贵州地产蜘蛛香质量分析

[摘要] 目的:评价贵州省各地所产蜘蛛香的内在质量。方法:采用高效液相色谱法对蜘蛛香中橙皮苷进行含量测定;色谱柱为DiamonsilC18(200 mm×4.60 mm,5 μm),流动相为甲醇-醋酸-水(35∶4∶61);检测波长为283 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃。橙皮苷在0.077 18～0.848 76 μg范围内,进样量与峰面积呈良好线性关系,相关系数r=0.999 99(n=6);橙皮苷回收率为102.32%,RSD=1.95%(n=6)。结果:不同产地蜘蛛香中橙皮苷含量变化范围较大。结论:通过检测蜘蛛香中橙皮苷含量,可以为蜘蛛香内在质量控制提供参考数据,该方法简单、可行,结果准确、可靠。

[关键词] 蜘蛛香;橙皮苷;高效液相色谱法

[中图分类号] R927.2 [文献标识码]C [文章编号]1674-4721(2010)05(a)-046-02

Quality analysis for Valeriana jatamansi Jones from different habitats in Guizhou

CHEN Ling, BAO Jiake, XU Hong, XIONG Huilin, CHEN Wanli

(Guizhou Provincial Institute for Drug Control,Guiyang 550004,China)

[Abstract] Objective: To appraise the quality for Valeriana jatamansi Jones from different habitats in Guizhou. Methods: By high performance liquid chromatography on Valeriana jatamansi Jones to determine the content of hesperidin;column was DiamonsilC18 (200 mm×4.60 mm,5 μm), mobile phase was methanol-acetic acid-water (35∶4∶61); detection wavelength was 283 nm,flow rate was 1.0 ml/min,column temperature was 30℃.Hesperidin in 0.077 18~0.848 76 μg range,the sample volume and the peak area was linear with a correlation coefficient of r=0.999 99(n=6);hesperidin recovery was 102.32%,RSD=1.95%(n=6). Results:Valeriana jatamansi Jones from different areas of hesperidin content varied greatly. Conclusion:By detecting the content of hesperidin in Valeriana jatamansi Jones for internal quality control of reference data,the method is simple,feasible, accurate and reliable.

[Key words] Valeriana jatamansi Jones; Hesperidin; HPLC

蜘蛛香为败酱科植物蜘蛛香Valeriana jatamansi Jones的干燥根茎及根[1],蜘蛛香又名马蹄香、老虎七、印度缬草等,系败酱科缬草属植物。主要产于贵州、云南等地。临床主要用于消化不良、腹痛、止水泻、流感、镇静、安定等。橙皮苷(hesperidin)是蜘蛛香的主要成分之一,含量高、稳定性好,据报道[2-3],橙皮苷也具有镇静和催眠作用,是新发现的作用于中枢神经系统的黄酮类化合物,为控制蜘蛛香药材品质,对贵州不同产地蜘蛛香中橙皮苷进行了高效液相色谱法(HPLC)含量测定。

1 仪器与试剂

紫外可见分光光度仪:岛津UV-2550型分光光度仪;高效液相色谱仪:岛津LC-2010ATH液相色谱仪,LC-solution色谱工作站。色谱柱为DiamonsilC18(200 mm×4.60 mm,5 μm);橙皮苷对照品(110721-200512)购自中国药品生物制品检定所;蜘蛛香药材产自贵州省各地,经贵阳中医学院陈德媛老师鉴定为败酱科植物蜘蛛香Valeriana jatamansi Jones;甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

含量测定[3]:检测波长的选择,经对橙皮苷对照品溶液进行紫外扫描,发现在283 nm处为最大吸收峰值。因此,选择283 nm作为检测波长。

2.1 对照品溶液的制备

精密称取橙皮苷对照品适量,加甲醇制成每毫升约含40 μg的溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取本品粉末0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 ml,密塞,摇匀,称定重量,水浴加热回流30 min,放至冷却,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。取续滤液过0.45 μm的微孔滤膜,滤液作为供试品溶液。

