MMP-9基因蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及临床意义

【关键词】 卵巢浆液性癌

【摘要】 目的 探讨MMP-9的表达与卵巢浆液性肿瘤侵袭和转移的关系。 方法 应用流式细胞术定量检测MMP-9在45例卵巢浆液性肿瘤中的表达。结果 MMP-9在卵巢浆液性癌中的表达明显高于卵巢浆液性瘤（P<0.05），且与卵巢浆液性癌病理分级和临床分期密切相关（P<0.05）。结论 卵巢浆液性癌中 MMP-9的高表达促进了其侵袭和转移，MMP-9在卵巢浆液性癌中的表达与病理分级及临床分期有显著相关性。提示MMP-9可作为诊断和判断预后的指标和化疗防治的靶点。

【关键词】 卵巢浆液性癌；基质金属蛋白酶-9；基因表达；流式细胞术

The expression of MMP-9 gene protein in ovarian serous tumors and its clinical significance

【Abstract】 Objective To probe into the relationship between MMP-9 expression and invasion、mestastasis of ovarian serous tumors.Methods The expressions of MMP-9 Gene Protein in 45 cases with ovarian serous tumors were detected quantitatively by Flow Cytometry (FCM). Results Expression of MMP-9 protein found in ovarian serous carcinomas is significantly more than that in ovarian serous cystadenomas（P<0.05）.It can be stated that expression of MMP-9 was correlated with histological grade and clinical stage (P<0.05).Conclusion The high level of MMP-9 may be linked with ovarian serous tumor invasion and mestastasis。 The expressions of MMP-9 may be a indication of invasion and metastasis and a strong predictor of poor survival.

【Key words】 ovarian serous tumors; gene expression; MMP-9; Flow Cytometry

卵巢癌是威胁妇女生命和健康的严重疾病之一，其死亡率居女性生殖系统肿瘤之首，是妇科肿瘤中预后最差的肿瘤之一，5年生存率仅为20%～30％。卵巢浆液性癌是卵巢癌中最常见的类型，而其发现大多数已达中晚期，故寻找新的诊断方案仍然是目前亟待解决的问题。

肿瘤的侵袭和转移是影响卵巢浆液性癌患者预后的重要因素之一。最近研究表明基质金属蛋白酶-9（MMP-9）通过降解细胞外基质和基底膜而促进了肿瘤的侵袭和转移。本研究通过流式细胞术（FCM）探讨MMP-9在卵巢浆液性肿瘤发生、发展、侵袭和转移过程中的作用，综合评价其在卵巢浆液性肿瘤恶性程度和临床预后判断中的价值。

1 材料与方法

1.1 材料

采用廊坊市医院1999～2003年间手术切除卵巢浆液性囊腺肿瘤组织45例，经两位有经验的病理医师诊断，常规病理学检查证实。其中22例为卵巢浆液性囊腺瘤，23例为卵巢浆液性癌。患者年龄23～70 岁，平均 47.5 岁。23例卵巢浆液性癌按FIGO标准进行手术－病理分期，早期11例（Ⅰ期5 例，Ⅱ期6 例），晚期12例（Ⅲ期7 例，Ⅳ期5 例）。组织学分级根据肿瘤细胞分化程度分为分化好11例，分化差12 例。取因其他良性非卵巢病变而手术切除的正常卵巢组织5例作为对照。

1.2 实验方法

常规单细胞悬液制备法，MMP-9采用间接免疫荧光标记法（具体步骤根据文献及试剂盒说明书进行）。除设有正常卵巢组织对照外，还设有：PBS代替一抗的阴性对照；加入一抗的阳性对照；加入二抗的阳性对照；FITC标记的小鼠IgG同型对照。

1.3 试剂

一抗为鼠抗人MMP-9单克隆抗体，二抗为羊抗鼠FITC-IgG，均购自北京金桥生物技术有限公司。

1.4 结果判定

以荧光指数（fluorescence index, FI）表示基因蛋白表达的相对含量，FI值计算公式为：FI＝样品蛋白表达的平均荧光强度（mode值）/正常对照样品平均荧光强度（mode值）。

1.5 统计学方法

应用SAS 6.4统计软件进行系统分析，方法采用正态性检验（t检验）、方差分析、非参数检验、等级相关分析，P≤0.05时，统计学上有显著性意义。

2 结果

2.1 MMP-9在卵巢浆液性肿瘤中的表达

卵巢浆液性癌MMP-9蛋白表达量平均FI值（3.21±1.16）明显高于正常卵巢组织和卵巢浆液性囊腺瘤（2.02±0.69），差异有显著性（P<0.05）。卵巢肿瘤组织中MMP-9随卵巢浆液性肿瘤恶性程度的进展而表达增强（见表1）。表1 MMP-9 基因蛋白在正常卵巢组织、卵巢浆液性瘤、 卵巢浆液性癌中的表达（略） 注：卵巢浆液性瘤与正常卵巢组织比较，P<0.05； 卵巢浆液性癌与正常卵巢组织比较，*P<0.05；卵巢浆液性癌与卵巢浆液性瘤比较，P<0.05

2.2 MMP-9的表达与卵巢浆液性肿瘤病理分级的关系

低分化的卵巢浆液性癌MMP-9蛋白表达量平均FI值为3.70±1.04，明显高于高分化的卵巢浆液性癌（2.81±0.93），差异有显著性（P<0.05）。提示MMP-9与卵巢浆液性癌的病理分级有关（见表2）。表2 卵巢浆液性癌中MMP-9 基因蛋白表达与病理（略） 注：P<0.05

