Cripto—1在恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

摘要：目的 分析恶性卵巢上皮性肿瘤 （Malignant ovarian epithelial tumors）组织中cripto-1的表达情况及其与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理特征之间的关系。方法 采用免疫组化技术检测50例的恶性卵巢上皮性肿瘤患者癌组织中的cripto-1表达情况，并分析其与临床病理特征间的关系。结果 在50例标本中， cripto-1在癌组织中的表达显著高于正常卵巢组织（χ2=41.302，P

关键词：cripto-1； 恶性卵巢上皮性肿瘤 ； 临床病理特征

卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，发病率是第三位，但死亡率却是第一位 [1]，其转移、扩散是恶性肿瘤的重要生物学特点，也是死亡的主要原因。近来，对卵巢恶性肿瘤早期诊断及治疗的研究越来越多地注重在靶点问题上，而靶向治疗是近年来研究的热点，寻找一个有效的靶点日益成为科研工作者的一个目标，目前研究发现CR-1 在多种恶性肿瘤中呈高表达状态，因此探讨、研究其在恶性卵巢组织细胞中的表达及致癌机制，CR-1有望成为一个新的治疗靶点。CR-1的生物学作用很多，包括胚胎发育中原肠胚的形成和胚层发育，哺乳动物乳腺发育和乳蛋白表达，血管内皮细胞增殖和血管生成等[2]。此外，它还与肿瘤有极高的相关性，成体内通常不表达，但却过表达于75%～80%的乳腺癌[3]、结肠癌、肺癌以及50%～60%的卵巢癌、胃癌、胰腺癌及癌[4]。多项研究已表明从正常粘膜到癌前病变再到癌，CR-1基因的表达呈递增趋势，提示CR-1基因的存在可能代表着细胞生物学转化的中间环节，CR-1阳性提示组织学尚正常的组织细胞存在癌变的可能[5] 。

1 实验材料

1.1 病例资料 以 2006～2008年在江苏大学附属人民医院妇产科手术治疗，术后病理切片证实为卵巢肿瘤的患者石蜡标本为研究对象，分为三组①良性卵巢肿瘤20例（其中卵巢浆液性囊腺瘤12例，卵巢黏液性囊腺瘤8例）。②恶性卵巢上皮性肿瘤50例（其中卵巢浆液性囊腺癌36例，卵巢黏液性囊腺癌14例）。③对照组采用正常卵巢组织10例 （因子宫肌手术瘤切除的正常卵巢组织）。卵巢癌组织按国际妇产科联盟（FIGO2OOO年 ）临床分期及病理分级标准：临床分期分为早期 （I～II期 ）22例，晚期（III～IV期）28例；组织学分级分为高分化20例，中、低分化30例；盆腔淋巴结转移阳性者23例，未转移者27例。50例肿瘤患者年龄24～77岁，平均50.5岁。

1.2主要试剂 Cripto-1抗体，兔抗人单克隆抗体 ，浓缩液 ，亲和纯化抗体。

其它：粘片剂（多聚赖氨酸）、二甲苯、无水乙醇、苏木精、双氧水、蒸馏水、中性树胶等。

2 实验方法

2.1.石蜡切片的制作 蜡块修整后，用石蜡切片机连续切制成厚度为 4μm 石蜡切片 4 张。

2.2 HE 染色

2.3 免疫组化染色 采用免疫组化（二步法），按试剂盒提供的说明书进行。本实验采用己知阳性的卵巢癌切片（试剂公司提供）作为阳性对照；阴性对照组选用 0.01M PBS 缓冲液代替一抗，其余步骤不变，以除外假阳性结果。

3 结果判断标准

用低倍镜和高倍镜观察切片，判断标准：采用半定量积分法，按着色细胞百分数计分：着色细胞﹤10%为 0 分；≥10%但≤40%为 1 分；﹥40%但﹤70%为 2 分；≥70%为 3 分。按着色强度计分：无着色为 0 分；淡黄色为 1 分；棕黄色为 2 分。将着色细胞百分数计分与着色强度计分相乘作为总计分。总计分为 0 分为阴性（-）；1～3 分为弱阳性 （+）； 4 分以上为强阳性 （++）。最后统计时以 （-）判定为阴性，（+）和（++）判定为阳性。

