不同类型消化道肿瘤患者化疗前后T淋巴细胞亚群变化及其意义

[摘要] 目的 探讨不同类型消化道肿瘤患者在化疗前后T细胞亚群总T细胞（CD3+）、T辅助淋巴细胞（CD4+）、T抑制淋巴细胞（CD8+）、CD4+/CD8+比值的变化情况及临床意义。 方法 应用流式细胞术分析不同类型消化道肿瘤患者在化疗前后及对照组CD3+、CD4+、CD8+细胞百分率和CD4+/CD8+比值。 结果 消化道肿瘤患者化疗前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例均低于对照组，CD8+高于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）；结肠癌和胃癌患者化疗后CD3+、CD4+百分比较化疗前均增高，CD8+百分比降低，差异均有统计学意义（P < 0.05）。直肠癌患者化疗后CD3+百分比较化疗前增高，CD8+百分比降低，差异有统计学意义（P < 0.05），CD4+、CD4+/CD8+比值差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 通过检测消化道肿瘤患者T淋巴细胞亚群化疗前后的变化，对了解机体的免疫动态有着重要的临床意义。

[关键词] 消化道肿瘤；化疗前后；T淋巴细胞亚群

[中图分类号] R734 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）08（a）-0040-03

Changes of lymphocyte subsets and its significance in patients with digestive tract tumor before and after chemotherapy

PENG Jieya1 HE Yajun1 ZENG Xiaodan2

1.Department of Clinical Laboratory， Guangzhou Red Cross Hospital， Guangdong Province， Guangzhou 510220， China； 2.Laboratory Medical Science， Guangzhou Medical University， Guangdong Province， Guangzhou 510182， China

[Abstract] Objective To investigate the T cell subsets （CD3+） T cells， T lymphocytes （CD4+）， T lymphocytes （CD8+） and CD4+/CD8+ ratio digestive tract tumor before and after chemotherapy changes and clinical significance of patients with digestive tract tumor before and after chemotherapy. Methods Flow cytometry was used to analyze the CD3+， CD4+， CD8+ cell percentage and the ratio of CD4+/CD8+ in different types of gastrointestinal cancer patients before and after chemotherapy and the healthy （control group）. Results Compared with the control group， the former chemotherapy CD3+， CD4+， CD4+/CD8+ ratio of gastrointestinal cancer patients were lower than that of control group （P < 0.05）， and CD8+ was higher than the control group （P < 0.05）， the differences were statistically significant. Colon cancer and stomach cancer patients after chemotherapy CD3+， CD4+ percentages were higher than before chemotherapy （P < 0.05）， the percentage of CD8+ was lower （P < 0.05）， the differences were statistically significant. Patients with rectal cancer after chemotherapy CD3+ percentage was higher before chemotherapy （P < 0.05）， the percentage of CD8+ was lower （P < 0. 05）， the differences were statistically significant； while CD4+ and CD4+/CD8+ ratio had no statistical significance （P > 0.05）. Conclusion For the digestive tract tumor， detecting the changes of T lymphocyte subsets to understand the immune dynamic， in determining the clinical curative effect， and assess the prognosis monitoring， etc.， all have very important clinical significance.

[Key words] Digestive tract tumor； Before and after chemotherapy； T-lymphocyte subsets

T淋巴细胞是一种胸腺依赖性淋巴细胞，是构成机体免疫防御系统的重要成分，随着对肿瘤免疫机制的了解和肿瘤免疫治疗的应用，越来越多的细胞免疫检测指标被用来监测肿瘤的发生、发展和判断治疗效果及预后，目前应用较广泛的是T细胞亚群的测定，对于判断癌症患者的免疫状态具有重要的意义。T淋巴细胞包括两个主要亚群（CD4和CD8）。在正常情况下，机体内两个T细胞亚群之间，保持一定的数量比例，维持平衡状态。当机体发生肿瘤时，该平衡状态被破坏，严重影响两个T细胞亚群之间的数量比例，导致机体免疫功能紊乱[1]。本研究通过总结各类消化道肿瘤患者化疗前后T淋巴细胞亚群变化，探讨各类消化道肿瘤患者化疗前后免疫功能的变化。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2010年1月～2013年6月广州市红十字会医院（以下简称“我院”）收治的各类消化道肿瘤患者在化疗前1 d及化疗后15 d均检测T淋巴细胞含量的166例成人患者资料，其中，男108例，女58例，年龄46～82岁。相关肿瘤类型均得到病理学形态证实。胃癌21例，结肠癌100例，直肠癌45例。按《临床病诊断及疗效标准》[2]中的消化道疾病诊断，经每周期方案化疗结束后15 d可经相关检验验证取得疗效。另以30名正常人（来自我院体检中心健康体检者）作为对照组，其中，男16名，女14名，年龄19～74岁。

1.2 方法

各类消化道肿瘤患者在化疗前1 d及化疗后15 d均检测T淋巴细胞含量。清晨空腹抽取静脉血2 mL，EDTA-2K抗凝，取患者新鲜抗凝血标本100 μL，放入样品测定管，加入相应的荧光标记单克隆抗体，振荡混匀，室温下避光孵育20～30 min，加入溶血素，溶血完毕后上机检测。采用流式细胞仪BD Facs calibur，上机获取10 000个淋巴细胞，对CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞的百分比进行检测分析。本次实验所有检测实行全过程质量控制。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验、配对t检验；以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

与对照组相比，消化道肿瘤患者化疗前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例均较低（P < 0.05），CD8+细胞百分比明显升高（P < 0.05），差异有统计学意义。消化道肿瘤患者化疗后CD3+、CD4+百分比和CD4+/CD8+比值较化疗前均增高，差异有统计学意义（P < 0.01或P < 0.05），CD8+降低，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

