TEM观察益肺饮诱导肺癌细胞凋亡

郝宏党　陈晓琳　蔡　硕　蔡玉文

摘　要：电镜观察益肺饮诱导肺癌细胞凋亡。镜下可见：细胞凋亡分为早期阶段、中期阶段、凋亡小体形成阶段和晚期阶段(3期4阶段)，其超微结构主要可见到细胞形态、胞浆、胞核、染色质的变化，及细胞凋亡的特异性标志――凋亡小体。提示：细胞凋亡多见孤立、分散的癌细胞。益肺饮可谤导肺癌细胞凋亡。

关键词：TEM；益肺饮；细胞凋亡

中图分类号：11285.5

文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1390－02

研究中药诱导肿瘤细胞凋亡国内报道不多。笔者应用透射电镜(TEM)观察了中药益肺饮灌胃治疗接种Lewis肺癌株小鼠实体瘤，以血清药理法诱导A549人肺癌细胞株凋亡，现将其超微结构特征结果总结如下。

1　材料与方法

1．1 实体瘤组取瘤组织切成1mm3小块，投入2.5％戊二醛固定2h以上，漂洗后，1％锇酸固定1h，乙醇梯度脱水，EponS12树脂包理，超薄切片，铀铅双染色，TEM观察。

1．2瘤株组2.5％戊二醛培养瓶内原位固定2h以上，橡皮铲刮下细胞，放入离心管内，2000r/min离心15min，漂洗后，如上法固定，脱水、包埋、切片、染色、观察。

2　结　果

2．1 细胞凋亡初期阶段凋亡细胞与其周围细胞的间隙增宽，连接消失，体积缩小，电子密度增强。细胞表面微绒毛明显减少，胞浆内线粒体肿胀，粗面内质网扩张，表面核糖体脱落。胞核大，异染色质浓缩呈团块状，积聚在核的周边。细胞膜正常。

2．2细胞凋亡中期阶段除细胞膜外，其余细胞形态学变化均与初期阶段相同。该阶段，细胞膜变化尤为明显。胞膜表面呈数量不一、大小不等、电子密度适中的泡状膨出(发泡、长芽)。此时，凋亡的细胞从癌巢中脱离，成为孤立

2．3凋亡小体形成阶段细胞破裂，形成单个或数个具有细胞凋亡的特异性结构――凋亡小体。

2．4细胞凋亡晚期阶段凋亡小体被其周围的吞噬细胞吞噬。

3　讨　论

细胞凋亡(1972“Kerr”命名)是一种具有特征形态改变(凋亡小体)的细胞死亡方式。镜下观察益肺饮诱导肺癌细胞凋亡，肺癌细胞凋亡初期阶段――中期阶段――凋亡小体形成阶段――晚期阶段多见孤立、分散的癌细胞。凋亡小体在癌株组呈圆形或椭圆形，体积较小；在实体瘤组呈不规则形，体积较大。调亡小体是凋亡细胞形态学特征性指标之一，明确凋亡小体的特征对于探讨凋亡发生具有重大意义。

益肺饮为益气活血解毒方药。益气养阴、化痰消积、活血解毒为基础，具有扶正培本、清热解毒、理气化瘀、软坚散结之功效，是本院临床治疗肺癌晚期气阴两虚型的有效方剂。电镜观察证明，益肺饮对小鼠Lewis肺癌细胞和A549人肺癌细胞株有明显的抑制肿瘤增殖作用，并可诱导其凋亡。为临床治疗肺癌提供了可靠的实践依据，为治疗肿瘤开辟新的途径。积极寻找能诱导肿瘤细胞凋亡的药物(中药)具有重要的理论及实际意义。