孝扇草抗炎镇痛有效部位的筛选研究

摘 要：目的：分离并筛选孝扇草抗炎镇痛作用的有效部位。方法：采用系统溶剂法对孝扇草醇提物进行初步分离；采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验，筛选孝扇草抗炎作用有效部位；采用热板法和醋酸致小鼠扭体法实验，筛选其镇痛作用有效部位。结果：孝扇草醇提乙酸乙酯萃取部位对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制率为50.53%，与空白对照组比较有显著性差异（P

关键词：孝扇草；有效部位；抗炎；镇痛

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2012)01-0155-03

Study on Screening Valid Target of Anti-inflammatory and Analgesic Effets of Calystegia Soldanella

TAN Li，SHEN Qing，HUANG Zhen

(College of Pharmaceutical science，Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine，Hangzhou 310053，Zhejiang，China)

Abstract:Objective:To separate and screen the valid target of anti-inflammatory and analgesic effects of Calystegia soldanella. Methods:Systematic solvent method is used to separate the ethanol extract of Calystegia soldanella，ear edema induced by dimethylbenzene in mice was used to screen the valid target of the anti-inflammatory effects，mice hot-plate procedures and mice wthithing induced by acetic acid were used to screen the valid target of the analgesic effects. Results:The inhibition ratio of swelling induced by dimethylbenzene in mice of the ethanol-extracted acetoacetate-abstraction group of Calystegia soldanella is 50.53% (P

Key words:Calystegia soldanella；valid target；anti-inflammatory；analgesic

孝扇草为旋花科（Convolvulaceae）打碗花属（Calystegia）植物肾叶打碗花（Calystegia soldanella (L.) R.Br.[Convolvulus soldanella L.]），民间多以全草及根状茎入药[1]。国内主要分布于辽宁、河北、山东、江苏、浙江、台湾等沿海地区。浙江省的普陀、镇海、象山、温岭、平阳等沿海地区广有分布[2]。在浙江、福建等沿海一带，孝扇草资源丰富，药用历史悠久，主要有祛风利湿，化痰止咳， 清肺止血，利尿解毒等功效。用于治疗咳嗽，肾炎水肿，风湿关节疼痛，痹症等[3]。Motoo Tori[4]从孝扇草的茎中分离出反式-4-羟基桂皮酸酯、反式-4-羟基桂皮酸和反式-3，4-二羟基桂皮酸。本课题组前期研究证实孝扇草水提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀以及鸡蛋清致小鼠足肿胀均有一定的抑制作用，并能显著降低小鼠热板法致痛小鼠痛阈值，延长醋酸致小鼠扭体反应潜伏期以及扭体次数[5]，本实验为了更进一步探讨孝扇草抗炎镇痛作用的活性部位，比较观察孝扇草水提物和醇提物抗炎镇痛效果，并采用系统溶剂法对孝扇草醇提物进行了初步分离，对各部位进行了抗炎镇痛实验研究，筛选出孝扇草抗炎镇痛有效部位，为更有效地利用和开发孝扇草资源提供理论依据。

1材料和方法

1.1动物

ICR小鼠，体重（20±2）g，由浙江中医药大学实验动物中心提供。动物许可证号：SCXK（沪）2008-0115。

1.2药物和试剂

1.2.1 药材孝扇草药材采自浙江省舟山市普陀区朱家尖南沙海滩，经浙江中医药大学中药资源鉴定教研室陈孔荣副教授鉴定为旋花科打碗花属肾叶打碗花（Calystegia soldanella (L.) R.Br.[Convolvulus soldanella L.]）的全草。

1.2.2水提物 取其干燥全草，剪碎，加10倍量水浸泡1h后，回流提取两次，每次2h，合并滤液浓缩，每1mL相当于药材1g，备用。

1.2.3醇提物 取其干燥全草加入10倍量95%乙醇，浸泡1h后加热回流提取两次，每次2h，合并两次滤液，滤过，回收乙醇，浓缩至无醇味，加少量水溶解至1g/mL浓度，备用。

