时间：2022-07-05 08:35:13
摘要：目的 建立测定生新发胶囊女贞苷含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（35∶65），流速为1.0 mL/min，检测波长为224 nm。结果 特女贞苷线性范围为0.15～0.90 μg，平均加样回收率为100.35%，RSD=1.43%。结论 本方法准确、可靠、重复性好，能测定生新发胶囊女贞苷的含量，可作为生新发胶囊质量控制的含量检测方法。
关键词：生新发胶囊；特女贞苷；高效液相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.020
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）12-0054-02
生新发胶囊是由何首乌、女贞子、当归、补骨脂、天麻、黄精等中药经适宜的加工、炮制、提取而制成的中药复方制剂，具有补益肝肾、养血生发的作用。临床主要用于各种原因引起的脱发、秃顶等。方中女贞子具有滋补肝肾、明目乌发功效，用于治疗眩晕耳鸣、腰膝酸软、须发早白等[1]。现代药理研究表明女贞子的有效成分为特女贞苷[2]。该品种质量标准中，尚无含量测定项。为了完善、提高本产品的质量标准，本研究以制剂中女贞子为研究对象，采用高效液相色谱法（HPLC）测定生新发胶囊女贞苷的含量。现报道如下。
1 仪器与试药
Agilent 1260高效液相色谱仪，VWD检测器，Agilent 1260化学工作站；GR-202电子分析天平（精确度为十万分之一）；BUG40型超声波清洗器（上海一恒科学仪器有限公司）。
生新发胶囊样品（批号110301、110602、110304、120605、121006、110203，广西玉林制药集团有限责任公司提供）；对照品特女贞苷（批号111928-201203，购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；甲醇为色谱纯；水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：甲醇-水（35∶65）；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：224 nm；进样量：10 ?L。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液制备 精密称取特女贞苷对照品适量，加
甲醇制成0.100 mg/mL的特女贞苷对照品储备液。精密吸取上述储备液3.0 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得30.0 ?g/mL的特女贞苷对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液制备 取生新发胶囊内容物约1.0 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加70%乙醇30 mL，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45 ?m）滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液制备 按处方比例和工艺，制成不含女贞子药材的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。
2.3 系统适用性试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，按“2.1”项下色谱条件，各进样10 ?L，由色谱图可见，在与对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间处无干扰（见图1）。
2.4 线性关系考察
精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30 ?L，按“2.1”项下色谱条件，进样并测定峰面积。以进样量（?g）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=1124.55X-2.47，r=0.999 8（n=6）。特女贞苷进样量在0.15～0.90 ?g范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液10 ?L，按“2.1”项下色谱条件，分别连续进样6次，记录色谱图的峰面积。结果特女贞苷峰面积的平均值为334.4，RSD=0.93%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
取同一批号（批号为110301）的样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、12、24 h进样1次，测定峰面积。结果特女贞苷峰面积的平均值为356.5，RSD=0.95%（n=6）。表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.7 重复性试验
取同一批号（批号为110301）的样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，平行制备6份，按“2.1”项下色谱条件，进行6次平行试验。结果特女贞苷平均含量为0.800 0 mg/粒， RSD=0.94%（n=6），表明本法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
取已知含量（特女贞苷0.800 0 mg/粒）的同一批样品（批号110301）约0.5 g，精密称取6份，分别精密加入“2.2.1”项下方法制备对照品储备液3、3、6、6、9、9 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。平均回收率为100.35%，RSD=1.43%，表明该方法准确度良好。
2.9 样品含量测定
分别取6个不同批号生新发胶囊内容物，每批3份，约1.0 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，以外标法计算含量，结果见表2。
3 讨论
本试验根据特女贞苷的紫外扫描图谱，并参照2010年版《中华人民共和国药典》（一部）女贞子含量测定项[1]，选择224 nm为检测波长。
在流动相比例选择上，比较了甲醇-水的不同比例（45∶55、40∶60、35∶65、20∶80），结果比例为（35∶65）时，可将主峰与杂质峰有效分离，峰形好，分离度大于1.5，并且理论塔板数达8000以上[3-5]。
供试品溶液制备比较了用不同浓度的甲醇和乙醇进行超声处理和水浴加热回流两种提取方法。对超声提取时间分别考察了30、40、50、60、80、100 min，回流时间分别采用30、60 min，溶剂采用50%甲醇、70%甲醇、甲醇、50%乙醇、70%乙醇和乙醇。结果表明，用70%乙醇超声处理30 min就能提取完全，而且方法简单快速。故选用本试验提取方法[3-5]。
特女贞苷属于裂环环烯醚萜苷类化合物，为女贞子专属性成分，作为女贞子药材质量控制的重要指标[2]。按照国家标准提高要求，本试验用HPLC测定了处方中女贞子的有效成分特女贞苷的含量，方法简便、准确、专属性强，为该制剂制定新的检测方法和质量标准提供了参考。
中药复方制剂由多味药组成，中药药效多种活性物质同时发挥作用而达到治疗效果，故只对于单味药的检测是通常难以控制制剂的内在质量[6]，因此，下一步拟同时测定何首乌、女贞子、黄芪、当归的有效成分，保证临床用药的安全性和有效性，进一步提高和完善生新发胶囊的质量标准。
参考文献：
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（收稿日期：2013-05-15，编辑：陈静）