韭子对老年小鼠免疫功能影响的实验研究

【摘要】 目的 研究韭子水煎剂对老年小鼠免疫功能的影响。方法 以韭子水煎剂灌胃老年小鼠30 d，应用流式细胞技术检测小鼠T淋巴细胞亚群、放射免疫方法检测血清白介素?2（IL?2）含量，ELISA方法检测血清中免疫球蛋白G（IgG）的含量。结果　老年组脾脏T淋巴细胞亚群比例失调，血清IL?2和IgG含量下降；老年韭子水煎剂治疗组脾脏T淋巴细胞亚群由失衡恢复到平衡，血清IL?2和IgG含量提高。结论 韭子水煎剂具有恢复老年小鼠免疫功能的作用。

【关键词】 韭子水煎剂；老年小鼠；免疫功能

中药韭子为百合科植物韭的种子，含有生物碱、挥发油、皂甙、硫化物、蛋白质、氨基酸、油脂、维生素C等成分。研究表明，中药韭子具有补肝肾，暖腰膝，壮阳，抗炎抑菌、祛痰等药理作用〔1〕，并能增强小鼠非特异性免疫和体液免疫功能〔2〕。但对老年个体的免疫功能调节作用目前尚未见报道。本实验通过检测老年小鼠T淋巴细胞亚群，IL?2活性以及IgG含量，探讨韭子对老年小鼠免疫功能的影响。

1 材料与方法

1?1　材料

韭子购于佳木斯市药材公司。抗小鼠CD3、抗小鼠CD4、抗小鼠CD8单克隆抗体（McAb）：北京医科大学免疫系。IL?2试剂盒：总医院科技开发中心放免所；IgG ELISA检测试剂盒：北京邦定生物试剂公司。

1?2 对象

健康昆明种小鼠来自本校实验动物中心，30只,雌雄各半，青年组(2月龄)10只,体重（20±2）g,老年组(12月龄)20只,体重(50±5）g。

1?3 方法

1?3?1 中药制备

韭子50 g，按传统方法水煎煮2次，合并两次滤液后加热浓缩制成含生药量为1 g/ml的韭子水煎液。

1?3?2 实验分组

实验分为三组,青年组10只，老年组10只,老年韭子水煎剂治疗组10只。治疗组根据每鼠体重灌胃给予韭子水煎剂0?5 ml（1?24 g/kg）每日1次〔2〕;老年组、青年组,灌服生理盐水0?5 ml/只，每日1次。连续30 d后，取小鼠眼球血，离心分离血清，冻存，待检；小鼠断髓处死，无菌取脾，于Hanks液中研碎，制成1×106/ml脾细胞悬液。

1?4 指标检测

1?4?1 T淋巴细胞亚群测定

将脾细胞悬液分别加入2个试管内，1 ml/管。第1管加入FITC标记的抗小鼠CD3+单克隆抗体40 μl、第二管同时加入PE标记的抗小鼠CD4+单克隆抗体和FITC标记的抗小鼠CD8+单克隆抗体各20 μl，作用30 min后，加入1 ml荧光洗液，2 200 r/min离心5 min，去上清。加入1 ml荧光保存液，流式细胞仪检测106个细胞中各细胞亚群的百分率。

1?4?2 血清IL?2的检测

采用放射免疫法测定法，按试剂盒说明书操作。

1?4?3 血清IgG检测

ELISA法，按试剂盒说明书操作。

1?5 统计学处理

实验各项指标以x±s表示，通过SPSS10?0软件进行统计学处理，组间进行方差分析、q检验。

2 结果

2?1 韭子水煎剂对老年小鼠T淋巴细胞亚群的影响

见表1。老年组与青年组比较，CD4+ 亚群的比例、CD4+/CD8+的比值明显降低，统计学有显著性差异（P＜005），说明模型成功；应用韭子水煎剂治疗后，治疗组CD4+亚群和CD4+/CD8+的比值与青年组比较无明显差异（P＞005）。表1 韭子水煎剂对衰老小鼠脾脏T淋巴细胞

亚群功能的影响(略)

2?2 韭子水煎剂对老年小鼠血清IL?2和IgG含量的影响

见表2。老年组与青年组比较，血清IL?2和IgG水平明显降低，具有显著性差异（P＜005），说明模型成功；应用韭子水煎剂治疗后，治疗组与青年组比较，血清IL?2和IgG含量水平无明显差异（P＞005）。 表2 韭子水煎剂对小鼠血清IL2的影响(略)

3 讨论

在衰老个体，免疫器官出现萎缩,淋巴细胞总数下降,各亚群的功能也降低,CD4细胞和CD8细胞比例改变,表面的CD4受体和CD8受体的密度也下降；淋巴细胞分泌的细胞因子如IL?2的含量也发生了改变，造成个体一生中第二个发病高峰〔3〕。通过本实验证明,韭子水煎剂能调整衰老个体T淋巴细胞亚群的失衡，起到了恢复细胞免疫功能的作用。并通过提高IL?2和IgG水平，进一步的调整了衰老小鼠细胞免疫功能和体液免疫功能。T细胞介导细胞免疫，Th细胞(CD4+)和TS细胞(CD8+)的相互协调是调控的重要环节之一。

CD4+/ CD8+的比值反应机体免疫内环境是否稳定的一个重要指标,两者平衡决定了免疫反应的总效应,若比值偏离正常值,说明机体免疫功能失调〔4〕。本实验结果表明：老年小鼠CD4+细胞明显降低，CD4+/ CD8+比值偏离正常水平，提示老年小鼠T细胞亚群的分布发生了变化,导致衰老小鼠细胞免疫功能低下。IL?2的主要来源是Th细胞。主要促进CTL和NK细胞增殖;促进B细胞分化和增殖，B淋巴细胞经过细胞增殖、抗原选择、免疫球蛋白类型转换和细胞表面某些标志的改变以及体细胞突变，最终分化为浆细胞，产生高亲和力抗体，介导体液免疫〔5〕。老年小鼠血清IL?2和 IgG较青年组明显减少，说明老年个体也存在着体液免疫功能的低下，这与产生IL?2的Th淋巴细胞减少有关，从而导致IL?2的产生减少或活性降低，则刺激B淋巴细胞活化以及分泌抗体能力减弱。

韭子水煎剂可改善老年小鼠CD4+亚群比例及CD4+/CD8+比值、提高老年小鼠血清IL?2水平和IgG的含量，则说明韭子可增强老年小鼠细胞免疫功能和体液免疫功能，达到恢复老年小鼠免疫功能低下的目的。所以，韭子作为重要的免疫调节剂，为老年免疫功能低下和预防免疫功能低下疾病提供了重要的实验依据。

【参考文献】

1 肖培根?新编中药志〔M〕?第2卷?北京：化学工业出版社，2002:512?

2 于 艳?韭子增强非特异性免疫和体液免疫作用的实验研究〔J〕?黑龙江医药科学，2006；29（1）：19?20?

3 鲁彦，吴绍宇，姚嵩坡，等?玉米须对老年小鼠细胞免疫功能的影响〔J〕?中国老年学杂志，2005；25（11）：1387?8?

4 Fagnoni FF，Vescovini R，Passeri G,et al?Shortage of circulating naive CD8+ T cells provides new insights on immunodeficiency in aging〔J〕?Blood，2000；95：2860?8?

5 张涛，柳朝阳，王建杰，等?肉苁蓉总苷对D半乳糖所致衰老模型小鼠免疫功能的影响〔J