一部）各药材项下规定标准。橙皮苷对照品（批号110722-200610），购于中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计

通过预试验，发现影响药材水提取的因素主要有加水量、提取次数及提取时间。根据生产实际，分别选取3个水平，采用梯度设计，正交试验因素水平见表1。

2.2 出膏率测定

将9种储备液分别浓缩，水浴蒸干，在105 ℃干燥3 h后置干燥器中，冷却0.5 h，取出，迅速称重，分别计算出膏率。

2.3 浸出物含量测定

取“2.2”项下各组干膏适量，研细，分别精密称取4 g，置250 mL锥形瓶中，精密加乙醇100 mL，密塞，称定质量，室温放置1 h后，于水浴上保持微沸1 h。放冷后再称定质量，加乙醇补足差失的质量，振摇，混匀，滤过，精密吸取滤液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速称重，计算浸出物含量。

2.4 橙皮苷含量测定

2.4.1 色谱条件 色谱柱：Thermo Quest Hypersil BDS C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：甲醇-水-冰乙酸（35∶61∶4）；检测波长：283 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25 ℃[2]。

2.4.2 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成浓度为0.197 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备 取“2.2”项下的各组干膏适量，研细，分别精密称取1 g，放入50 mL锥形瓶中，加甲醇30 mL，超声处理40 min，滤过，以甲醇10 mL洗涤滤渣，定容至50 mL量瓶中，以微孔滤膜（ 0.45 μm）滤过，作为供试品溶液。

2.4.4 阴性对照溶液的制备 按1/5处方量称取除陈皮之外的其他复方药材，按“2.4.3”项下方法制备。

2.4.5 测定法 分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液5、10、10 ?L，注入液相色谱仪，按“2.4.1”项下色谱条件进行测定，供试品溶液中橙皮苷的色谱峰与其他组分分离良好，阴性对照无干扰。色谱图见图1。

2.4.6 标准曲线及线性关系考察 分别精密吸取橙皮苷对照品溶液2、4、6、8、10 ?L，进样测定。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得回归方程Y=8.42×106X-45 439，r=0.999 8。结果表明，橙皮苷进样量在0.394～1.97 ?g范围内线性关系良好。

2.4.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液5 ?L，连续进样6次，测定峰面积，计算RSD=0.98%（n=6）。

2.4.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10 ?L，分别在0、2、4、8、16、24 h进样，测定峰面积，计算RSD=0.95%（n=6）。

2.4.9 重复性试验 取1号样品6份，每份1.0 g，精密称定，按“2.4.3”项下方法处理，得供试品溶液，每份进样10 ?L，测得1号样品中橙皮苷平均含量为3.75 mg/g（RSD=2.1%）。

2.4.10 加样回收率试验 取1号样品6份，每份0.5 g，精密称定，分别加入橙皮苷对照品1.8 mg，按“2.4.3”项下方法处理，进样测定，得橙皮苷的平均加样回收率为97.66%（RSD=1.52%）。

2.5 正交试验结果与分析

按1/5处方量分别称取9份药材，分别加水浸泡1 h后，按表2进行L9（34）正交试验，将提取液分别滤过，合并，分别测定出膏率、浸出物和橙皮苷含量，优选最适宜的水提取工艺条件。各组试验均在平行条件下操作。结果见表2，综合评分方差分析结果见表3。

直观分析结果表明，综合评分数据的极差大小显示各因素作用主次为A>B>C，方差分析结果表明，加水量对指标成分的提取影响最大，提取次数次之，提取时间的影响较小，最优水平组合为A2B3C3。各因素对橙皮苷含量、出膏率、浸出物得量没有显著影响。因提取2次和提取3次结果相差较小，综合分析，考虑到工业生产节约成本、提高效率，最终确定最佳工艺组合为A2B2C2，即回流2次，第1次以10倍量的水回流1.5 h，第2次以8倍量的水回流1 h。

2.6 验证试验

取复方药材共39 g（1/5处方量），提取2次，第1次加10倍量水、回流1.5 h，第2次加8倍量水、回流1 h，进行3次平行试验，平均出膏率为32.81%，浸出物为9.50 g，橙皮苷含量为66.84 mg。结果表明，验证试验结果与正交试验结果基本相同，所确定的提取工艺稳定，合理可行，可操作性强，可以作为养胃进食颗粒复方药材的最佳提取工艺。

3 讨论

养胃进食颗粒的组方中含陈皮、厚朴。有研究显示，橙皮苷对胃肠有兴奋作用，具有抗炎、抗菌、抗氧化等作用，是健胃消食类药物的主要药用成分，故以橙皮苷作为复方代表成分进行试验[3-5]。

在橙皮苷含量测定试验中，供试品提取方法分别采取了超声提取和回流提取两种方法，结果表明，二者橙皮苷含量接近，超声提取方法提取法省时、便捷，优于回流提取方法。

本研究采用正交试验、综合评分[6]等方法对养胃进食颗粒工艺进行优选，确定了最佳提取工艺，最佳工艺在验证试验中得到较好的验证，优选了工艺，提高了制剂质量，达到了预期目的。

参考文献：

[1] 元・许国祯.御药院方：卷三[M].北京：中医古籍出版社，1983：36.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：177.

[3] 李棣华.厚朴研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2012，14（9）：220- 222.

[4] 李玉山.橙皮苷研究新进展[J].科技导报，2009，27（22）：108-115.

[5] 张保顺.橙皮苷衍生物的合成及其药理作用的研究[D].重庆：西南大学，2011.

[6] 黎婧.咳喘平颗粒制备工艺及质量标准研究[D].成都：成都中医药大学，2010.

（收稿日期：2013-05-21，编辑：陈静）