激素敏感型肾病综合征患儿CD19+CD23+B细胞、CD4+CD25+T细胞、E―选择素和白介素―12水平变化及其与白蛋白、血胆固醇的相关性

[摘要] 目的 探讨激素敏感型肾病综合征患儿CD19+CD23+ B细胞，CD4+CD25+ T细胞，E-选择素和白介素-12含量变化及其与白蛋白、血胆固醇的相关性。 方法 选取2012年3月～2015年1月在海南医学院附属医院进行治疗的初发激素敏感型肾病综合征患儿35例作为观察组，另选取在门诊体检的健康儿童30例作为对照组，观察并比较两组治疗前、治疗4周、治疗8周B细胞、T细胞亚群、E-选择素和白介素-12水平；分析B细胞、T细胞亚群、E-选择素和白介素-12水平与治疗前血白蛋白和血胆固醇水平的相关性。 结果 ①观察组CD4+CD25+ T细胞治疗前与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；治疗8周后CD4+CD25+ T细胞水平与治疗前比较，差异有统计学意义（P < 0.05），观察组CD19+CD23+ B淋巴细胞与对照组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；②观察组治疗前和治疗4周E-选择素和白介素-12明显高于对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）；观察组治疗8周后E-选择素和白介素-12明显低于治疗前，差异有统计学意义（P < 0.05）；③E-选择素与血白蛋白呈负相关（r = -0.417，P < 0.05），与血胆固醇成正相关（r = 0.527，P < 0.05）；白介素-12与血白蛋白呈负相关（r = -0.722，P < 0.01），与血胆固醇成正相关（r = 0.817，P < 0.01）；CD19+CD23+ B细胞和CD4+CD25+ T与血白蛋白、血胆固醇无相关性（P > 0.05）。 结论 CD4+CD25+ T细胞/E-选择素和白介素-12与敏感型肾病综合征相关，其中E-选择素和白介素-12与该疾病严重程度可能具有一定相关性。

[关键词] 激素敏感型肾病综合征；B淋巴细胞；T淋巴细胞；E-选择素

[中图分类号] R726.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）05（a）-0040-04

[Abstract] Objective To discuss the content changes of CD19+CD23+ B cells， CD4+CD25+ T cells， E-selectin and interleukin-12 of children with steroid-sensitive nephrotic syndrome and their relationship with albumin and cholesterol. Methods From March 2012 to January 2015， in Hainan Medical College Affiliated Hospital， 35 children with steroid sensitive nephrotic syndrome were selected as observation group； another 30 cases of healthy children received outpatient physical examination were chosen as control group. B cells， T cell subsets， E-selectin and interleukin-12 levels of two groups before treatment， after treatment 4 weeks and after treatment 8 weeks were observed and compared， the correlations among B cells， T cell subsets， E-selectin， interleukin-12 levels and blood albumin， blood cholesterol levels were analyzed. Results ①The CD4+CD25+T cells of observation group before treatment was compared with control group， the difference was statistically significant （P < 0.05）； the CD4+CD25+T level after 8 weeks was compared with before treatment， the difference was statistically significant （P < 0.05）. CD19+CD23+ B lymphocytes of observation group was compared with control group， the difference was not statistically significant （P > 0.05）. ②E-selectin and interleukin -12 of observation group before treatment and after treatment 4 weeks were obviously higher than those of control group， the differences were statistically significant （P < 0.05）； E- selectin and interleukin-12 of observation group after treatment 8 weeks were obviously lower than those of control group， the differences were statistically significant （P < 0.05）； ③E-selectin was negatively correlated with serum albumin （r = -0.417， P < 0.05）， it had a positive correlation with blood cholesterol （r = 0.527， P < 0.05）； interleukin-12 was negatively correlated with blood albumin （r = 0.722， P < 0.01）， it had a positive relation with blood cholesterol （r = 0.817， P < 0.01）； CD19+CD23+B cells and CD4+CD25+T cells had no significant correlation with blood albumin or blood cholesterol （P > 0.05）. Conclusion CD4+CD25+ T cells， E-selectin and nterleukin-12 have something to do with steroid-sensitive nephrotic syndrome， and E- selectin and nterleukin-12 have certain correlation with the severity of the disease.

