芪苈强心胶囊中12种成分的UPLC―MS测定

[收稿日期] 2014-01-15

[基金项目] 国家重点基础研究发展计划（973计划）项目（2012CB518606）；国家自然科学基金青年基金项目（81102768）

[通信作者] *赵韶华，正高级工程师，硕士生导师，主要从事新药开发研究， E-mail：

[作者简介] 刘颖，硕士研究生，E-mail：

[摘要] 该文建立了芪苈强心胶囊中12种有效成分的超高效液相色谱结合质谱（UPLC-MS）的定量方法。采用Phenomenex UPLC Kinetex C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，2.6 μm），以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱，流速0.4 mL・min-1，柱温40 ℃，进样量5 μL，质谱在负离子模式下采用TOF-MS及TOF-MS/MS方法检测。结果表明，12种有效成分毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、异槲皮苷、柚皮芸香苷、橙皮苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、杠柳毒苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、人参皂苷Rd、杠柳苷H1在检测的范围内线性良好，R2均大于0.999 0，方法回收率为98.0%～102%，RSD均小于3.9%。该方法简便快速、准确度高，可用于芪苈强心胶囊的质量控制。

[关键词] UPLC-MS；芪苈强心胶囊；含量测定

芪苈强心胶囊是由黄芪、人参、香加皮、桂枝等11 味中药组成的复方中药，具有益气温阳、活血通络、利水消肿等功效，临床用于冠心病、高血压所致轻、中度充血性心力衰竭等疾病[1-2]。现代研究表明芪苈强心胶囊中活性成分多种多样，主要包括黄酮类、皂苷类、生物碱类等，目前对芪苈强心胶囊的研究主要集中在临床应用方面及其化学成分的定性研究方面[3-5]，而对其活性成分的定量分析研究却鲜见报道。近年来，液质联用技术以其优越的灵敏度和分辨率成为现代药物定量分析的有效手段[6-7]，因此本研究采用UPLC-MS测定了芪苈强心胶囊中毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、异槲皮苷、柚皮芸香苷、橙皮苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、杠柳毒苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、人参皂苷Rd、杠柳苷H1的含量，以期为芪苈强心胶囊的质量控制提供参考。

1 材料

超高效液相色谱系统（Angilent1290，美国）；质谱仪（Triple-TOFTM5600+，美国AB SCIEX公司），配有ESI源和APCI源；数据处理软件系统：MultiquantTM Software（美国AB SCIEX公司）；Phenomenex Kinetex C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，2.6 μm）；超声波清洗器（KQ5200B，昆山市超声仪器有限公司）；分析天平（AG-135，瑞士METTLER公司）。

对照品黄芪甲苷、毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、橙皮苷、异槲皮苷、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、杠柳毒苷均购自中国食品药品检定研究院，批号分别为110781-201314，111920-201304，110721-201115，111809-201102，110704-20122，110754-201324，111818-201302，111719-201104，110703-200424，111793-200901；柚皮芸香苷购自成都曼斯特生物科技有限公司，批号为MUST-11101011；杠柳苷H1由石家庄以岭药业股份有限公司提供，纯度大于95%[8]。

芪苈强心胶囊由石家庄以岭药业股份有限公司提供，批号130913，120805，120806，120807，120808，120901，120902，121101，121102，121103，121104。乙腈、甲醇、甲酸（色谱纯，美国Fisher公司），水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 液相条件 Phenomenex UPLC Kinetex C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，2.6 μm）；流动相乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B），梯度洗脱，0～4 min，5%～30%A，4～9 min，30%～33%A，9～11 min，33%～95%A，11～11.5 min，95%～5%A，11.5～14 min，5%A。柱温40 ℃；流速0.4 mL・min-1；进样体积5 μL。

2.2 质谱条件 电喷雾离子源（ESI），负离子模式检测，源喷雾电压（IS）-4 000 V，辅助加热气温度550 ℃，雾化气379.31 kPa，辅助气379.31 kPa，气帘气172.41 kPa；解簇电压-60 V；采集方法TOF-MS/MS，准确质量数用自动校正系统（CDS）进行校正，12种被测定成分质谱参数见表1。

2.3 供试品溶液的制备 称取芪苈强心胶囊内容物，研细，精密称定0.15 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理30 min（功率250 W，频率40 kHz），放冷，称重，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过0.2 μm滤膜即得。

2.4 对照品溶液的制备 精密称取适量对照品毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、异槲皮苷、柚皮芸香苷、橙皮苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、杠柳毒苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、人参皂苷Rd、杠柳苷H1，加甲醇溶解，得到质量浓度分别约为1.0 g・L-1的对照品储备液。

3 结果

3.1 标准曲线及线性关系考察 分别精密吸取12种对照品储备液适量置于同一10 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，得到混合对照品溶液，毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、异槲皮苷、柚皮芸香苷、橙皮苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、杠柳毒苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、人参皂苷Rd、杠柳苷H1的质量浓度分别为17.64，17.46，20.952，17.568，53.064，39.024，8.376，18.18，143.352，22.176，40.12，77.748 mg・L-1。将此混合对照品溶液逐级稀释成一系列浓度，按照2.1项下条件进行测定。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归分析。结果表明，12种分析物在各自线性范围内均呈现良好的线性关系，得回归方程，结果见表2。