骶骨脊索瘤中生存素的表达及其临床意义

[摘要] 目的 研究骶骨脊索瘤组织中生存素（survivin）的表达情况，为骶骨脊索瘤的预后判断和靶向治疗提供理论依据。 方法 通过对苏州大学附属第一人民医院2000年1月～2010年7月住院患者进行筛选和随访，获得完整病例资料和肿瘤组织蜡块标本30例以及瘤旁正常组织标本10例；采用SP免疫组织化学法检测上述标本中survivin与CD34的表达情况，利用CD34标记组织中的微血管；统计分析survivin在骶骨脊索瘤组织与瘤旁组织中表达的差异性；统计分析微血管密度（microvessel density，MVD）在肿瘤组织与瘤旁组织，肿瘤组织survivin阳性组与阴性组中的差异性；肿瘤组织中survivin的表达与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、肿瘤部位、复况有无相关性；对复发结果进行Kaplan-Meier 单因素分析并绘制无瘤生存期（CDFS）曲线，用Log-Rank法进行假设检验。 结果 ①survivin在骶骨脊索瘤中的阳性表达率为70.0%，高于瘤旁组织（P < 0.05）。骶骨脊索瘤中MVD值为（27.2±10.70）/mm2，高于瘤旁组织（8.90±3.11）/mm2（P < 0. 05）；②survivin阳性表达的骶骨脊索瘤组织中MVD值为（30.71±10.35）/mm2明显高于survivin阴性组的（19.00±6.25）/mm2（P < 0.05）；③survivin的表达与患者肿瘤有无局部浸润、是否复发相关（P < 0.05）；④骶骨脊索瘤患者survivin阳性组术后中位CDFS期24个月明显低于阴性组50个月（P = 0.005）。 结论 ①骶骨脊索瘤组织中survivin表达水平较高， 尤其是在血管丰富的脊索瘤组织中，survivin对骶骨脊索瘤的血管生成可能起正向调节作用，survivin可作为骶骨脊索瘤血管靶向治疗的一个新靶点；②survivin高表达是骶骨脊索瘤患者术后持续CDFS的独立预测因素。

[关键词] 骶骨；脊索瘤；生存素；微血管密度；免疫组织化学

[中图分类号] R738.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）05（b）-0042-04

脊索瘤是一种较为少见的原发性中低度恶性骨肿瘤，来源于脊索胚胎残存物或迷走的脊索组织，好发于头颅、骶骨和脊柱等中轴骨[1]，其中骶尾部脊索瘤最为常见[2]。近年研究表明，生存素（survivin）的高表达与恶性肿瘤的不良预后密切相关，它在肿瘤血管形成中的作用越来越被关注。

肿瘤血管的生成是肿瘤发生、生长及转移的重要条件[3]，恶性肿瘤血管的生成可以通过对血管内皮细胞标志的测定，计算微血管密度（microvessel density，MVD）来评估，MVD是评定肿瘤血管生成状态的最佳指标，被公认为是血管形成活动效应的标志。近年来在对脑胶质瘤、乳腺癌、膀胱癌等肿瘤的研究中，发现MVD与肿瘤的发生、发展和复发等密切相关，可以作为判断肿瘤预后的一个独立指标，MVD增高者往往预后不良。微血管形态学研究发现CD34内皮细胞抗原在毛细血管、小血管内皮细胞呈强阳性。CD34标记的微血管显影效果良好，背景染色浅，血管与周围组织对比明显。目前大多数研究者在肿瘤血管形成的研究中多采用血管标志物CD34对微血管进行标志[4]。故在对肿瘤血管的研究中，通过免疫组织化学方法，利用CD34标记组织中的微血管，采用显微镜任意观察多个视野，对微血管进行计数并求其平均值，即为MVD值。

本文采用免疫组化的方法，测定survivin在骶骨脊索瘤的表达情况，并对其在肿瘤血管方面进行探讨，为骶骨脊索瘤的预后判断和靶向治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