[Key words] Steroid-Sensitive Nephrotic Syndrome； B lymphocytes； T lymphocytes； E-selectin

肾病综合征是儿童常见的肾小球疾病，其发病机制目前尚未完全明确。由于儿童肾病综合征有近50%会复发，故寻求一种临床参考指标对于肾病综合征病情检测具有重要意义[1]。研究证实，在肾病综合征患者会出现脂质和白蛋白紊乱现象，具体表现为高血脂和低白蛋白血症，这对监测肾病综合征患儿病情尤其是发现合并并发症患儿有重要的参考价值[2]。近期研究认为T淋巴细胞亚群功能紊乱以及比例失调导致肾小球滤过膜通透性改变是引起儿童肾病综合征发生以及进展的主要原因[3]。近年来有研究利用CD20单克隆抗体缓解难治性肾病综合征获得成功，认为B淋巴细胞同样参与了肾病综合征发生与发展[4]。本研究通过对激素敏感型肾病综合征患儿CD19+CD23+ B细胞，CD4+CD25+ T细胞及其可能相关因子E-选择素和白介素-12水平进行测定，观察治疗前后各因子水平变化，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年3月～2015年1月在海南医学院附属医院进行治疗的初发激素敏感型肾病综合征患儿35例作为观察组，其中男24例，女11例，年龄2～11岁，平均年龄（5.12±2.17）岁。对照组选取同期在门诊体检的健康儿童30例，其中男20例，女10例，年龄2～12岁，平均年龄（5.42±2.46）岁。两组性别、年龄一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

纳入标准：患儿符合《肾病综合征诊治循证指南》中对肾病综合征的诊断，并且在应用泼尼松足量治疗≤4周症状消失，蛋白尿转阴[5]；患儿为初次发病，并且入院诊治前未使用过糖皮质激素或者免疫抑制剂。

排除标准：排除感染、免疫类疾病、肝肾功能障碍、内分泌疾病等。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 患儿经确诊后应用泼尼松2 mg/（kg・d）（浙江仙琚制药公司，国药准字H20023134）进行治疗，共治疗8周。

1.2.2 检测方法 CD19+CD23+ B细胞和CD4+CD25+ T细胞检测采用流式细胞术，相关抗体为美国beckmen公司产；E-选择素和白介素-12检测选用酶联免疫吸附法，取患儿静脉血3 mL，以2000 r/min离心5 min，取上清应用酶联免疫吸附法进行检测，试剂盒由上海森雄药品有限公司提供。血清胆固醇检测采用酶法测定，血清白蛋白应用双向凝胶电泳法，采取清晨静脉血2 mL，1500 r/min离心10 min，取上清进行检测，试剂为美国Fisher公司生产，按操作按试剂说明书进行。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 19.0对数据进行分析，正态分布的计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者B淋巴细胞亚群、T淋巴细胞亚群

观察组CD4+CD25+ T细胞治疗前与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；治疗8周后CD4+CD25+ T水平与治疗前比较，差异有统计学意义（P < 0.05），CD19+CD23+ B淋巴细胞与对照组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 两组患者E-选择素和白介素-12比较

观察组治疗前和治疗4周E-选择素和白介素-12明显高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.01）；观察组治疗8周后E-选择素和白介素-12明显低于治疗前，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.3 患儿治疗前四种因子与血白蛋白和血胆固醇相关性研究

E-选择素与血白蛋白呈负相关（r = -0.417，P < 0.05），与血胆固醇成正相关（r = 0.527，P < 0.05）；白介素-12与血白蛋白呈负相关（r = -0.722，P < 0.01），与血胆固醇成正相关（r = 0.817，P < 0.01）；CD19+CD23+ B细胞和CD4+CD25+ T与血白蛋白、血胆固醇无显著相关性（P > 0.05）。见表3。

