5―羟色胺转运体与肠易激综合征患者躯体心理症状的相关性分析

[摘要] 目的 研究5-羟色胺转运体（SERT）与肠易激综合征（IBS）患者躯体和心理症状是否存在相关性。 方法 选取2010年1月～2012年12月佛山市第一人民医院IBS患者154例为病例组，并按不同症状分为3个亚组（C-IBS组65例、D-IBS组47例、A-IBS组42例），选择同期健康志愿者154名作为对照组。应用心理症状自评量表（SCL-90）来评价研究对象的心理状态；采用实时定量PCR法测定SERT信使RNA（mRNA）表达量，Western印迹法测定SERT蛋白表达水平。 结果 SERT蛋白表达量：病例组（0.81±0.45）和对照组（0.79±0.47）比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。SERT mRNA转录表达量：病例组（0.46±0.25）和对照组（0.42±0.28）比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。C-IBS组SERT蛋白表达量（0.98±0.51）及mRNA表达量（0.58±0.23）均显著高于D-IBS组[（0.71±0.40）、（0.41±0.25）]、A-IBS组[（0.67±0.35）、（0.37±0.23）]和对照组[（0.79±0.47）、（0.42±0.28）]，差异均有统计学意义（P < 0.05）。SERT蛋白表达量与躯体化症状（r = -0.681，P < 0.05）、敌意因子（r = -0.663，P < 0.05）、焦虑因子（r = -0.711，P < 0.05）和抑郁因子（r = -0.812，P < 0.05）呈负相关，与强迫症状、恐惧、偏执、人际关系敏感和精神病因子均无明显相关性（P > 0.05）。 结论 IBS患者SERT的mRNA及蛋白量表达水平与患者的躯体和心理症状密切相关，越低则越容易出现躯体化症状、焦虑等情绪表现。

[关键词] 5-羟色胺转运体；肠易激综合征；转运蛋白质；躯体化症状；心理症状

[中图分类号] R574.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）02（c）-0018-04

Correlation between expression of SERT and somatic and psychological symptoms of irritable bowel syndrome

LI Kejing1 QIU Xiaolei1 YUAN Yaozong2

1.Department of Special Medical Center， the First People's Hospital of Foshan City， Guangdong Province， Foshan 528000， China； 2.Department of Special Medical Center， the Affiliated Ruijin Hospital of Shanghai Jiaotong University School of Medicine， Shanghai 200025， China

[Abstract] Objective To explore the correlation between the expression of SERT and somatic and psychological symptoms of irritable bowel syndrome （IBS）. Methods 154 cases of IBS patients in the First People's Hospital of Foshan City from January 2010 to December 2012 were selected as disease group and divided into three groups （C-IBS group 65 cases， D-IBS group 47 cases， A-IBS group 42 cases） according to different symptom. 154 healthy volunteers were selected as control group. The psychological symptom of study objects were evaluated by SLC-90. The expression of SERT at mRNA level was tested by real-time potymerase chain reaction （PCR） and the expression of SERT at protein level was detected with Western blotting. Results The expressions of SERT at protein： disease group （0.81±0.45） and control group （0.79±0.47） were compared， the difference was not statistically significant （P > 0.05）. The expressions of mRNA： disease group （0.46±0.25） and the control group （0.42±0.28） were compared， the difference was not statistically significant （P > 0.05）. The expressions of SERT at protein （0.98±0.51） and mRNA （0.58±0.23） in C-IBS group were significantly higher than those in D-IBS group [（0.71±0.40）， （0.41±0.25）]， A-IBS group [（0.67±0.35）， （0.37±0.23）] and control group [（0.79±0.47）， （0.42±0.28）]， the differences were statistically significant （P < 0.05）. There were negative correlations between the expression of SERT at protein level and somatic symptoms （r = -0.681， P < 0.05）， hostility factor （r = -0.663， P < 0.05）， anxiety factor （r = -0.711， P < 0.05） and depression factor （r = -0.812， P < 0.05）， however there was no correlation between the expression of SERT at protein level and obsessive-compulsive symptoms， terror， paranoia， interpersonal sensitivity and psychosis factors （P > 0.05）. Conclusion There is significant correlation between the expressions of SERT at mRNA and protein level and the somatic and psychological symptoms of IBS patients. It shows that the lower level of SERT expressions， the more emotional performance of somatization， anxiety and so on.