骶骨脊索瘤标本取自2000年1月～2010年7月苏州大学附属第一医院（以下简称“我院”）骨科30例临床及病理资料均完整的骶骨脊索瘤患者，其中骶骨脊索瘤组织标本30例和瘤旁正常组织标本10例。30例患者中首次在我院接受治疗28例，曾在外院接受过首次手术治疗，术后出现局部复发后来我院或再次住院2例。男17例，女13例。患者入院时年龄为18～77岁，平均（51.8±12.7）岁。肿瘤位于S3以上15例，S3及以下15例，肿瘤最大直径为62.96～116.38 mm，平均（89.67±26.71）mm，其中14例出现术后复发，复发病例中5例接受局部放疗，9例行二次手术。所有患者术前均未接受放疗和化疗，术后均经病理学证实，10例瘤旁正常组织标本均取自距离肿瘤边缘3 cm以上的组织。

1.2 主要试剂及仪器

兔抗人survivin（一抗），兔抗人CD34（一抗），生物素化羊抗兔免疫球蛋白（二抗）及SP试剂盒均为福州迈新公司产品，包埋机、切片机、微波炉、显微镜等由苏州大学病理实验室及附一院病理科提供。

1.3 实验方法

所有标本均用10%甲醛固定， 石蜡包埋切片， 采用SP免疫组化测定survivin与CD34的表达。用已知的肾癌阳性切片做阳性对照，以PBS缓冲溶液代替一抗做阴性对照。

1.4 结果判定

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 脊索瘤组织中survivin和CD34的表达

3 讨论

目前，对于骶骨脊索瘤采用彻底的根治性手术切除被认为是其最佳治疗方法[7-8]。但是由于肿瘤生长部位的解剖结构复杂、肿瘤生长的隐密性、肿瘤复发率高、手术及术后并发症等诸多因素，多数患者经单纯手术治疗后效果不甚理想[9]。自1971年，美国学者Folkman[10]首次提出“肿瘤生长依赖于血管生成”的观点以来，之后诸多试验研究和临床实践陆续、广泛地证实和肯定了肿瘤抗血管生成的治疗策略[11]。并且随着分子生物学及细胞遗传学的不断发展，人们对脊索瘤及其发生、发展、诊断和治疗的认识亦逐步从细胞水平进入到了分子水平。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族中一类最小的高度保守的抗凋亡基因表达产物，它具有抑制细胞凋亡和促进细胞增殖作用[12]，并且在肿瘤血管的形成中也有一定作用[13-14]。Survivin主要表达于胚胎组织，但不见于终末分化的成人组织（胸腺和生殖腺除外）[15]，当细胞发生转化或恶变时survivin表达显著增加[16]，因而survivin可成为肿瘤诊断和治疗的一个可靠的新靶点[17]。Sarela等[18]证实144例结肠癌患者中，survivin阳性患者术后5年生存率显著低于阴性组患者，并且其术后复发率及复发后病死率均显著高于后者。

本研究采用免疫组织化学方法检测30例骶骨脊索瘤患者survivin的表达，发现survivin在骶骨脊索瘤中的阳性表达率为70.0%，而10例正常瘤旁组织中无survivin阳性表达，差异有统计学意义（P < 0.05）。Survivin阳性表达的骶骨脊索瘤组织中MVD值明显高于survivin阴性表达组（P = 0.004），可以推测survivin在骶骨脊索瘤的发生发展过程，尤其在促进肿瘤血管生成中起着正向调节作用。14例术后复发组survivin阳性表达率为92.9%，显著高于非复发组survivin阳性表达率50.0%（P < 0.05）。骶骨脊索瘤患者survivin表达阳性组的术后中位CDFS（24个月）明显低于阴性组的术后中位CDFS（50个月），差异有统计学意义（P = 0.005）。因此笔者可以认为survivin的高表达水平可能预示着骶骨肿瘤的高侵袭性和不良预后，检测survivin表达可能对骶骨肿瘤的临床诊断治疗和预后评估有一定价值，抑制survivin的表达将可能成为恶性肿瘤靶基因治疗的理想靶点。故检测survivin的表达情况可以为临床上评估骶骨脊索瘤的进展状态、治疗和预后提供重要的理论依据。

[参考文献]

[1] Wippold FJ，Koeller KK，Smirniotopoulos JG. Clinical and imaging features of cervical chordoma [J]. AJR，1999，172（5）：1423-1426.