2.3 MMP-9的表达与卵巢浆液性肿瘤临床分期的关系

晚期卵巢浆液性癌（Ⅲ、Ⅳ 期）MMP-9蛋白表达量平均FI值为3.94±0.81，明显高于早期卵巢浆液性癌（Ⅰ、Ⅱ期，FI=2.51±0.99），差异有显著性（P<0.05）。提示MMP-9与卵巢浆液性癌的临床分期有关（见表3）。表3 卵巢浆液性癌中MMP-9 基因蛋白表达与临床分期的关系（略） 注：**P<0.01

3 讨论

人类MMP-9基因位于染色体20q12-q13,与肿瘤侵袭和转移关系密切，其功能可为TIMP抑制剂所抑制。它编码的MMP-9蛋白是Ⅳ型胶原酶(又称明胶酶)的一种，是MMPs蛋白家族的重要一员。MMP在癌症中的作用分为三个过程：（1）发病?MMP分解健康组织的基质结构使肿瘤增生。（2）转移?MMP使组织结构松弛，以便癌细胞转移。组织的自我分解也促使MMP释放，从而引起进一步的肿瘤增生。（3）血管生成?在胞外基质降解的同时，MMP有助于为新的血管生长提供空间。以上三种作用导致了癌细胞增殖及扩散，促进了肿瘤的浸润和转移。

近年来，细胞外基质在肿瘤的浸润、转移和复发中作用的研究引人注目。Ⅳ型胶原是构成基底膜的主要成分，也是癌浸润的天然屏障。而MMP-9是Ⅳ型胶原酶中的一种重要类型，肿瘤通过分泌MMP-9完成降解基底膜和包绕肿瘤的基质，突破基质屏障的过程，从而促进了肿瘤的浸润和转移［1,2］。 Cai W［3］等用免疫组化法检测了128例卵巢肿瘤发现MMP-9与肿瘤的恶性度呈正相关。MMP-9在Ⅲ、Ⅳ期卵巢腺癌中比Ⅰ、Ⅱ期卵巢腺癌的表达明显增强，且有统计学差异，在低分化肿瘤中的表达比在高、中分化表达明显增强，统计学差异明显，在转移性肿瘤中的表达比在未转移性肿瘤中要高（P<0.05）。因此认为MMP-9的检测在卵巢肿瘤的进展中起着非常重要的作用，并可成为卵巢肿瘤进展的一个有效标志。Piura B［4］等也指出MMP-9的过度表达与肿瘤的浸润、转移和预后差有关。

本研究结果显示MMP-9蛋白在卵巢浆液性囊腺癌中的表达量（FI值）增加，并随卵巢癌恶性程度的增加而增加。卵巢浆液性癌MMP-9蛋白表达量明显高于正常卵巢组织和卵巢浆液性囊腺瘤。 Furuya M［5］等通过对8例卵巢浆液性癌，2例交界性卵巢浆液性肿瘤及14例卵巢浆液性癌的研究发现，MMP-9在卵巢浆液性癌中的表达明显高于卵巢浆液性囊腺瘤（P<0.05）。

Maatta M等［6］的研究也发现MMP-9在卵巢肿瘤中的表达与肿瘤的良、恶性有明显的相关性。本研究结果显示，低分化的卵巢浆液性癌MMP-9蛋白表达量明显高于高分化卵巢浆液性癌，说明MMP-9蛋白表达量与病理分级有关（P<0.05）。晚期卵巢浆液性癌（Ⅲ、Ⅳ 期）MMP-9蛋白表达量明显高于早期卵巢浆液性癌（Ⅰ、Ⅱ期，FI=2.51±0.99）,说明MMP-9蛋白表达量与临床分期密切相关（P<0.01）。这与Cai W等［3］、Piura B等［4］的研究结果基本相符。

以上研究结果表明，MMP-9与肿瘤的浸润和转移关系密切，在卵巢肿瘤的发展过程中起着重要作用。MMP-9蛋白表达量与卵巢浆液性肿瘤恶性程度呈正相关。 MMP-9的抑制剂有可能成为治疗卵巢浆液性癌的一个新方法。对这一基因进行检测，进一步探讨卵巢浆液性肿瘤发生、发展的分子机制，为判断卵巢浆液性癌的预后及其化疗防治打下了基础。

【参考文献】

1 Kleiner DE, Stetler-Stevenson WG. Matrix metalloproternaded and metastasis. Cancer Chemotheer Pharmacol, 1999, 43（suppl）: 42-51.

2 Zeng IS, Guillem JG.Colocalisation of matrix metalloproteinase-9-mRNA and protein in human colorectal cancer stromal cells. British Journal of Cancer, 1996, 74: 1161-1167.

3 Cai W, Song JD. Expression of matrix metalloproteinase and tissue inhibitors in ovarian tumors. Ai Zheng, 2002, 21(1):91-94.

4 Piura B, Rabinovich A, Huleilel M. Matrix metalloproteinase and their tissure inhibitors in malignancies of the female genital tract. Harefuah, 2003, 142(11): 786-791.

5 Furuya M, Ishikua H, Ogawa Y, et al. Analyses of matrix matalloproteinases and their inhibitors in cyst fluid of serous ovarian tumors. Pathobiology, 2000, 68(6): 239-244.

6 Maatta M, Santala M, Soini Y, et al. Turpeenniemi-Hujanen T.Matrix metalloproteinase 2 and 9 and their tissure inhibitors in low malignant potential ovarian tumors. Tumour Biol, 2004, 25 (4): 188-192.