六味地黄软胶囊及其各提取部位治疗更年期综合征的实验研究

摘要：目的：观察六味地黄软胶囊及其各提取部位对更年期综合征动物的影响。方法：选用雌性SD大鼠，采用摘除卵巢方法复制更年期综合征模型，以六味地黄软胶囊及其各提取部位灌胃给药治疗15日，观察药物对模型动物的动情周期，血清中IL－2、LH、E2和FSH水平以及子宫、肾上腺、胸腺等脏器指数的影响。结果：六味地黄软胶囊及其乙酸乙酯提取部位可改善去卵巢大鼠的动情周期的变化，升高去卵巢大鼠血清IL－2和E2水平，降低LH水平，升高子宫、肾上腺及胸腺指数；正丁醇提取部位也可以改善去卵巢大鼠动情周期变化，降低血清IL-2水平。结论：六味地黄软胶囊对更年期综合征有治疗作用，其有效成分主要集中在乙酸乙酯和正丁醇提取部位。

关键词：六味地黄软胶囊；更年期综合征；去卵巢大鼠

中图分类号；11285.5　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2007)09－1848－03

更年期综合征(climaetenie syndrome)，又称围绝经期综合征(penimenopause syndrome)，是由于卵巢功能退行性改变、脑垂体功能亢进、雌激素水平低下所导致的植物神经系统功能紊乱为主，伴有心理症状的一组症候群。90％的更年期妇女出现不同程度的临床表现。六味地黄方源自钱乙《小儿药证直诀》，临床研究表明六味地黄方具有良好的治疗更年期综合征作用。但是，对于六味地黄方及其有效成分对更年期综合征治疗的实验研究，本文利用六味地黄软胶囊，采用化学方法取得六味地黄软胶囊各提取部位，并就它们对更年期综合征模型大鼠的作用作一初步研究。

1 实验材料

1．1　实验动物　SD生育龄未孕雌性大鼠100只，体重250－280g,实验前置动物于室内适应环境1周，室温18－22℃。

1．2　受试药品与试剂　六味地黄软胶囊，由江苏康缘药业股份有限公司提供。取熟地黄、山茱萸等6味，用六味地黄软胶囊的制备工艺制成浸膏(每克浸膏含生药量为6.7g)，取浸膏约600g，水稀释到适宜浓度，用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇依次分步萃取3次，滤过，滤液低温挥干有机溶剂，60℃下减压干燥，分别得到各提取部位；剩余的残渣用水溶解，滤过，滤液水浴挥干，减压干燥得水提取部位。尼尔雌醇片(2mg/片)，上海华联制药有限公司；雌二醇(E2)放免试剂盒，促黄体生成激素(LH)放免试剂盒、促卵泡生成激素(FSH)放免试剂盒，天津德普生物技术和医学产品有限公司；白细胞介素－2(IL－2)放免药盒，总医院科技开发中心放免所。

1．3　主要仪器　1470型Wizard全自动伽玛计数器，芬兰Pharmacia公司；DK－型电热恒温水槽，上海精宏实验设备有限公司；AR2140型电子分析天平，奥赛斯国际贸易(上海)有限公司；LDZ5－2型低速自动平衡离心机，北京医用离心机厂。

2 实验方法

2．1　动物模型制备　雌性SD大鼠，3％戊巴比妥麻醉(40mg/kg)，腹位固定。在最末肋骨下、腋中线和距脊柱外侧约2cm交叉处，剪除长毛，切开皮肤和背肌约1.5－2cm，切口视野中可见一乳白色脂肪团，卵巢即包埋其中，结扎卵巢下输卵管，摘除双侧卵巢，术后将子宫角送回腹腔，缝合。正常对照组大鼠进行手术暴露卵巢但不切除。术后5日作阴道涂片，观察造模后动物动情周期，每天1次，连续5日．挑选不显周期性改变(即卵巢切除干净)的大鼠为造模成功的大鼠。

2．2　分组及给药　将造模成功的大鼠随机分为8组，每组10只。即假手术组、模型组、尼尔雌醇组(0.67mg/kg)、六味地黄软胶囊组、正己烷提取物组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、水提物组(均为3g生药/kg)。手术后第9日，各组动物分别灌胃给予相应受试药物，尼尔雌醇组仅在第9日灌胃给药1次，假手术组和模型组灌胃给予等容积蒸馏水，给药容积为10mL/kg，每日1次，连续15日。

2．3　观察指标和测定方法　阴道涂片细胞学观察：于灌胃给药后第10日作阴道涂片观察大鼠的动情周期，用消毒棉签插入大鼠阴道约1－2cm，沿阴道壁旋转1圈取出，均匀涂于载波片上，稍风干后用10％甲醛溶液固定，HE染色后进行光镜检查，每日1次，连续4日。血清中IL－2、LH、E2、FSH水平测定：颈动脉取血，常规分离血清，放免法测定血清中IL－2、E2、LH、FSH含量。脏器指数测定：取血后断头处死大鼠，解剖取出胸腺、肾上腺和子宫，精确称重，按下式计算上述脏器指数：脏器指数=脏器重量(mg)/体重(g)。

