马来酸罗格列酮缓释片有关物质的测定

[摘要] 目的：建立RP-HPLC法测定马来酸罗格列酮缓释片的有关物质。方法：采用ODS DiamonsilTM C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.01 mol/L醋酸钠水溶液（冰醋酸调pH=6.0）（57∶43）。检测波长为247 nm，流速为1.0 ml/min。结果：罗格列酮与各杂质及降解产物分离良好，在10~60 μg /ml浓度范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为99.9%，RSD为0.68%，最低检测限为10 ng，最低定量限为70 ng。结论：该方法简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好，可用于马来酸罗格列酮缓释片有关物质的测定。

[关键词] 马来酸罗格列酮缓释片；有关物质；反相高效液相色谱法

[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）05（b）-029-03

Determination of related substances of self-made Rosiglitazone Maleate Sustained Released Tablets

PANG Xiao-hua,CHEN Chun-shui

(The fourth Manufacture Department, Guangzhou Baiyunshan Pharmaceutical General Factory, Guangzhou 510515,China)

[Abstract] Objective: To establish RP-HPLC method to determine the the related substances of Rosiglitazone Maleate Sustained Released Tablets.Methods:The column was C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),the mobile phase was composed by acetonitrile-0.01 mol/L sodium acetate (glacial acetic acid adjusting pH to 6.0) (57∶43) , the detective wavelength was set at 247 nm, and the flow rate was 1.0 ml/min. Results: The separation of rosiglitazone maleate,impurity and degradation product was good.The linear range was 10~60 μg/ml(r=0.999 9),the average recovery was 99.9%(RSD=0.68%),the lowest detectable limit and the lowest quantitation limit were 10 ng and 70 ng respectively.Conclusion:The method is convenient, accurate,fast, sensitive and the reproducibility is high for the determination of related substances of Rosiglitazone Maleate Sustained Released Tablets.

[Key words] Rosiglitazone Maleate Sustained Released Tablets;Related substances; RP-HPLC

目前，糖尿病已经成为全世界发病率和死亡率最高的疾病之一，而且在包括中国在内的发展中国家流行[1]。在两种类型的糖尿病中，2型糖尿病已成为继心血管病、肿瘤之后引起人类死亡的第三大杀手，严重威胁着人类的健康，其致残、致死的主要原因是微血管及大血管合并症[2]。鉴于2型糖尿病对患者伤害大且发病数量多，我们对2型糖尿病治疗药物的研究就更加迫切。近年来研究公认胰岛素抵抗(IR)和胰岛B细胞功能缺陷是引起2型糖尿病的主要病理生理机制。马来酸罗格列酮作为第二代噻唑烷二酮（TZD)类降糖药物，在1999年5月25日被FDA批准，同年9月由美国Bristol-Myers Squibb公司上市，上市1个月就有23万张处方[3]。目前该药在国内根据国家药监局新药审评中心资料显示，从2000年至今，共受理了65个马来酸罗格列酮、盐酸罗格列酮、酒石酸罗格列酮以及罗格列酮钠的原料药、片剂、胶囊等产品申报。本文对自制马来酸罗格列酮缓释片的有关物质进行测定，用于对本品的质量控制。

1 仪器与试药

Dionex P680 HPLC高效液相色谱仪；Dionex UVD170U紫外检测器；Chromeleon 色谱工作站（Dionex corp.）；ODS DiamonsilTMC18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BA110S电子天平(d=0.01 mg，德国Sartorius)；马来酸罗格列酮缓释片（自制）；马来酸罗格列酮对照品(北京高盟化工有限公司)；乙腈（色谱纯，铱能色谱有限公司）；醋酸钠 (色谱纯，天津市光复精细化工研究所)；水为双蒸水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：ODS DiamonsilTM C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.01 mol/L醋酸钠水溶液（冰醋酸调pH=6.0）（57∶43）；流速：1.0 ml/min；检测波长：247 nm；进样量：20 μl。

2.2 标准曲线的绘制

精密称取马来酸罗格列酮(Rg-M)对照品适量，置100 ml容量瓶中，加适量甲醇溶解并稀释至刻度，制得浓度为200 μg/ml的贮备液。精密移取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分别置10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别进样20 μl测定，记录色谱图。以马来酸罗格列酮面积（A）对浓度（C）作回归方程，得标准曲线方程：A=0.569 3C-0.361 5（r=0.999 9）。结果表明，在10~60 μg /ml范围内线性关系良好。