3 讨论

儿童肾病综合征发病机制复杂，目前仍未明确。众多学者倾向于与免疫因子和免疫紊乱有关[6]。一般认为，肾病综合征发病与B、T淋巴细胞有关，具体表现为淋巴细胞亚群比例异常[7]。目前对儿童肾病综合征B、T细胞亚群研究结论不一，有研究发现在儿童肾病综合征活动期存在CD4/CD8比值出现异常，提示肾病综合征与CD4+以及CD8+T淋巴细胞异常有关[8]。目前认为对CD4+Th细胞的检测更能反映出T淋巴细胞的功能。其中CD4+CD25+调节性T细胞是目前研究的热点[9]。活化的CD4+CD25+T细胞主要通过两种途径发挥其免疫调节作用：①接触性途径，此为CD4+CD25+T细胞主要调节方式，其能够通过CTLA-4与靶细胞表面分子进行结合，从而激活细胞内信号途径，抑制靶细胞的活性[10]；②分泌途径：CD4+ CD25+ T细胞能够通过TCR介导的信号进行活化并分泌生长因子β和具有抑制作用的白介素来发挥调节作用[11]。此外，近来研究发现，CD4+CD25+T细胞表面含有一种胞外酶，此酶能够将ATP降解为AMP，协助细胞发挥其调节作用[12]。有研究认为，CD4+CD25+ T细胞能够抑制各类活化的细胞毒性T细胞，减轻肾病综合征患者凝血功能紊乱状态[13]。也有研究发现，对于激素敏感型肾病综合征患儿，在应用泼尼松进行治疗后，CD4+CD25+T细胞明显上升，而对于耐药型肾病综合征患儿，再经治疗后CD4+CD25+T细胞无明显改变，认为肾上腺糖皮质激素类药物是通过调节CD4+CD25+T细胞表达而达到治疗目的[14]。本研究发现，肾病综合征患儿在治疗前CD4+CD25+T水平明显低于对照组，而经过泼尼松进行治疗8周后，CD4+ CD25+ T细胞水平明显上升，并且与正常儿童差异不大。说明CD4+CD25+T细胞与患儿病情息息相关，其处于正常水平能够抑制其他活性T细胞，抑制病情发生、发展。

肾病综合征除了与T细胞功能有关外，近年来许多研究认为其与B淋巴细胞数量与功能有关[15]。研究发现，在激素敏感型肾病综合征复发期间，发现有B细胞功能亢进现象，表现为大量B细胞激活。B淋巴细胞出现高反应性，会大量合成和分泌自身抗体，从而导致自身免疫性疾病[16-17]。学者在对肾病综合征患儿进行活检发现，其肾小球和肾间质中并未发现B淋巴细胞浸润现象[18]。本研究发现，激素敏感型肾病综合征患儿在治疗前后CD19+CD23+B淋巴细胞与对照组差异无统计学意义，认为B淋巴细胞在肾病综合征发挥作用不在于数量或者侵润，可能是其功能上异常。因此本研究认为CD19+CD23+B淋巴细胞并非导致肾病综合征的直接因素。

E-选择素作为一种细胞黏附分子选择素家族成员，主要在血管内皮细胞上表达。E-选择素参与多种自身免疫性疾病发生与发展，并且其水平与疾病严重程度相关[18]。有研究发现，白介素-12与IgA肾病有关，并且可以作为IgA肾病治疗效果的评价指标。并且在肾小球系膜区的白细胞介素-12阳性数也与各类肾病的病理类型有关[19]。本研究同样发现，肾病综合征患儿血清中E-选择素和白介素-12水平要高于正常儿，提示其两种因子同样与该疾病有关。

在肾病综合征发病和进展过程中，血脂水平与疾病严重程度相关，故有研究认为患者血脂水平决定患儿的预后[20]。研究发现，患者血中血脂增高主要原因是由于肾小球滤过膜遭到破坏，导致血清中白蛋白从尿液中丢失，继发高血脂症，故患者表现为血清中血脂升高，白蛋白降低[21]。本研究发现，肾病综合征患儿E-选择素和白介素-12与血清白蛋白和血脂具有相关性，说明两种因子同样与疾病发展具有相关性。而CD4+CD25+ T细胞与血清白蛋白和血脂不具有相关性，说明CD4+CD25+ T细胞并不是直接作用于该疾病，而是通过抑制其他免疫细胞功能实现的。

综上所述，CD4+CD25+ T细胞，E-选择素和白介素-12与敏感型肾病综合征相关，因此可以作为儿童肾病综合征诊断以及治疗效果评估手段。此外，E-选择素和白介素-12与血清白蛋白和血脂具有相关性，说明两种因子可能是导致患儿出现蛋白尿、高脂血症的直接因素，因此可以作为疾病严重程度的评估手段。

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（收稿日期：2016-02-02 本文编辑：苏 畅）