凋亡抑制基因Survivin在胃癌中的表达及临床意义

摘 要 目的：研究凋亡抑制基因Survivin在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法，检测Survivin在30例胃癌组织，10例癌旁正常组织中的表达。结果：①胃癌组Survivin蛋白表达率为70.0%（21/30），显著高于正常胃组0%（0/10），P＜0.05。②淋巴结转移组Survivin蛋白阳性表达率（80.0%，16/20）显著高于无淋巴转移组（50.0%，5/10），P＜0.05；⑤根据临床病理分期，Ⅰ+Ⅱ期组（64.3%，9/14）与Ⅲ+Ⅳ组（62.5%，10/16）期之间Survivin蛋白阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）；随临床分期增加、淋巴结的转移，Survivin蛋白阳性表达率逐渐升高（P＜0.05）。结论：Survivin的异常表达与胃癌的发生、发展密切相关，可能是影响胃癌预后的重要分子指标。

关键词 胃癌 Survivin 免疫组织化学

胃癌是我国的常见病、多发病，严重威胁着人民的身体健康，其发生是一个多阶段、多基因改变的过程，与细胞凋亡过程被抑制有关。细胞凋亡受抑作为细胞增殖的对立面，在肿瘤的发生、消退和转归方面起着重要作用［1］。Survivin是凋亡抑制蛋白家族（IAP）的一个新成员，是相对分子量最小的IAP，具有抑制细胞凋亡的功能和广谱的恶性肿瘤表达特性，是迄今发现最强的凋亡抑制因子［2］。近年的研究表明，Survivin与肿瘤的发生，发展密切相关，survivin在胃癌以及许多恶性肿瘤中广泛特异表达，和肿瘤的早期发生、淋巴结转移及预后有很高的相关性，并可能参与肿瘤细胞耐药性的产生。同时，survivin基因也为胃癌的早期诊断、靶向基因治疗应用提供了新的前景。本研究旨在探讨胃癌组织Survivin蛋白的表达及其与淋巴结转移的关系，为临床治疗及提高患者的生存率提供理论依据。

资料与方法

一般资料：采用吉林省人民医院病理科2007～2009年胃癌根治术后存档蜡块30例，均经病理学诊断为腺癌，术前均未接受放射治疗和化学治疗。其中男18例，女l2例；年龄35～75岁，平均51.5岁。按1997年UICC制订的胃癌TNM分期标准分期：I期4例，Ⅱ期10例，Ⅲ期12例，Ⅳ期4例。有淋巴结转移者20例，无转移者10例。病理分化程度：高中分化19例，低分化11例。另取1O例癌旁非肿瘤胃组织标本作对照。

Survivin的检测：采用免疫组织化学链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法染色，用兔抗人Survivin多克隆抗体检测Survivin的表达，严格按照说明书操作。已知阳性胃癌切片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

结果判定标准：以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性细胞，400倍镜下计数500个细胞，≥10%为阳性，＜10%为阴性。

统计学处理：采用SPSSl0.0统计软件包进行统计分析。计数资料的比较采用Fisher检验。相关分析采用Spearman等级分析。

结 果

Survivin蛋白阳性表达：Survivin在正常胃组织中不表达，肿瘤组织中Survivin蛋白阳性染色颗粒主要定位于肿瘤细胞胞质内，细胞膜亦可有少量着色，周围间质亦见少量阳性染色。胃癌组Survivin蛋白阳性表达率70.0%（21/30）显著高于正常胃组0%（0/10），差异有统计学意义（P＜0.05）。

Survivin蛋白阳性表达与胃癌临床病理特征的关系：淋巴结转移组Survivin蛋白阳性表达率（80%，16/20）显著高于无淋巴转移组（50.0%，5/10），P＜0.05，根据临床病理分期，I+Ⅱ期组（64.3%，9/14）与Ⅲ+Ⅳ组（62.5%，10/16）期之间Survivin蛋白阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05），随临床分期增加及淋巴结的转移，Survivin蛋白阳性表达率逐渐升高（P＜0.05）。另外，Survivin蛋白阳性表达与患者年龄、性别及分化程度无关（P＞0.05）。见表1。

