益肾降压颗粒对肾虚模型小鼠体内自由基代谢的影响

(山东中医药大学，山东　济南250014)

摘要：目的：探讨益肾降压颗粒对肾虚模型小鼠体内自由基代谢的影响。方法：取健康小鼠80只，雌雄兼用，随机分为3组。正常组20只，每天灌服生理盐水0.15mL/10g体重，连续7天；造模组30只，每只腹腔注射氢化考的松1mg/天×7，同时，灌服生理盐水0.15ml/10g体重，连续7天；益肾降压颗粒组30只，每只腹腔注射氢化考的松1mg/天×7，同时，灌服益肾降压颗粒混悬液0.15mL/10g体重，连续7天(含生药量0.06g，为临床预计用量的6倍)。于第8天处死取血、脑、甲状腺、胸腺、肾上腺、脾脏，分别测定SOD活力、LPO含量及全血中CSH-Px活力。结果：益肾降压颗粒可使萎缩的腺体组织有不同程度的改善和恢复，肾上腺重量增加尤为显著(P＜0.01)，能使肾虚小鼠红细胞及组织中SOD趋向正常或增高，使小鼠血浆和甲状腺组织中的LPO含量明显低于模型组，差异显著(P＜0.01，P＜0.01)。使GSH－Px活力比正常组有所提高，但与肾虚模型组比较无显著性差异(P＞0.05)。结论：益肾降压颗粒能使氢化考的松诱发的“肾虚”模型小鼠萎缩的腺体组织得到不同程度的改善和恢复，重量增加，并能提高肾虚模型小鼠红细胞内的SOD和降低组织中脂质过氧化物含量。

关键词：益肾降压颗粒；自由基代谢；肾虚模型；小鼠

中图分类号：R－33　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2007)05－0871－03

生物体内的自由基主要为氧自由基，包括超氧化物自由基、羟自由基及其活性衍生物过氧化氢、单线氧、脂氧自由基、脂质过氧自由基、脂质过氧化物等。抗氧化系统包括酶类超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)和抗氧化剂维生素A、维生素C、维生素E、谷胱甘肽等。越来越多的证据表明，自由基参与高血压的发生、发展及并发症的形成过程。益肾降压颗粒是本校已故教授周次清治疗高血压的经验方剂，对改善高血压病症状及降低血压取得了一定的疗效。为探讨该药的药理学依据，笔者观察了益肾降压颗粒对肾虚模型小鼠的体内自由基代谢的影响，现报道如下。

1材料与方法

1.1材料①动物：昆明种小鼠80只，体重26～32g，购自山东省实验动物中心。②药品：益肾降压颗粒由山东中医药大学附属医院提供，批号930821，为淡棕黄色干粉，每克于粉约含4.0g生药。氢化考的松注射液由山东新华制药厂生产，批号890412。③仪器：XZ－4型小鼠自由活动测定仪由中国医科院药物研究所生产。

1.2造模及给药　取健康小鼠80只，雌雄兼用，随机分为3组，按常规喂养。①正常组，20只，灌服生理盐水0.15mL/10g体重，连续7天；②造模组，30只，每只腹腔注射氢化考的松lmg/天×7，同时每天灌服生理盐水0.15mL/10g体重，连续7天；③益肾组(益肾降压颗粒组)，30只，每只腹腔注射氢化考的松1mg/天×7，同时每天灌服益肾降压颗粒混悬液0.15mL/10g体重，连续7天(含生药量0.06g，为临床预计用量的6倍)。

1.3 检测　于第8天称体重，眼眶取抗凝血并处死，立即取出脑、甲状腺、胸腺、肾上腺、脾脏，用生理盐水洗净，剥除表面血管、脂肪、结蒂组织，滤纸吸干水分，电子天平称重。分别取各组小鼠腺体组织做匀浆，3000r/min离心10min，制备成10％(W/V)组织液，组织液可做SOD活力和LPO含量的测定。取抗凝血3000r/min离心10min，血浆测LPO，沉积红细胞经洗涤、破溶、抽提、离心处理后测SOD。采用光化学扩增法测小鼠红细胞、组织中SOD活力。DTNB直接法测全血中GSH－Px活力。硫代巴比妥酸分光光度法(TBA法)测量血浆中LPO含量，用八木国夫改良法测小鼠组织中LPO含量。