色谱条件及含量测定:色谱柱为DiamonsilC18(200 mm×4.60 mm,5 μm),柱温30℃;流动相为甲醇-醋酸-水(35∶4∶61);检测波长为283 nm,流速1.0 ml/min。

2.3 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl,注入高效液相色谱仪,进行含量测定。

2.4 线性关系考察

精密吸取上述橙皮苷对照品溶液2、6、10、14、18、22 μl注入高效液相色谱仪,依法测定,以峰面积为纵坐标,橙皮苷浓度为横坐标,绘制标准曲线,线性回归方程:Y=2E+0.9X+350.56,R2=1。结果表明,橙皮苷在0.077 18～0.848 76 μg范围内具有良好的线性关系。见图1。

2.5 精密度考察

取同一对照品,分别重复进样5次,对照品溶液中橙皮苷RSD=0.46%(n=5)。

2.6 重复性实验

取本品6份,精密称定样品,按“样品含量测定”项下的方法操作,制成供试品溶液,测定橙皮苷的平均含量为1.89 mg/g,RSD为1.7%(样品为兴义坡岗镇产)。

2.7 稳定性实验

将配置好的供试品溶液在室温下放置,分别于0、2、6、10、14、16 h测定,结果样品溶液在16 h内基本稳定,RSD为1.64%。

2.8 加样回收率实验

精密称取已知含量的样品共6份,分别加入等量橙皮苷对照品,照供试品方法制备,测定含量,橙皮苷平均回收率为102.32%,RSD=1.95%(n=6)。见表1。

2.9 蜘蛛香中橙皮苷的含量测定

按“2.2”项方法,制备供试品溶液,测定蜘蛛香药材中橙皮苷的含量,测定结果见表2。

2.10 橙皮苷对照品(A)和蜘蛛香样品(B)HPLC图

见图2。

3 讨论

实验中采用橙皮苷对照品溶液进行紫外扫描,发现283 nm处为最大吸收峰,故采用283 nm作为本实验的检测波长。

对提取方法进行考察,比较超声、加热回流和冷浸的提取效果,发现加热回流提取的橙皮苷分离较好,橙皮苷的含量也明显大于其他2种提取方法,因此,本实验的样品采用加热回流提取。

对提取溶剂进行考察,比较甲醇、70%乙醇、50%甲醇的加热回流提取效果,发现甲醇加热回流提取的橙皮苷分离较好,且橙皮苷的峰面积也明显大于其他2种提取溶剂,故选择甲醇作提取溶剂。

对加热回流提取时间进行考察,比较了10、30、40、60 min的加热回流提取效果,橙皮苷在30～60 min的含量区别不明显,因此,本实验的样品提取时间采用30 min。对色谱柱的考察,比较依利特色谱柱和迪马色谱柱的分离效果,依利特色谱柱和迪马色谱柱的分离效果都不错,本实验选用迪马色谱柱。

对流动相的考察,比较乙腈∶水∶磷酸(15∶85∶0.02)[2]和甲醇∶醋酸∶水(35∶4∶61)分离效果及出峰时间,甲醇∶醋酸∶水(35∶4∶61)较乙腈∶水∶磷酸(15∶85∶0.02)好。

不同产地的蜘蛛香中橙皮苷含量变化范围较大,其中,以兴义市、都匀市甘塘镇产的蜘蛛香中所含橙皮苷的含量最高。故实际检测中样品含量高的供试品溶液通过稀释后再取10 μl,注入高效液相色谱仪,进行含量测定。本实验说明对各地所产蜘蛛香进行橙皮苷含量测定,是非常有必要的。

[参考文献]

[1]贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准[S].2003年版.贵阳:贵州科技出版社,2003:401.

[2]石晋丽,刘勇,肖培根,等.HPLC法测定不同产地蜘蛛香中橙皮苷的含量[J].中草药,2005,36(3):449-450.

[3]中国科学院植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京:科学出版社,1986:28.

(收稿日期:2010-03-23)