2.3 贮备液的制备

对照品贮备液的制备：精密称取Rg-M对照品适量，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制得浓度为1.6 mg/ml的贮备液。

供试品贮备液的制备：取本品10片，精密称量，研细，分别称取适量粉末(相当于Rg-M 3.15 mg)，置100 ml容量瓶中，加甲醇适量，超声5 min，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，制得浓度为31.5 μg/ml的贮备液。

2.4加样回收率试验和精密度试验

2.4.1 加样回收率试验 取已知含量的本品10片，精密称量，研细，分别精密称取适量粉末(相当于Rg-M 160 μg) 6份，置10 ml容量瓶中，分别加入浓度为1.6 mg/ml的对照品贮备液100 μl，加甲醇适量，超声5 min，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 μl注入液相色谱议，记录色谱图，代入标准曲线计算测得量。以测得量对加入量计算回收率。结果见表1。

2.4.2 精密度试验取供试品贮备液，在同一天内连续进样6次并连续3 d测定，分别计算日内差、日间差。结果见表2。

结果表明，本品采用的HPLC法测定制剂的有关物质准确，精密。

2.5 最低检测限及最低定量限的测定

取对照品贮备液，逐步稀释，依法测定，以S/N=3时，计算最低检测限。测得最低检测限为10 ng。取对照品贮备液，逐步稀释，以S/N=10时，计算最低定量限，测得最低定量限为70 ng。

2.6样品破坏性试验

取本品10片，精密称量，研细，分别精密称取适量粉末（相当于Rg-M 0.8 mg）置3个10 ml离心管中，分别在下列条件下使其产生降解产物。

2.6.1酸破坏试验加入1 mol/L盐酸溶液1 ml，于75℃加热15 min，振摇后，放置5 h，用0.1 mol/L NaOH溶液调pH值近中性，再加甲醇稀释至刻度，滤过，吸取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。见图1。

2.6.2 碱破坏试验加入 1 mol/L NaOH溶液1 ml，于75℃加热15 min，振摇后，放置5 h，用0.1 mol/L盐酸溶液调pH值近中性，再加甲醇稀释至刻度，滤过，吸取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。见图2。

2.6.3氧化破坏试验加入30%H2O2溶液1 ml，于75℃加热15 min，振摇后，放置5 h，用甲醇稀释至刻度，滤过，吸取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。见图3。

2.7 有关物质的检查

取本品10片，研碎，精密称取适量（相当于Rg-M 8 mg），置10 ml量瓶中，加甲醇适量，超声5 min，加甲醇稀释至刻度，摇匀，静置，移取上清液，过滤，以续滤液作为供试品溶液，浓度为800 μg/ml。取上述供试品溶液1.0 ml至100 ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，以续滤液作为对照品溶液，浓度为8 μg/ml。按本文“2. 1”项下的色谱条件，吸取对照品溶液20 μl注入液相色谱仪，进行预试，调节检测器灵敏度，使主药的色谱峰达满量程的10%~25%。取供试品溶液20 μl注入色谱仪，记录色谱图不少于主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，各单一杂质峰的峰面积总和不得超过自身对照品溶液主成分峰的面积。

2.8 有关物质及含量检查

按上述方法对自制马来酸罗格列酮缓释片进行有关物质检查，结果见表3。

3 讨论

采用HPLC法对自制马来酸罗格列酮缓释片的有关物质进行检测，操作简单，分离度高，专一性强。本条件下，马来酸罗格列酮和各种破坏产物达到基线分离，与相邻的两峰分离度均大于1.5。本法测定马来酸罗格列酮的有关物质，不需繁杂的前处理，提高了效率，方法简单。可作为马来酸罗格列酮缓释片的质量控制方法。

[参考文献]

[1]李宝瑗.格列酮类（glitazones）口服胰岛素增敏剂的研究进展[J].天津药学，2002，14(1):2-3.

[2]邓晨昕，成兴波.马来酸罗格列酮治疗2型糖尿病的临床疗效观察[J].苏州大学学报,2003,23(6):726.

[3]赵圣印.糖尿病治疗药的研究进展[J].国外医药合成药生化药制剂分册,1999,20(3):130-135.

（收稿日期：2008-03-12）

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