1.2.4醇提各溶剂萃取物 取其干燥全草加入10倍量95%乙醇，浸泡1h后加热回流提取两次，每次2h，合并两次滤液，滤过，回收乙醇，浓缩至无醇味，加少量水溶解，再分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取至无色，挥干溶剂，所得萃取部位用吐温-80配成混悬液，每1mL相当于药材1g，分别为石油醚萃取部位（Ⅰ组）、乙酸乙酯萃取部位（Ⅱ组）、正丁醇萃取部位（Ⅲ组）及各溶剂萃取后剩余部位（Ⅳ组）。

1.2.5 主要试剂 阿司匹林肠溶片，批号：091103，南京白敬宇制药有限责任公司，使用时以蒸馏水配制成相应浓度；二甲苯（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；冰醋酸（分析纯），中国杭州化学试剂有限公司。

1.3仪器

ISO9001电子分析天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；YLS-6B智能热板仪：北京吉安得尔科技有限公司。

2实验方法[6-7]

2.1孝扇草水提物及醇提物对热板法小鼠痛阈值的影响

雌性ICR小鼠40只（剔除过敏感及不敏感动物），体重（20±2）g，随机分为4组，每组10只，即空白对照组，孝扇草水提组、醇提组，以生药量计浓度均为10g/kg，阳性组给予0.25g/kg的阿司匹林，连续7天，末次给药30min后，将小鼠放在55℃热板上，以小鼠舔后足或跳跃反应潜伏期为痛阈指标，记录在热板上停留的时间。

2.2孝扇草水提物及醇提物对醋酸致小鼠扭体的影响

雄性ICR小鼠40只，体重（20±2）g，分组与给药方法同2.1，每组10只，连续给药7天，末次给药30min后，各小鼠腹腔注射0.6%的乙酸0.1mL/10g，然后观察15min内由乙酸引起的扭体次数，并计算抑制率。抑制率=（空白对照组平均扭体次数-试药组平均扭体次数）/空白对照组平均扭体次数。

2.3孝扇草醇提各溶剂萃取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

雄性ICR小鼠60只，体重（20±2）g，随机分为6组，每组10只，即空白对照组，孝扇草醇提石油醚萃取物组（Ⅰ组）、乙酸乙酯萃取物组（Ⅱ组）、正丁醇萃取物组（Ⅲ组）、各溶剂萃取后剩余部位组（Ⅳ组），以生药量计浓度均为10g/kg，阳性药组给予0.25g/kg的阿司匹林。灌胃给药，每天1次，连续给药7天，空白对照组给同体积蒸馏水，末次给药1h后，于小鼠右耳前后涂二甲苯0.02mL/只，左耳不做任何处理。45min后将动物断椎处死，剪下双耳，用9mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，电子天平称重，每鼠右耳重量减去左耳重量为肿胀度，肿胀抑制率=（对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度）/对照组平均肿胀度×100%。

2.4孝扇草醇提各溶剂萃取物对热板法小鼠痛阈的影响

雌性ICR小鼠60只（剔除过敏感及不敏感动物），体重（20±2）g，分组与给药方法同2.3，连续7天，末次给药30min，将小鼠放在55℃热板上，以小鼠舔后足或跳跃反应潜伏期为痛阈指标，记录在热板上停留的时间。

2.5孝扇草醇提各溶剂萃取物对醋酸致小鼠扭体的影响

雄性ICR小鼠72只，体重（20±2）g，分组与给药方法同2.3，每组12只，连续给药7天，末次给药30min后，各小鼠腹腔注射0.6%的乙酸0.1mL/10g，然后观察15min内由乙酸引起的扭体次数，并计算抑制率。抑制率=（空白对照组平均扭体次数-试药组平均扭体次数）/空白对照组平均扭体次数。