[2] Bohlman HH，Sachs BL，Carter JR，et al. Primary neoplasms of the cervical spine. Diagnosis and treatment of twenty-three patients [J]. J Bone Joint Surg Am，1986，68：483-494.

[3] Fonsatti E，Sigalotti L，Arslan P，et al. Emerging role of endoglin（CD105） as a marker of angiogenesis with clinical potential in human malignancies [J]. Curr Cancer Targets，2003，3（6）：427-432.

[4] 陆珍凤，黄文斌，石群立，等.结直肠癌组织中CD105的表达及临床意义[J].诊断病理学志，2008，15（4）：139-140.

[5] Lu CD，Altieri DC，Tanigawa N. Expression of a novel anti-apoptosis gene，Surviv in，correlated with tumor cell apoptosis and P53 accumulation in gastric carcinomas [J]. Cancer Res，1998，58（9）：1808-1812.

[6] Mattern J，Koomagi R，Volm M. Association of vascular endothelial growth factor expression with intratumoral microvessel density and tumor cell proliferation in human epidermoid lung cancer [J]. Br J Cancer，1996，73：931-934.

[7] Fuchs B，Dickey ID，Yaszemski MJ，et al. Operative management of sacral chordoma [J]. J Bone Joint Surg Am，2005，87： 2211-2216.

[8] Hulen CA，Temple HT，Fox WP，et al. Oncologic and functional outcome following sacrectomy for sacral chordoma [J]. J Bone Joint Surg Am，2006，7：1532-1539.

[9] Yang H，Zhu L，Ebraheim NA，et al. Analysis of risk factors for recurrence after the resection of sacral chordoma combined with embolization [J]. Spine，2009，9（12）：972-980.

[10] Folkmen J. Tumor angiogenesis：therapeutic implication [J]. N Engl J Med，1971，285（21）：1182-1186.

[11] Sund M，Hamano Y，Sugmioto H，et al. Function of endogenous inhibitors of angiogenesis as endothelium specific tumor suppressors [J]. Proc Natl Acad Sci USA，2005，102：2934-2939.

[12] Chiou SK，Jones MK，Tarnawski AS. Survivin-an anti-apoptosis protein：its biological roles and implications for cancer and beyond [J]. Med Sci Monit，2003，9（4）：43-47.

[13] La Casse EC，Baird S，Korneluk RG，et al. The inhibitors of apoptosis（IAPs）and their emerging role in cancer [J]. Oncogene，1998，17（25）：3247-3259.

[14] Shin S，Sung BJ，Cho YS，et al. An anti-apoptotic protein human surviving is a direct inhibitor of caspase-3 and -7 [J]. Biochemistry，2001，40：1117-1123.

[15] Rohayem J，Diestelkoetter P，Weigle B，et al. Antibody response to the tumor associated inhibitor of apoptosis protein survivin in cancer patients [J]. Cancer Res，2000，60（7）：1815-1817.

[16] Guzman JR，Fukuda S，Pelus LM. Inhibition of caspase-3 by Survivin prevents Wee1 Kinase degradation and promotes cell survival by maintaining phosphorylation of p34Cdc2 [J]. Gene Ther Mol Biol，2009，13B：264-273.

[17] Yamamoto T，Tanigawa N. The role of survivin as a new target of diagnosis and treatment in human cancer [J]. Med Electron Microsc，2001，34（4）：207-212.

[18] Sarela AI，Macadam RC，Farmery SM，et al. Expression of the anti-apoptosis gene，survivin，predicts death from recurrent colorectal carcinoma [J]. Gut，2000，46 （5）：645-650.

（收稿日期：2013-01-18 本文编辑：郝明明）