不同病理类型的肿瘤患者化疗前后T细胞亚群结果比较显示，结肠癌和胃癌患者化疗后CD3+、CD4+百分比较化疗前均增高（P < 0.05），CD8+降低（P < 0.05），差异均有统计学意义；直肠癌患者化疗后CD3+百分比较化疗前增高（P < 0.05），CD8+百分比降低（P < 0.05），差异均有统计学意义，化疗前后CD4+、CD4+/CD8+比值差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

表1 消化道肿瘤患者化疗前后外周血T淋巴细胞亚群的表达（x±s）

注：与对照组比较，#P < 0.05；与化疗前比较，*P < 0.05，**P < 0.01

表2 不同病理类型消化道肿瘤患者化疗前后T细胞亚群比较（x±s）

注：与同类型化疗前比较，#P < 0.05，*P > 0.05

3 讨论

肿瘤与免疫的关系复杂，免疫功能低下或抑制均有可能导致肿瘤发生。外周血T细胞亚群是经研究证实能较好反映机体细胞免疫状态的指标。免疫学机制中，CD3+体现总细胞免疫状态。CD4+称为辅T淋巴细胞，和其他免疫细胞一起参与免疫应答，以达到抗肿瘤作用。文献报道[3-5]，CD3+、CD4+淋巴细胞减少会导致免疫功能低下。CD8+通过自身及抑制因子在免疫反应中起负向作用，抑制CD4+细胞和B细胞功能，从而抑制抗体形成及细胞免疫反应，CD8+细胞增多有利于肿瘤持续增长，而在肿瘤发展过程中又可诱导和激发CD8+细胞，进而促进肿瘤增殖。CD3+、CD4+细胞能促进效应细胞抗肿瘤作用，CD3+、CD8+细胞主要为抑制性T细胞，抑制机体免疫应答。研究证实，在肿瘤或其他疾病进展过程中，机体免疫功能常呈现紊乱，其中一个明显表现为T淋巴细胞亚群在数量上和功能上发生改变[6-7]。在消化道肿瘤形成中，由于肿瘤细胞会产生一些免疫抑制因子，使得CD4+减少，CD8+反应性增多；同时，由于增多的CD8+细胞可能是以抑制性T细胞（TS）居多，这变相对CD4+细胞产生一定抑制作用，使CD4+/CD8+比值下降。正常生理状态下，CD4+/CD8+处于相对稳定状态，实现机体细胞免疫功能稳定。若T细胞总数或CD4+/CD8+ T细胞比值发生异常时，反映机体正常T细胞亚群状态被打破，视为免疫调节紊乱，宿主免疫功能低下或受抑制，易发生肿瘤或自身免疫疾病，机体正常的免疫功能会发生变化，呈现下降趋势。

本研究结果显示，与对照组相比，消化道肿瘤患者化疗前CD3+、CD4+百分比较低（P < 0.05），CD8+较对照组升高（P < 0.05），差异有统计学意义。提示肿瘤患者确实存在免疫功能低下表现，与国内外报道相符[8-9]。而CD4+/CD8+比值明显下降，说明消化道肿瘤患者体内细胞免疫功能处于抑制状态，对识别和杀伤癌变细胞的能力下降，引起机体免疫平衡状态被打破。化疗后CD3+、CD4+较化疗前有所增高（P < 0.01），趋于正常，化疗后CD4+/CD8+比值较化疗前增高（P < 0.05），与文献报道相符[10-11]。提示消化道肿瘤患者体内免疫功能有不同程度的恢复[12]。CD4+/CD8+比值用于反映患者淋巴系统的机能状态，但目前对于肿瘤患者化疗效果、淋巴细胞亚群以及CD4+/CD8+并没有一个统一的参考标准。同时，不同肿瘤类型可导致T淋巴细胞亚群发生不同程度的改变，在临床中通过比较化疗前后淋巴细胞亚群变化情况，客观地反映机体的免疫状况，判断患者的病情进展以及评价疗效[13]。

本研究结果显示，直肠癌CD4+在化疗前后的变化不如结肠癌和胃癌CD4+在化疗前后的变化明显，说明直肠癌化疗对CD4+的影响不显著，这与部分文献报道[14]不符。探究其原因，可能由于本次研究病例中有部分患者已接受多周期化疗疗程，患者细胞免疫功能逐渐减低，且细胞活化能力较前减低，同时或许与患者T淋巴细胞水平、年龄有关，更与其选择的化疗方案，如FOLFOX4（奥沙利铂+5-氟尿嘧啶+亚叶酸钙）、FOLFRI（伊立替康+5-氟尿嘧啶+亚叶酸钙）或XELOX（奥沙利铂+卡培他滨）等方案的不同、疗程次数、疗程长短等因素有关。在不同病理类型的肿瘤患者中，化疗后CD4+/CD8+比值虽有增高，但直肠癌和胃癌化疗前和化疗后CD4+/CD8+的变化差异无统计学意义（P > 0.05），与部分文献报道不符[15-16]。究其原因主要为CD4+化疗前后变化值不明显所造成的。另外，消化道肿瘤患者外周血总T细胞CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比值在化疗后均高于化疗前，提示化疗改变了体内的免疫状态，而T淋巴细胞增高提示化疗后肿瘤负荷减少，能一定程度恢复细胞免疫调控能力。

综上所述，通过检测消化道肿瘤患者T淋巴细胞亚群化疗前后的变化，对了解机体的免疫动态，有着重要的临床意义。同时，也为免疫调节治疗和免疫增强治疗提供理论依据。

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（收稿日期：2014-04-03 本文编辑：程 铭）