2.6统计学处理

应用SPSS 11.0统计软件进行数据处理分析，所有指标均以均数±标准差±s表示，组间比较采用t检验。

3实验结果

3.1孝扇草水提物及醇提物对热板法小鼠痛阈值的影响

以孝扇草水提物和醇提物分别灌胃给药7天后，测小鼠痛阈值，与空白组对照，小鼠痛阈值均显著升高（P

3.2孝扇草水提物及醇提物对醋酸致小鼠扭体的影响

以孝扇草水提物和醇提物分别灌胃给药7天后，测小鼠扭体次数，并计算扭体抑制率，与空白组对照，小鼠扭体次数显著减少，水提组和醇提组扭体抑制率分别为46.12%，92.99%，结果显示，其水提物和醇提物均能显著减轻小鼠疼痛，且醇提组比水提组效果更显著（P

3.3孝扇草醇提各溶剂萃取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

孝扇草醇提各溶剂萃取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响结果见表3，孝扇草醇提乙酸乙酯萃取物组（Ⅱ组）对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有显著的抑制作用（P

3.4 孝扇草醇提各溶剂萃取物对热板法小鼠痛阈的影响

孝扇草醇提各溶剂萃取物对热板法小鼠痛阈的影响见表4。结果表明孝扇草醇提乙酸乙酯萃取物组（Ⅱ组）和各溶剂萃取后剩余部位组（Ⅳ组）能显著提高小鼠的痛阈值，与空白组对照有显著差异（P

3.5 孝扇草醇提各溶剂萃取物对醋酸致小鼠扭体的影响

孝扇草醇提各溶剂萃取物对醋酸致小鼠扭体的影响见表5，由表5可知，孝扇草醇提乙酸乙酯萃取物组（Ⅱ组）和正丁醇萃取物组（Ⅲ组）能明显减少醋酸致小鼠扭体反应次数，与空白组对照具显著性差异(P

4讨 论

本实验采用的小鼠热板法、醋酸致小鼠扭体法和二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验为研究药物的抗炎镇痛作用的经典实验。本实验通过比较孝扇草水提物和醇提物的抗炎镇痛效果，得出孝扇草醇提物抗炎镇痛作用比水提物效果更为显著，因此对其醇提物进行系统溶剂萃取，并对各部位进行抗炎镇痛实验，从孝扇草醇提物各分离部位的抗炎结果看，孝扇草醇提乙酸乙酯萃取部位能明显抑制二甲苯诱发的小鼠耳廓肿胀，具有一定的抗炎作用，其作用机制可能与降低毛细血管通透性、减少渗出有关。孝扇草醇提乙酸乙酯萃取部位和剩余部位能提高小鼠的痛阈值，其醇提乙酸乙酯、正丁醇萃取部位能减少醋酸引起的小鼠扭体次数。综上所述，可初步确定孝扇草醇提乙酸乙酯部位为抗炎镇痛主要有效部位。

目前国内外有关孝扇草的研究甚少，古籍中记载其具有良好的抗风湿作用，在民间被用于治疗咳嗽，肾炎水肿，风湿性关节疼痛，痹症等病症[1]。本实验筛选出孝扇草抗炎镇痛的有效部位，为今后研究开发孝扇草治疗类风湿性关节炎的相关制剂提供理论依据，同时也为继续研究孝扇草抗类风湿性关节炎的活性成分奠定了基础。

参考文献

［1］ 全国中草药汇编编写组. 全国中草药汇编[M].2版.北京：人民卫生出版社，1996:630.

[2] 浙江植物志编辑委员会. 浙江植物志：第5卷[M].杭州：浙江科学技术出版社，1989:179.

[3] 江纪武编. 药用植物辞典[M].天津：天津科学技术出版社，2005:136.

[4] Motoo Tori U，Yukiko Ohara．Katsuyuki Nakashima，et al．Caffeic and coumaric acid esters from Calystegia soldanella [J]．Fitoterapia，2000，71:353―359．

[5] 黄真，冯春荣.孝扇草水提液抗炎镇痛作用的实验研究[J].中华中医药学刊，2011，28（6）：1142-1143.

[6] 陈奇.中国药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2000:355.

[7] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理学实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2002:882.