论牛蛙养殖菌感染实验及防治方法

摘 要：近年来，很多牛蛙养殖场经常发生和流行爱德华氏菌病、红腿病和腐皮病，患病蛙大量死亡，经济损失严重，牛蛙在人工养殖过程中，细菌性疾病危害严重，但传染来源往往不明，难于有效控制，因此，探明这些疾病的发生发展规律和有效防治方法。

关键词：牛蛙；试验方法；菌感染防治

我国广大牛蛙养殖地区，牛蛙养殖池中不时有青蛙窜人，有的养殖场则用野生蛙和蝌蚪饲喂牛蛙。青蛙究竟有哪些疾病，它们对牛蛙传染性疾病的敏感性如何，是否会将疾病传染给牛蛙?国内外对此均少见报道。本试验采用牛蛙爱德华氏菌病、红腿病和腐皮病的病原菌分别感染青蛙和牛蛙，旨在了解牛蛙常见病原菌对青蛙的致病力。为探讨青蛙在牛蛙传染病发生发展中的作用和制定有效防治措施提供科学依据。

1 青蛙与牛蛙试验方法

1.1 试验材料

1.1.1 疾原菌 供试病原菌为迟钝爱德华氏菌ED9309，不动杆菌90617，克氏耶尔森氏菌93-10-2和奇异变形菌93-10-1等4个菌株，均是笔者近年来分离的牛蛙致病菌，并经过了系统的微生物学分类鉴定。

1.1.2 青蛙和牛蛙 青蛙购于市场，牛蛙购于养殖场。所有供试蛙均为健康蛙，在水族箱内驯养3d后用于试验。

1.2 试验方法

将供试病原菌分别接种于普通营养琼脂平板，置28℃恒温培养箱中培养20～22h，用生理盐水洗下菌苔，麦氏比浊法测定菌数，然后分别取菌液按相关方法接种牛蛙和青蛙。克氏耶尔森氏菌和奇异变形菌采用皮下注射和浸泡两种途径接种：皮下接种菌敷为1.8×108／只；浸泡感染是先将蛙体消毒，用灭菌针头在大腿处划痕，再将蛙在含0.5×108个／mL病原菌的水体中浸泡24h，然后置清水中饲养观察，不动杆菌采用肌肉注射和口服两种途径接种，肌肉注射的菌数为1.5×108个／只，口服菌数为4.5×108个／只。爱德华氏菌亦采用皮下注射和口服两种途径接种，皮下注射茵数为1×108个／只，口服菌数为3×108个／只。口服感染时，均是先将适量膨化饵辩塞人蛙食道，再将菌液注人饵料上，以防止菌液流失。各组均设相应的对照组(甩无菌生理盐水代替菌液)。试验组和对照组隔离饲养，水温控制在(28士3)℃，定时观察、记录发病和死亡情况，并对病死蛙逐个作病理剖检。

2 克氏耶尔森氏菌和奇异变形菌的感染试验结果

在克氏耶尔森氏菌和奇异变形菌的感染试验中，皮下注射感染的青蛙和牛鲑在接种后第一天多数发病死亡，并表现出较典型的腐皮病病症。浸泡感染中除奇异变形菌浸泡的1只青蛙在第一天发病死亡外，其它接种蛙发病死亡的时间均有所推迟，但在2～7d内全部死亡(表1，2)而各组对照蛙均未发病和死亡。

“#”腹部严重积水膨胀，口腔内有粘液，注射部位和划痕处严重出血或溃烂，“+++”腹部膨胀，注射部位或划痕处充血发炎；“+”腹部轻度臌胀，注射部位和划痕处轻度发炎。

备组蛙体重均为20~40g(2)“#”注射部位或划裹处严重溃烂或严重发红，“#”注射部位或划痕处皮肤轻度溃烂；“+”注射部位或划痕处皮肤轻度发炎，用不动杆菌和爱德华氏菌感染的青蛙和牛蛙一般在接种后2～3d开始发病死亡，除口服爱德华氏菌的1只青蛙在接种后第4d表现轻教症状康复外，所有感染蛙最终全部死亡(表3、4)，而各对照蛙均无异常。

各组蛙体重均为20～40g;(2)“+++”注射部位或划腹部、后肢大腿腹面严重发红，全身肿胀，内脏器官有红腿病病变；“#”注射部位、腹部、后肢大腿腹面中度发红，全身肿胀，内脏器官有红腿病病变“++”注射部位、腹部、后肢大腿腹面轻度发红和全身轻度肿胀，内脏器官有红腿病病变；“+”注射部位发红、肿胀，全身症状不明显。

备组蛙体重均为20～40g；(2)“#”腹部严重臌胀。口腔有牯液，腹部或腿部充血或出血，肝肿大、出血或有坏死灶，肾充血或出血，胃肠充血或出血、有粘液“+++”腹部膨胀，体表或肢部轻度发红，肝和肾肿大、充血或出血。胃肠中度充血或出血“++“腹部臌胀，肝、肾肿大，胃肠充血或出血。”+”腹部轻度膨胀，胃肠有粘液。

3 结 论

本试验表明，采用爱德华氏菌、不动杆菌、克氏耶尔森氏菌和奇异变形菌4种牛蛙病原菌感染青蛙和牛蛙，均能使之发病死亡。病青蛙具有牛蛙爱德华氏菌病、红腿病和腐皮病的典型症状与病变，而且在相同条件下，青蛙与牛蛙所表现的症状和病程经过也极为相似，由此证实，青蛙与牛蛙一样，对上述疾病具有高度易感性。这一结果在牛蛙传染病的流行病学调查和综合防治中必须予以高度重视，密切注意和防止青蛙在自然条件下将疾病传染给牛蛙。事实上，笔者在以往进行的牛蛙病流行病学的调查研究中曾发现，牛蛙养殖池中有患红腿病的青蛙，池中的牛蛙也同时存在该病，这就意味着青蛙在自然条件下也可能发生与牛蛙相同的传染性疾病，并将对人工养殖牛蛙构成威胁，成为牛蛙病的一个重要传染来源。为此，在牛蛙养殖过程中，除了应防止病牛蛙将疾病传染给健康牛蛙以外，还应在牛蛙池周围搭设屏障以阻止青蛙窜人，而且不要用青蛙及其蝌蚪饲喂牛蛙，以杜绝各种可能的传染来源。同样，为了保护野生青蛙，养殖者也应避免乱扔病死牛蛙，以改善和保护农业生态环境。在感染试验中，所有皮下注射和肌肉注射感染的蛙发病和死亡时间比口服和浸泡感染的要快，这是因为注射接种的致病菌免于突破皮肤这一天然屏障所致，而浸泡和口服的致病菌必须突破机体的防御屏障。此外，口服接种时菌数有一定的损失，因而发病时间稍迟。爱德华氏菌的口服感染中，有一只青蛙只表现轻微症状而未死亡，这可能是由于菌液损失过多，菌数不足以使青蛙致死的缘故。