讨 论

随着人们对细胞凋亡认识的逐步加深，新的观点认为肿瘤的发生发展也是细胞凋亡的结果，细胞凋亡的抑制与恶性肿瘤的发生发展有密切关系［3］。Survivin基因是一个新近发现的凋亡抑制基因，具有强大的凋亡抑制功能，其异常表达与多种人类肿瘤的发生发展及预后密切相关，成为人们研究的一个热点。Ambrosini等利用效应细胞蛋白酶受体1（EPRl）cDNA在人类基因组文库中杂交筛选并克隆产生了1个IAP基因家族新成员，即Survivin基因［2］。组织分布上Survivin只表达于胚胎和发育的胎儿组织，成人组织除胸腺、生殖腺外未见表达［10］。相反在大多数肿瘤组织中均可检测到Survivin的表达。Survivin的主要生物学功能就是抗凋亡，它是目前已知作用最强的凋亡抑制蛋白。细胞凋亡主要有两条途径：死亡受体途径和线粒体途径，两条途径最终都通过激活下游效应因子caspase-3及caspase-7使细胞凋亡。Survivin可以直接粘附于活化的caspase-3及caspase-7，使其不能发挥作用，从而阻断细胞凋亡过程［7］。

本研究显示，Survivin在正常胃组织中不表达，Survivin在胃癌组织中的阳性表达率显著高于正常胃组织，提示Survivin基因的表达发生在胃癌恶性转化的早期，表明Survivin基因与胃癌的发生有关。Survivin基因在胃癌组织中的表达可能抑制了异常突变细胞的凋亡。从而扰乱了细胞生长和凋亡途径，促使细胞逃离生长监控，导致肿瘤的发生。对Survivin蛋白的检测可作为早期胃癌的辅助诊断。Satoh［8］等研究了胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织标本，发现Survivin仅在胰腺癌组织中有高表达，并与凋亡指数呈负相关。Suga等［5］对大肠组织从增生到癌变不同时期标本的Survivin表达情况进行了研究，所得到的结论基本相似。从而认为Survivin基因的表达是癌变早期事件。

本研究证实，Ⅰ+Ⅱ期组与Ⅲ+Ⅳ组期之间Survivin蛋白阳性表达率差异有统计学意义；淋巴结转移组Survivin蛋白阳性表达率显著高于无淋巴转移组；随临床分期增加及淋巴结的转移，Survivin蛋白阳性表达率逐渐升高。提示Survivin基因不但参与原位肿瘤形成过程的调节，促进其发展，可能还参与癌细胞转移过程的调节，在转移过

程中发挥作用。由于Survivin对凋亡的抑制，癌细胞得以继续分裂，造成肿瘤的临近和远隔部位转移灶的形成。也有研究表明，Survivin mRNA的表达与胃癌侵犯的深度和腹膜转移有关，认为Survivin在胃癌的局部侵犯过程中有一定的作用。Sarela［9］等认为，在恶性肿瘤中，脱落的癌细胞因为Survivin对凋亡的抑制而受到了保护，得以继续存活并分裂增殖，进而形成肿瘤邻近或远离部位的转移。从而引起预后不良。

Survivin的异常表达与胃癌的发生、发展密切相关，其在胃癌中的高表达与淋巴结转移及临床病理分期密切相关，可能是影响胃癌预后的重要分子指标。

参考文献

1 Ksnia J,Konturek S J,Malicz K,et a1.Expression of surviving and caspase-3 in gastric cancer［J］.Dig Dis sci,2003,48（9）:266-271.

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3 Granville DJ,Carthy CM,Hunt DWC,et a1.Apoptosis:molecular aspects of cell death and disease［J］.Lab Investl998,78（8）:893-898.4 Salz W,Eisenberg D,Pleseia J,et a1.A survivin gene signature predicts aggressive tumor behavior［J］.Cancer Res,2005,65（9）:3531-3534.

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7 Tamm I,Macadam Y,Sausville E,et a1.LAP――family protein surviving inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas（CD95）.Bax,caspases,and anticancer drugs［J］.Cancer Res,1998,58（23）:5315-5320.

8 Satoh K,Kaneko kHirota M,et a1.Expression of survivin is correlated with cancer cell apoptosis is involved in the development of human pancreatic duct cell tumors［J］.Cancer 2001,92（2）:251-258.

9 Sarela AI,Macadam RC,Farmery SM,et a1.Expression of the antiapoptosis gene,survivin,predicts death from recurrent colorectal carcinoma［J］.Gut,2000,6（5）:645-650.

10 刘燕文,姚壮凯,鲁凯,等.Survivin基因在胃癌中的表达及临床意义［J］.中国肿瘤外科杂志,2009,1（6）:360-361.

表1 Survivin与胃癌的临床病理特征的关系