[Key words] SERT； Irritable bowel syndrome； Transport proteinst； Somatic symptoms； Psychological symptoms

肠易激综合征（irritable bowel syndrome，IBS）是一种常见的慢性胃肠功能紊乱性疾病，至今为止病因和发病机制尚未明确，根据症状不同分为便秘型（constipationirritable bowelsyndrome，C-IBS）、腹泻型（diarrhea irritable bowel syndrome，D-IBS）和腹泻便秘交替型（alternating diarrhea andconstipationirritable bowelsyndrome，A-IBS）[1]。

近年研究发现，5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）及5-羟色胺转运体（seroto-nin transporter，SERT）在肠道动力紊乱、内脏感觉异常等机制中发挥着重要作用[2]，IBS患者中有40%～60%都伴焦虑、抑郁等心理障碍[3]。本研究正是为了探讨SERT异常与患者躯体和心理症状之间的关系，以期对IBS治疗和药物的开发提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年1月～2012年12月佛山市第一人民医院IBS患者154例为病例组，其中男59例，女95例，平均年龄（41.9±11.9）岁，根据临床症状分为便秘主导型（C-IBS）组、腹泻主导型（D-IBS）组和腹泻便秘交替型（A-IBS）组3个亚组。其中C-IBS组65例，平均年龄（40.1±8.7）岁；D-IBS组47例，平均年龄（42.2±9.3）岁；A-IBS组42例，平均年龄（39.8±9.4）岁。对照组为同时间的健康志愿者154名，平均年龄（41.1±9.7）岁。本研究实验前已经获得医院伦理委员会通过，所有研究对象都预先知情，并且签署了知情同意书。所有研究对象都经过详细查问病史，进行全面体格检查和实验室检查，排除器质性疾病、精神病及药物滥用者，病例组必须符合罗马Ⅲ分型诊断标准。两组一般资料比较，差异均无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 D-IBS组、C-IBS组和A-IBS组入选标准

①每周排便3次；③块状或硬便；④稀烂便或水样便；⑤排便费力；⑥排便急迫感。

D-IBS组：符合上述症状②、④、⑥项之1项或以上，而无①、③、⑤项；或有②、④、⑥项之2项或以上，可伴①、⑤项之中1项，但无③项。

C-IBS组：符合上述症状①、③、⑤项之1项或以上，而无②、④、⑥项；或有①、③、⑤项之2项或以上，可伴②、④、⑥之中1项。

A-IBS组：上述症状交替出现。

1.3 方法

1.3.1 心理症状调查

采用症状自评量表（SCL-90）[4]，研究对象均独立完成。SCL-90量表共有90个项目，采用10个因子分别反映10个方面的心理症状情况，即躯体化、强迫症状、人际关系敏感、抑郁、焦虑、敌对、恐怖、偏执和精神病性，未能归入上述因子将之归为因子10“其他”。SCL-90的每一个项目均采用5级评分制，依据研究对象自觉有无该项症状及程度来得分：没有为0分；很轻为1分；中度为2分；偏重为3分；严重为4分。“轻、中、重”由被试者自己体会，不必做硬性规定。评定的时间，是“现在”或者是“最近1个星期”的实际感觉。得分越高，代表与相关因素关系越密切。

1.3.2 实验部分

1.3.2.1 标本采集 分别在乙状结肠、直肠与乙状结肠交界处和直肠处，用结肠镜钳取3块肠黏膜组织，标本约0.3 cm×0.2 cm×0.3 cm，保存在液氮中[5]。

1.3.2.2 PCR检测 用TRIzol方法来提取肠黏膜组织总的RNA，并反转录成cDNA，反应引物由上海英骏生物技术公司负责合成。PCR反应总体系为10 μL，模板cDNA 1 μL，dd H2O 3.6 μL，SYBRMaster mix 5 μL，10 mmol/L上下游引物各0.2 μL；反应的条件设定为95℃ 5 min，94℃ 10 s，59℃ 10 s，72℃ 10 s，循环40次，温度的变化速率设为20℃/s；之后以95℃ 10 s，65℃ 15 s，以0.1℃/s速率逐渐使温度升至95℃ 10 s。持续监测并记录荧光信号的变化，对熔解曲线进行分析，以GAPDH为内参照，作相对定量的分析，用2-Ct来表示样本SERT基因相对于内参照表达量（Ct=Ct目的基因-Ct内参照）[6]。

1.3.2.3 Western的印迹分析法 提取结肠黏膜标本的组织蛋白，行SDS-PAGE，转膜，以5%脱脂奶粉封闭，并加入ab36127羊抗SERT（1∶1000），然后于4℃条件下摇床过夜，TBST漂洗，加辣根酶标记抗山羊lgG（1∶5000）后温育1 h，以TBST漂洗，DAB显色，当出现目标条带后立即终止反应。最后用图像分析仪测量各样品显色的灰度，利用灰度值进行分析[7]。

