丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖及Hes1、Hes5表达的影响

摘要：目的 观察丹龙醒脑方对脑缺血再灌注模型大鼠侧脑室室管膜下区（SVZ）神经干细胞（NSCs）增殖与Hes1、Hes5表达的影响，探讨其促进内源性NSCs增殖的作用机制。方法 将80只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组（依达组）、丹龙醒脑方组（丹龙组）。采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型，再灌注7 d后取缺血侧SVZ脑组织。Brdu免疫荧光法检测SVZ NSCs增殖，RT-qPCR、Western blot分别检测Hes1、Hes5 mRNA和蛋白的表达。结果 与假手术组比较，其余各组Brdu阳性细胞率增加，Hes1、Hes5 mRNA及蛋白表达明显升高（P

关键词：丹龙醒脑方；室管膜下区；神经干细胞；增殖；Hes1；Hes5；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.016

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）01-0069-05

Effects of Danlong Xingnao Formula on Proliferation of Neural Stem Cells in Sub Ventricular Zone and Expressions of Hes1 and Hes5 in Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury Model Rats CHEN Ping-ting1，2， ZHOU Xiao-qing1，2，3， LIU Wang-hua1，2，3， CAO Ze-biao1，2， CHEN Yu-wen1，2， LI Hua1，2，3 （1. Institute of Diagnostics Traditional Chinese Medicine， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410208， China； 2. The Key Laboratory of Diagnostics of Chinese Medicine in Hunan Province， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410007， China； 3. Collaborative Center for Research and Innovation of Digital Chinese Medicine， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410208， China）

Abstract： Objective To study effects of Danlong Xingnao Formula （DLXNF） on proliferation of neural stem cells （NSCs） and the expressions of Hes1 and Hes5 in sub ventricular zone （SVZ） in cerebral ischemia-reperfusion injury model rats； To explore the mechanism of promoting the proliferation of NSCs Methods Eighty male SD rats were randomly divided into sham-operation group， model group， edaravone group and DLXNF group. The focal cerebral ischemia reperfusion injury models were prepared by suture method， and 7 d after reperfusion， the SVZ brain tissue of ischemia side was taken. The proliferation of cells was detected by Brdu labeling fluorescence immunocytochemistry； Hes1， Hes5 mRNA and protein expressions were detected by fluorescence real-time quantitative PCR and Western blot method in each group. Results Compared with the sham-operation group， Brdu positive cell rate in other groups increased more obviously， and the expressions of Hes1， Hes5 mRNA and protein also increased significantly （P

丹龙醒脑方中丹参为君，田七、远志、石菖蒲为臣，佐以地龙、淫羊藿、菟丝子。全方通补兼施，以通为主，共奏活血通络、化痰开窍、补肾生髓之功。孟氏等[17]研究显示，益气活血方和补肾生髓方能通过增强缺血侧额顶叶皮质Hes1和Hes5的表达，调节Notch信号转导通路，促进内源性NSCs增殖，与本实验结果一致。另外，现代药理研究表明，大鼠脑缺血后应用丹参酮[18]、三七总皂苷[19]、淫羊藿及其提取物[20]等均能促进NSCs增殖。

综上所述，丹龙醒脑方能促进脑缺血后SVZ NSCs增殖，其机制与通过上调Hes1、Hes5水平有关，可能通过激活Notch信号通路来实现。但由于γ-分泌肽酶抑制剂DAPT（Notch通路阻滞剂）有明显肠道毒性，且参与体内多个信号系统的调节，其应用造成如痴呆样的不良反应，严重干扰实验的观察。因此，本研究未设置Notch通路抑制剂对照组，有待今后体外研究进一步验证。该通路上游的配体和受体等其他组成成分表达情况未进行观察，与Notch通路直接相关及相关的程度也有待今后进一步研究。

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（收稿日期：2015-08-10；编辑：华强）