消异方对EM患者子宫内膜中MCP—1\IL—6免疫组化表达的影响

【摘要】目的：探讨消异方对子宫内膜异位症(EMs)患者在位子宫内膜组织中MCP—1、IL—6免疫组化表达的影响。方法：将EMs患者90例随机分为空白对照组(30例)、中药治疗组(30例)、安慰剂对照组(30例)，比较3组治疗前后在位子宫内膜中MCP—1、IL—6免疫组化的表达。结果：中药治疗组治疗前后在位子宫内膜中MCP—1、IL—6含量均较用药前明显降低，差别有统计学意义(P1

【关键词】消异方；子宫内膜异位症；MCP—1；IL—6

子宫内膜异位症(endometriosis，EMs)是以具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆黏膜以外的身体其它部位为主要特征的疾病。近来EMs的发病率有明显增高，约有3％—10％育龄期妇女患有此病，其中25％～35％合并不孕症。其发病机制及其导致不孕的机理尚不清楚，但大量研究发现，免疫功能的异常在EMs发病过程中起重要作用。我们通过观察EMs患者中药治疗前后在位子宫内膜中MCP—1、IL—6免疫组化表达的改变，进而探讨消异方在EMs中的作用。

1　研究方法

1.1　研究对象

收集就诊于山东中医药大学第二附属医院生殖中心EMs不孕患者90例作为研究对象。将此90人随机分为空白对照组、中药治疗组和安慰剂对照组，其中空白对照组30人，中药治疗组30人，安慰剂对照组30人。入选对象均为育龄期的EMs妇女，无重要脏器疾患、内分泌疾病或恶性肿瘤，至少3个月内未接受激素及抗生素类药物的治疗。3组患者在年龄及不孕年限方面具有可比性，无统计学差异。

1.2　研究方法

1.2.1　用药方法　中药治疗组和安慰剂对照组分别使用消异方和安慰剂治疗2个月(消异方为免煎的袋装制剂，其组成为生水蛭、王不留行、三七、炮山甲、炒鸡内金、皂角刺、肉苁蓉、肉桂、菟丝子、红藤、败酱草、生薏苡仁、茯苓、醋香附；安慰剂为外形与消异方无差异的免煎袋装制剂，其内容物成分为炒焦的大米和苦味素)。空白对照组不给予任何处理。

1.2.2　标本选取　中药治疗组和安慰剂对照组均取选用治疗前和治疗后月经第2天的内膜组织，而空白对照组取月经第2天子宫内膜组织，内膜组织离体后均使用4％的多聚甲醛固定。

1.2.3　测定方法　采用免疫组化染色sP法检测在位子宫内膜中指标蛋白的表达：免疫组化试剂盒由北京中杉金桥生物技术有限公司提供的美国ZYMED公司SP系列试剂盒，全称为过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒。组织标本采用石蜡包埋，切片约4μm厚度，常规SP免疫组化，选取磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性的对照及细胞核苏木静复染。

1.3　评分标准

参考尚丽新等的染色评分标准，根据细胞的染色面积及染色强度进行综合评分。染色面积评分：无细胞染色为0分，50％细胞染色为3分；染色强度评分：不染色为0分，轻度染色为1分，中度染色为2分，强度染色3分。按照两者积分相加进行评定，积分相加为0～1分为(一)，积分相加1～2分为(+)，积分相加3—4分为(++)，积分相加5—6分为(++4-)。

2　结果

采用SPSS13.0软件包进行统计学分析。

2.1　基本资料

3组患者在年龄、不孕年限方面无统计学差异具有可比性(P1>0.05，P2>0.05)。

2.2　在位子宫内膜组织中MCP—1和IL—6蛋白的表达

中药治疗组治疗后MCP—1和IL—6在在位子宫内膜组织中的表达均低于空白对照组和安慰剂对照组(P1

2.3　三组患者治疗前后IL—6、MCP—1在在位子宫内膜中表达(免疫组化)

3　讨论

子宫内膜异位症(EMs)是临床上较为常见的妇科疾病。据报道，约有40％～50％的不孕症患者合并EMs，而EMs的发病机制尚未完全明确。诸多研究显示，免疫功能和腹腔中内环境的异常在EMs发病过程中均起到重要作用，最为明显的是巨噬细胞的数量和活性以及MCP—1、IL—6浓度和趋化活性的增加，且随病情严重程度的变化而变化。

单核细胞趋化蛋白(monocyte chemoattractant pro—tein，MCP—1)，属于趋化性细胞因子CC亚族成员之一。EMs发病早期，MCP—l的浓度及趋化活性增加最明显。Arici等发现，随着EMs病情的加重，MCP—1浓度会逐渐增加，MCP—1的浓度与EMs严重程度间有明显的正相关。白细胞介素－6(Interleukin—6，IL—6)是一种参与免疫应答调节、造血及炎症等多功能细胞因子。研究发现，在EMs患者的异位内膜细胞分泌的高水平的IL—6释放入腹腔后，腹腔液中IL—6等细胞因子浓度会明显升高。IL—6的浓度也与EMs的严重程度成正相关。

消异方以生水蛭、炒鸡内金、炮山甲、三七、皂角刺、炒王不留行、红藤等为组成，诸药合用具有活血化瘀、温经通络散结的功效。本研究发现，中药治疗组治疗后MCP—1和IL—6在在位子宫内膜组织中的表达均低于空白对照组和安慰剂对照组。由此可见，消异方能够有效降低在位子宫内膜中MCP—1和IL—6水平，抑制了异位子宫内膜的增殖、粘附和生长及对巨噬细胞的趋化作用，从而降低了子宫内膜异位症引起的盆腔粘连，改善了盆腔内环境，提高了输卵管拾卵及受精卵的运输功能。同时消异方降低了IL—6诱导的细胞毒性作用，使活动力和胚胎发育的抑制作用被降低，同时降低了细胞免疫及体液免疫的应答，从而提高了受孕的机率。综上所述，消异方通过降低EMs患者在位子宫内膜中MCP—1和IL—6含量，改善了EMs患者体内的免疫环境，减少了异位内膜的种植，缓解盆腔炎症，从而减轻了EMs患者的临床症状，提高了其生活质量及妊娠率。