1.4 统计学方法

采用统计软件SPSS 19.0对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两独立样本的计量资料采用t检验；多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。相关性关系采用Pearson法分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各型IBS患者SERT mRNA、蛋白表达量情况

SERT蛋白表达量：病例组（0.81±0.45）和对照组（0.79±0.47）比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。SERT mRNA转录表达量：病例组（0.46±0.25）和对照组（0.42±0.28）比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。C-IBS组SERT蛋白表达量（0.98±0.51）及mRNA 表达量（0.58±0.23）均显著高于D-IBS组[（0.71±0.40），（0.41±0.25）]、A-IBS组[（0.67±0.35），（0.37±0.23）]和对照组[（0.79±0.47），（0.42±0.28）]，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

表1 各组别SERT mRNA表达量及SERT蛋白表达量比较（x±s）

注：与C-IBS组比较，*P < 0.05；C-IBS组：便秘主导型组；D-IBS组：腹泻主导型组；A-IBS组：腹泻便秘交替型组；SERT：5-羟色胺转运体；IBS：肠易激综合征；mRNA：信使RNA

2.2 SERT蛋白表达量与IBS患者心理症状相关性分析

2.2.1 IBS患者自评量表各项因子平均得分情况

IBS病例组与健康对照组在躯体化症状因子、抑郁因子、焦虑因子和敌意因子影响方面差异有统计学意义（P < 0.05）；在强迫症状因子、人际关系敏感因子、恐惧因子、偏执因子和精神病因子影响方面差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.2.2 IBS患者SERT蛋白表达量与SCL-90分值相关性分析

SERT蛋白表达量与躯体化症状、抑郁因子、焦虑因子和敌意因子均有相关性（P < 0.05），且呈负相关；与强迫症状、人际关系敏感、恐惧、偏执和精神病因子均不存在相关性（P > 0.05）。见表3。

3 讨论

IBS症状持续或反复发作，给人们工作、生活带来了诸多不便和沉重的经济负担。自从Sikander等[8]用原位杂交法证实编码SERT mRNA在小鼠肠道有表达以来，对SERT的研究逐年增多。

5-HT是重要的神经递质和信号分子，在IBS发病中介导许多效应[9]，调控着胃肠运动、分泌、吸收及感觉等复杂功能，5-HT对胃肠道作用的终止有赖于SERT。SERT通过摄取神经突触间隙5-HT，对其起灭活作用[10]。本研究中，C-IBS组SERT mRNA和蛋白表达量较高，而D-IBS组及A-IBS组均较低，由此推测，便秘可能是由于SERT表达水平高，将未完全发挥效应的5-HT提前灭活，使肠道蠕动反射和分泌反射减弱、肠道对粪便水分重吸收增加所致，而腹泻则正好相反，交替组则可能与5-HT受体脱敏引起暂时性便秘有关[11]。

本研究结果显示，SERT蛋白表达量较低患者更易出现负面情绪，而Eugenio等[12]亦发现，IBS患者中有50%～90%都存在情感障碍相关疾病，说明IBS发病与心理因素密切相关。由此推测，可能是由于SERT蛋白表达水平低，5-HT不能被及时灭活，积聚在突触间隙，因而能够发挥生理效应的5-HT不断减少，最后导致了心理症状的发生[13]。

综上所述，SERT表达水平的高低直接影响着IBS患者的躯体和心理状况，这提示，在治疗IBS患者时要兼顾对患者社会心理的干预；同时也显示出了研发SERT相关制剂用于治疗IBS患者的切实可行性和乐观前景。

[参考文献]

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[5] 程静.5-羟色胺转运体蛋白表达与肠易激综合症[D].天津：天津医科大学，2010.

[6] 常媛媛.5-羟色胺转运体基因启动子区多态性与肠易激综合征[D].天津：天津医科大学，2011.

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[10] 朱学文.丁螺环酮治疗伴随抑郁症焦虑症19例疗效观察[J].当代医学，2010，27（7）：23-26.

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[12] Eugenio MD，Jun SE，Cain KC，et al. Comprehensive self-management reduces the negative impact of irritable bowel syndrome symptoms on sexual functioning [J]. Dig Dis Sci，2012，57（6）：1636-1646.

[13] 尚杰，陈霞，王玉龙.大肠癌组织中Survivin表达与血管生成、细胞增殖的关系[J].实用癌症杂志，2009，26（5）：22-25.

（收稿日期：2013-06-21 本文编辑：李继翔）