荷兰铁组织培养研究

摘要 对荷兰铁组织培养方法进行研究，结果表明：荷兰铁顶芽经消毒处理后接种到MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基中，可诱导出愈伤组织和不定芽；在1/2MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基中继代培养，扩增倍数（MR值）约2.2倍；将继代培养芽丛中高3 cm以上的不定芽接种到生根培养基1/2MS+IAA 0.3 mg/L中，30 d左右生根率达98.2%；炼苗20~30 d后移栽，成活率达95%以上。

关键词 荷兰铁；组织培养；技术研究

中图分类号 Q943.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）22-0154-01

荷兰铁（Yucca elephantipes）属龙舌兰科丝兰属，又称象脚丝王、巨丝兰，原产北美，是我国近年来引入的常绿木本植物。荷兰铁在原产地株高可达10 m以上，盆栽株高一般1~2 m，茎干粗壮直立，叶无柄，革质全缘，窄披针形着生于茎端。荷兰铁劲健挺拔，素雅豪爽，极富热带情调，是近年来深得人们青睐的室内外绿化植物。由于荷兰铁采用常规扦插繁殖速度慢，难以满足花卉爱好者需求，该文提供的快繁方法国内外未见报道，但行之有效，具有一定的现实意义。

1 材料与方法

1.1 无菌外植体获取

采集荷兰铁的顶芽，在5%洗衣粉溶液中浸泡15 min后用无菌水清洗，然后再用0.1%灭菌净消毒15 min且在无菌水中清洗后，再用0.1%升汞消毒25 min，最后用无菌水清洗2~3次，接种到MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基中，获得无菌外植体[1-2]。

1.2 诱导愈伤和生芽培养基

诱导培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L。继代培养基：1/2MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（CK）、1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L、1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L。生根培养基：1/2MS+IAA 0.3 mg/L、MS+IAA 0.3 mg/L、MS+NAA 0.1 mg/L、1/2MS+NAA 0.1 mg/L、MS+IBA 0.2 mg/L、1/2MS+IBA 0.2 mg/L、MS+C（活性碳）0.3 mg/L、1/2MS+C（活性碳）0.3 mg/L、MS（CK）、1/MS。以上培养基均含蔗糖3%、卡拉胶0.9%，pH值6.0。培养条件27~29 ℃；光照10~12 h/d，光强1 000~1 500 lx。

1.3 切割方法

将增殖团块上芽高超过3 cm或粗度大于5 mm的芽挑下，不去顶直接从上往下剖心，单芽增殖；粗度小于3 mm的实心芽或芽点以每团块3~5个芽或团块大小6~8 mm为1个增殖单位，应注意粗度小于3 mm的实心芽，可从上往下剖心。分割芽团注意伤口应小，以减轻水浸状玻璃化程度。

生根培养：挑取3 cm高以上单个不定芽生根，应注意生长点的位置[3-4]。

1.4 继代培养

将已形成芽点的球茎状愈伤组织转入继代培养基中，不定芽点伸长生长，然后按增殖切割方法，不断转入继代培养基中增殖，每次继代扩增倍数约2.2倍[5-6]。

2 结果与分析

2.1 诱导愈伤组织及不定芽点

无菌的外植体在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基中，35 d左右基部开始出现愈伤组织，转代时经刺伤生长点，30 d后愈伤组织膨大成球茎并形成突起芽点，试验结果见表1。可以看出，MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L的增殖系数最高（2.5），形成球茎状愈伤组织的数量占总数的97.5%，可以作为诱导培养基。

2.2 继代培养

从表2可以看出，增殖系数随着细胞分裂素6-BA浓度的下降而降低，但在1.0 mg/L以上不明显，而1.0 mg/L以下，虽然高＞3 cm的不定芽数最多（收获率最高），但增殖系数却降到2以下。此外，6-BA的浓度对不定芽出现水浸状玻璃化并无影响。

（下转第158页）

试验发现，不定芽的玻璃化现象和基本培养的离子浓度有直接联系，将MS基本培养基改为1/2MS，水浸状玻璃化不定芽显著减少。

2.3 诱导生根

从表3可以看出，生长素对荷兰铁的生根起决定作用，IAA、IBA、NNA均能使其生根，但以NNA和IAA的生根率为高。移栽发现，生长于NAA中，根虽多，但较粗且脆，易碰断，怀疑为无效根；而在IAA和IBA中所产生的根细长，移栽后成活率也较高。此外，MS基本培养基减半对生根有明显效果，生根启动快且生根率也高。荷兰铁在1/2MS+IAA 0.3 mg/L培养基中生根率达98.2%，根系正常。

2.4 移栽

将已生根的组培苗炼苗20~30 d，待到茎干呈深绿色，再洗去培养基移栽到1/2椰糠+1/2泥炭土的基质中，25 d内注意温、湿度控制，成活率95%以上。

3 结论

（1）荷兰铁顶芽经消毒处理后接种到MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基中，可以诱导出愈伤组织和不定芽。

（2）在1/2MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基中继代培养，扩增倍数（MR值）约2.2倍。

（3）将继代培养芽丛中高3 cm以上的不定芽接种到生根培养基1/2MS+IAA 0.3 mg/L中，30 d左右生根率达98.2%。

（4）炼苗20~30 d后移栽，成活率95%以上。

4 参考文献

[1] 祖爱民，戴美学.室内名贵观叶植物栽培技艺[M].济南：山东科学技术出版社，2001.

[2] 韩德元.植物生长调节剂——原理与应用[M].北京：北京科学技术出版社，1997.

[3] 甘勇辉.荷兰铁组培快繁技术研究[J].中国园艺文摘，2010（6）：23-24.

[4] 张康强，武新华，李宪玲.水培使荷兰铁残芽长成新株[J].中国花卉盆景，2003（9）：25.

[5] 耿明清.丽格海棠叶片的组织培养[J].辽宁师专学报：自然科学版，2012，14（1）：99-101.

[6] 怀慧明，林平，贾忠奎.林下经济植物君白菊组织培养的研究[J].林产工业，2012，39（3）：60-63，65.