香附总黄酮超声波提取探究论文

1仪器与试剂

1.1仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40kHz,江苏省昆山市超声仪器有限公司）；UV-755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHB-III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。

1.2试剂95%乙醇；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；乙酸镁AR；镁粉AR；正丁醇AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜香附（采于广西百色市）。

2方法与结果

2.1总黄酮成分提取取新鲜香附，烘干，粉碎。称取香附粉末约6g，加80ml95%乙醇，超声波提取2.5h，抽滤。滤渣再加80ml95%乙醇，超声波提取2.5h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25ml左右为止，放置250ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。

2.2测定方法依据以芦丁为对照品测定香附中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

2.3定量实验-总黄酮的含量测定

2.3.1波长的选择取样品液适量，在0.30ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

2.3.2标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.10mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加4%氢氧化钠溶液4.00ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min，以试剂作空白参比液，于510nm处测吸光度。结果见表1。

表1分光光度法测定芦丁对照液吸光度结果（略）

根据上表得回归方程：A=-0.0311+13.5184C，r=0.9999。

2.3.3提取物含量的测定精密吸取样品液0.50ml，置10ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定吸光度A=0.0949，根据回归方程：A=-0.0311+13.5184C，计算样品中总黄酮的含量C=0.1864mg/ml。

2.3.4回收率实验精密量取样品液2.00ml，加入标准芦丁对照品2.00ml（0.10mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为102.7%。

2.4定性实验-总黄酮的鉴别

2.4.1颜色反应

紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。

浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。

三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。

乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。

盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。

2.4.2纸层析取样品溶液10μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5体积比为展开剂，上行展开5h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。

3讨论

实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为102.7%。利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的。此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。

黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［5］。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。

黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［8，9］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，香附分布广泛。本实验结果表明，香附中含有较为丰富的黄酮。因此，香附具有广泛的开发和利用价值，值得综合利用，加强资源开发。

【参考文献】

［1］黄险峰，彭国平.香附的化学成分及药理研究进展［J］.中药材，2003，26(1):65.

［2］谢英俊，鲁振坤．库存薄弱需求强劲香附价将上升［J］.全国药材商情，2005，(10):5.

［3］徐才华，符仙宇．行气止痛话香附［J］.浙江中医杂志，2002，37(6):258.

［4］赵峻．常用中药识别与应用手册，第2版［M］.青岛：青岛出版社，2004，10:114.

［5］夏杏洲，张辉，魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究［J］.食品研究与开发，2002，23(5):35.

【摘要】目的探讨香附总黄酮的提取及鉴别方法，以充分利用香附植物资源，避免资源的浪费。方法采用超声波乙醇浸提法从香附中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.1864mg/ml，回收率为102.7%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取香附黄酮类物质的有效途径。

【关键词】超声波提取香附总黄酮鉴别