1.4 统计学方法　先行组间方差齐性检验及方差分析，各组间两两比较用t检验。

2结果

2.1对小鼠基本活动情况的影响 注射氢化考的松后。模型组小鼠逐渐呈现萎靡不振，食欲减少，体重减轻，弓背少动，反应迟钝，竖毛，皮肤湿冷，畏寒等体征，造模组死亡率明显增高，益肾组小鼠体征较之造模组有显著改善，症状减轻，死亡率低。

2.2 对小鼠体重腺体组织重量的影响使肾虚小鼠红细胞及组织中SOD趋向正常或增高。

2.4对小鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)的影响。

表明肾虚模型组与益肾组比正常组GSH－Px活力有所提高，但前二组之间无显著性差异(P＞0.05)。

2.5 对肾虚模型小鼠血浆及组织中脂质过氧化物(LPO)的影响。

肾虚模型组小鼠血浆、甲状腺、肝脏和脑组织中LPO含量高于正常组，有显著性差异，益肾组小鼠血浆和甲状腺组织中的LPO含量明显低于模型组，差异显著(P＜0.01，P＜0.01)，肝脏及脑组织中LPO亦低于模型组，但无显著性差异。表明益肾降压颗粒能明显降低组织中过氧化物的生成。

3讨论

研究发现，自由基参与心血管系统的多种生理、病理过程。自由基生成增多或抗氧化机制减弱都将导致氧化应激状态，导致内皮细胞功能失调、血管平滑肌细胞增殖、炎症等，引发多种疾病。在原发性高血压及脑卒中、动脉粥样硬化、心肌梗塞等高血压作为危险因素的疾病中，均可发现氧自由基升高。

老年人高血压归属于中医学“眩晕”等病证的范畴，其发病年龄和临床表现表明，肾气虚衰是本病病理机制的基本所在。益肾降压颗粒是在已故全国名老中医、山东中医药大学周次清教授的经验方的基础上，在中医辨证论治思想指导下，结合中药现代药理研究成果而总结出来的一条辨病与辨证相结合的新思路。该方主要由槲寄生、女贞子、淫羊藿组成。槲寄生，味苦甘平，入肾肝两经，能平补肾气。《医林纂要》说“坚肾……”。《本草经疏》载槲寄生能补肾气，“肾气足则齿坚而发眉长”。黄宫绣认为本药“性平而和，不寒不热，号为补肾补血要剂”。女贞子味苦甘平，补而不腻，补中有清，滋阴补肾。《本草经疏》曰：“女贞子，气味俱阴，正入肾除热补精之要品，肾得补，则五脏自安，精神自足，有病去而身肥健矣”。《本草再新》载本品能“养阴益肾”。淫羊藿味辛温升浮，补肾助阳。《医学入门》曰：“补肾虚，助阳”。《纲目>载：“淫羊霍，性温不寒，……真阳不足者宜之”。现代药理研究表明，槲寄生中的主要有效成分为黄酮类化合物和齐墩果酸等，其叶、茎、果中均含有丰富的抗氧化活性物质，无论是抗氧化酶还是小分子的抗氧化物质种类多，数量大，其中尤以叶最为显著，能明显提高老年大鼠GSH－Px活性，升高下丘脑SOD活性。女贞子含女贞苷、10－羟基女贞苷、橄榄苦苷、齐墩果酸等成分，其水煎剂连续灌胃可使幼年小鼠胸腺、脾脏重量明显增加，还能使成年小鼠脾脏重量增加。齐墩果酸能明显降低脂质过氧化物(LPO)水平，降低动脉壁胆固醇含量和粥样硬化斑块发生率，减少脂质在主要脏器的沉积，有促进免疫功能及预防AS(动脉粥样硬化)的作用。刘江波等报道，淫羊藿总黄酮可明显提高小鼠脾脏SOD活性，减少心肝组织过氧化脂质形成，减少心肝等组织的脂褐素形成。曾南等人药理实验发现，巫山淫羊藿多糖多相脂质体能明显提高老龄动物血液及组织中SOD、GSH－Px的活性，并能明显降低老龄动物血清及肝组织中LPO的含量，使老龄小鼠心肌中脂褐质含量降低。表明该药具有抗氧化、延缓衰老作用。

本实验表明，益肾降压颗粒能使氢化考的松诱发的“肾虚”模型小鼠萎缩的腺体组织得到不同程度的改善和恢复，重量增加，并能提高肾虚模型小鼠红细胞内的SOD和降低组织中脂质过氧化物含量。说明益肾降压颗粒可能通过抑制自由基生成或促进自由基清除剂的生成以清除自由基，从而抑制自由基引起血压升高的病理过程，达到降压的目的。

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