4 数据处理

应用 SPSS13.0 统计软件，进行 χ2检验和相关性分析用，以 P

5 结果

5.1不同类型卵巢组织中 Cr-1的表达（见表1） Cr-1的表达：Cr-1阳性表达均位于细胞浆，染色深度不等，为淡黄至棕黄色（见图1～4）。在10例正常卵巢组织Cr-1不表达，在20例卵巢良性肿瘤中Cr-1的表达数为0例；在50例卵巢癌中Cr-1阳性表达数为37例（74.0%）。Cr-1在卵巢癌组的表达率均高于正常组、良性肿瘤组，差异具有显著性（P

5.2 卵巢癌中 Cr-1表达与临床病理参数的关系 （见表2） 在22例早期卵巢癌组织中，Cr-1阳性表达数分别为12例（54.55%）；28例晚期卵巢癌组织中， Cr-1阳性表达数分别为 25例（ 89.29%）。随着临床分期的增高，Cr-1阳性表达率升高，Cr-1的表达与临床分期差异具有显著性 （P

6 讨论

Cripto-1基因有两种表现形式，一种是由2kb mRNA编码的原癌基因，包含6个外显子。另一种是由2kb mRNA编码的原癌基因，与其相比缺乏2个外显子[6]。大量研究证实，CR-1 与肿瘤有极高的相关性，成体内通常不表达，但却过表达于75%～80%的乳腺癌、结肠癌、肺癌以及50%～60%的卵巢癌、胃癌、胰腺癌及癌。此外在在宫颈上皮内瘤样病变及乳腺导管原位癌等癌前病变中的表达水平亦显著提高[8]。CR-1 蛋白内部具有标志性的 EGF-CFC 功能结构域，可与细胞表面多种受体结合行使功能。它既可以作为一种分泌因子，也可作为细胞表面组分调节Nodal、Vg1、GDF1 与 Activin 受体的结合，也可作为辅助因子参与TGF-β家族成员的多个细胞信号通路的传递过程，还参与活化多条控制细胞增殖与凋亡能力的信号通路。此外，Cripto-1在结肠腺瘤、胃肠上皮化生及乳腺导管原位癌等癌前病变中的表达也高于正常组织。多项研究已表明，从正常组织到癌前病变再到癌，Cripto-1的表达呈递增趋势，提示Cripto-1的存在可能是细胞生物学转化的中间环节，Cripto-1阳性提示组织学尚正常的组织细胞存在有癌变的可能性。越来越多的研究证据表明，Cripto-1是一个潜在的靶抗原，其相关基因的检测有助于恶性肿瘤的早期诊断、评估预后和疗效预测，靶向干预Cripto-1活性在恶性肿瘤生物治疗中具有良好应用前景。

本研究采用免疫组织化学技术分析恶性卵巢上皮性肿瘤 （Malignant ovarian epithelial tumors）组织中cripto-1的表达情况及其与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理特征之间的关系[7]，发现了在恶性卵巢上皮性肿瘤中cripto-1的高表达情况与分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关，显示的cripto-1表达量与恶性卵巢上皮性肿瘤病理特征具有重要的关系，为卵巢癌的治疗寻找新的靶点。

综上所述，本研究结果提示，cripto-1的异常高表达可能参与了恶性卵巢上皮性肿瘤的发生发展，这为进一步的功能学研究和扩大实验提供了线索。也为寻找到新的恶性卵巢上皮性肿瘤治疗靶点提供了一种新的思路。

参考文献：

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[2]Park JE. Annexin A. Is a Potential Angiogenic Mediator[J].Biochem Biophys Res Commun，2005，337（4）：1283-1287.

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[6]Bosch FX. E-cadherin is a selective and strongly dominant prognostic factor in squamous cell carcinoma：a comparison of E-cadherin with desmosomal components [J].Int J Cancer，2005，146（5）：779-790.

[7]徐嵘嵘.Cripto-1在子宫颈癌中的表达及临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2010，08.