2．4　统计方法　量反应资料用均数±标准差表示，统计方法为方差分析；质反应资料用X2(卡方)检验。实验资料采用SPSS10.0统计软件包处理。

3 实验结果

3．1　对大鼠阴道涂片结果的影响　模型组大鼠出现大量角化上皮细胞的动物数明显低于假手术组，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.01)。各给药组出现大量角化上皮细胞的动物数目均比模型组有所增加，其中尼尔雌醇组、六味地黄软胶囊组、乙酸乙酯提取组、正丁醇提取组与模型组比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。提示尼尔雌醇、六味地黄软胶囊及其乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物对更年期大鼠模型的动情周期紊乱具有一定的治疗作用。

3．2　对大鼠血清中IL－2 LH E2FSH水平的影响　模型组大鼠和假手术组相比，IL－2和E2水平明显降低，LH和FSH水平明显升高(P＜0.01)。各给药组大鼠血清IL－2和E，水平有不同程度的回升，LH水平均有一定程度的下降，其中尼尔雌醇组、六味地黄软胶囊组和乙酸乙酯提取部位组和模型组比较，有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。此外，正丁醇提取部位也可以显著升高模型大鼠的IL－2水平(P＜0.05)。各给药组对血清FSH水平无明显影响。

3．3　对大鼠子宫肾上腺胸腺脏器指数的影响 模型组大鼠子宫、肾上腺、胸腺脏器指数均低于假手术组，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。各给药组脏器系数均有不同程度的回升，其中六味地黄软胶囊组、乙酸乙酯提取组与模型组比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。

4　讨　论

阴道上皮细胞受卵巢内分泌功能直接影响，对雌激素的反应较其他激素更为敏感，通过阴道涂片的检查，可以反映卵巢功能。在大鼠阴道细胞变化的观察中，以表皮细胞变化最为显著，因此笔者选用表层上皮细胞(角化细胞)作为衡量雌激素水平的观察指标。阴道上皮的成熟程度和体内雌激素的水平成正比。受卵巢激素的影响，成年雌性大鼠的阴道细胞出现动情前期、动情期、动情间期和动情后期的典型变化。笔者在实验中观察到成年SD大鼠阴道涂片细胞有明显的周期性变化，大鼠在去卵巢后第10日开始阴道涂片，观察到其动情周期消失，持续的动情间期表现。用六味地黄软胶囊及其各提取部位处理后，大鼠出现大量角化上皮细胞的动物数均比模型组有所增加，表明六味地黄软胶囊及其提取部位可以规律更年期大鼠的动情周期变化。妇女进入更年期后，卵巢功能衰减，对促性腺激素的应激能力减弱，分泌的雌激素水平大幅度下降，对下丘脑垂体不能进行有效的负反馈，使下丘脑、垂体代偿性地分泌过亢，促性腙激素分泌增多。有研究表明滋补肾阴的药物可以提高更年期患者激素内环境的稳定能力，使下丘脑一垂体一卵巢功能有所改善。在本次实验中，模型组大鼠E，水平显著降低，同时LH和FSH水平升高，和更年期妇女内分泌变化情况一致。经过六味地黄软胶囊及其乙酸乙酯提取物组治疗后，E2水平升高、LH水平降低，表明六味地黄方可以从多环节改善模型大鼠的内分泌紊乱。白细胞介素－2(IL－2)是对免疫调节起重要作用的细胞因子。有资料报道，无论更年期综合征症状发生与否，更年期妇女免疫功能均减退。在本次实验中，模型组大鼠血清IL－2水平显著降低，同时伴有子宫、肾上腺、胸腺等脏器指数的降低。而六味地黄软胶囊组及其乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组大鼠的血清IL－2水平及子宫、肾上腺、胸腺等脏器指数均显著高于模型组，提示六味地黄方对更年期综合征大鼠的免疫功能有一定的增强作用。

近年来，绝经后妇女愈加转向使用中药等替代补充疗法来努力调理更年期综合征。而植物雌激素(phytoestrogen)和具有雌激素样作用的植物提取物及化合物引起了人们的广泛关注。已有研究证实，六味地黄丸显示一定的雌激素样作用。但对于六味地黄方治疗更年期综合征的物质基础研究，尚未见报道。本次研究利用化学方法，得到六味地黄软胶囊的各提取部位，发现六味地黄软胶囊对更年期综合征具有一定的治疗作用，且其有效成分主要集中在乙酸乙酯和正丁醇提取部位。但是对于六味地黄软胶囊调节内分泌，增强免疫的作用机理，以及发挥治疗作用的有效成分还有待于进一步研究。