千金子水煎液中4种有效成分含量测定

河南中医学院，呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心，河南 郑州 450008

摘要：目的 测定千金子水煎液中4种有效成分的含量，为千金子临床应用入煎剂提供依据。方法 采用已建立的一测多评法测定千金子水煎液中3种二萜醇酯类成分千金子甾醇、千金子素L2、千金子素L3的含量，采用高效液相色谱法测定千金子水煎液中香豆素类成分秦皮乙素的含量。结果 千金子打碎水煎液中千金子甾醇、千金子素L2、千金子素L3含量分别0.015 9%、0.005 9%、0.024 1%，千金子整个入煎剂未检出以上3种成分；千金子打碎水煎液中秦皮乙素含量（0.693 6%）>千金子整个水煎液中秦皮乙素含量（0.288 2%）。结论 千金子中二萜醇酯类成分水煎溶出效果不佳，临床使用千金子泻下利尿时不宜水煎；千金子打碎水煎时秦皮乙素溶出效果较好，临床用于抗菌消炎可入煎剂。

关键词：千金子；水煎液；二萜醇酯；香豆素

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.07.025

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）07-0089-04

Content Determination of Four Effective Constituents in Euphorbiae Semen Decoction WU Rui-huan， ZHANG Zhen-ling， WANG Rui-sheng， SHEN Sha-sha， LIU Xiao-ming （Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province， Henan University of Chinese Medicine， Zhengzhou 450008， China）

Abstract：Objective To determine the contents of four effective constituents in Euphorbiae Semen decoction；To provide evidence for Euphorbiae Semen decoction into clinical application. Methods Established quantitative analysis multi-components by single marker method was used to determine the contents of diterpenoids constituents， such as euphorbia storoid， euphorbia factor L2， and euphorbia factor L3. HPLC method was used to determine the contents of aesculetin. Results Contents of euphorbia storoid， euphorbia factor L2， and euphorbia factor L3 in smashed Euphorbiae Semen decoction were 0.015 9%， 0.005 9% and 0.024 1%， respectively. However， the contents of the above three constituents could not be detected in whole Euphorbiae Semen decoction. The content of aesculetin （0.693 6%） in smashed Euphorbiae Semen decoction was more than that in whole Euphorbiae Semen decoction （0.288 2%）. Conclusion Decoction digestion effect of diterpenoids constituents in Euphorbiae Semen decoction is not good. Decocting with water is not suitable for the clinical application of Euphorbiae Semen for purgation and diuresis. Aesculetin in smashed Euphorbiae Semen decoction has good decoction digestion effect， in which clinical use for antisepsis and anti-inflammation is effective.

Key words：Euphorbiae Semen；decoction；diterpenoids；coumarin

千金子为大戟科植物续随子Euphorbia Lathyris L.的干燥成熟种子，有毒，具有逐水消肿、破血散结功效，用于二便不通、水肿、痰饮、积滞胀满、血瘀经闭等症[1]。千金子种子中含有48%～50%的脂肪油[2]，为其主要有效成分，同时又是其主要毒性成

基金项目：中医药行业科研专项（201107008）

通讯作者：张振凌，E-mail：

分。现代研究表明，千金子除含有大量脂肪油外，还含有香豆素类[3]、二萜醇酯类[4]等化学成分。2010年版《中华人民共和国药典》规定千金子生品“去壳，去油用，多入丸散服。外用适量，捣烂敷患处”，千金子霜“多入丸散服。外用适量”，均未提及水煎使用。然而，目前临床上有千金子生品入煎剂服用，针对此用药方法尚缺乏试验依据。本研究采用已经建立的“一测多评法”[5]和高效液相色谱法（HPLC）测定千金子水煎液中4种有效成分的含量，阐释千金子入煎剂服用的合理性，为临床用药提供依据。

1 仪器与试药

岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪，PDA检测器；岛津LC-20AT高效液相色谱仪；METTLER TOLEDO- XS205十万分之一天平（瑞士梅特勒托利多公司）；BS210S型万分之一电子天平（北京赛多斯有限责任公司）；KQ-250DV型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HH-6数显恒温水浴锅（上海比郎仪器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；SZ-93自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）。

千金子药材购自安徽亳州，经河南中医学院陈随清教授鉴定为大戟科植物续随子Euporbia lathyris L.的干燥成熟种子。千金子素甾醇对照品（中国食品药品检定研究院，批号111789- 200901，纯度99.3%），秦皮乙素对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号20120515，纯度≥98%），正己烷（天津市科密欧化学试剂有限公司，色谱纯），乙酸乙酯（西陇化工股份有限公司，色谱纯），乙腈（Dikma Technologies Inc.，色谱纯），甲醇（天津市四友精细化学品有限公司，色谱纯），甲醇（天津市登科化学试剂有限公司，分析纯），冰醋酸（天津市致远化学试剂有限公司，分析纯），石油醚（天津市富宇精细化工有限公司，分析纯），双蒸水（自制）。

2 方法与结果

2.1 水煎液的制备

称取净千金子种子4份，每份约10 g，精密称定，分为2组，一组打碎（碎1、2号），一组不打碎（整1、2号），各2份，置于烧杯中，加入10倍量蒸馏水，浸泡30 min，加热，保持微沸30 min，过滤，滤渣再加8倍量蒸馏水，加热，保持微沸20 min，过滤，合并2次滤液，冷却后定容于250 mL容量瓶中，即得。

2.2 3种二萜醇酯类成分含量测定

2.2.1 色谱条件 Agilent Zorbax-SIL色谱柱（5 μm， 4.6 mm×250 mm），流动相为正己烷-乙酸乙酯-乙腈（83.5∶14∶2.5），柱温30 ℃，检测波长275 nm，流速1.0 mL/min，进样量5 μL，检测时间20 min。色谱图见图1。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取千金子甾醇对照品0.003 41 g，置100 mL容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容至刻度，摇匀，即得0.034 1 mg/mL对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密量取千金子水煎液25 mL，置于蒸发皿中，水浴蒸干，用乙酸乙酯溶解，定容于5 mL容量瓶中，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

A

B

C

注：A.混合对照品；B.打碎入煎剂；C.整个入煎剂；

1.千金子素L3；2.千金子素L2；3.千金子甾醇

图1 千金子水煎液中3种二萜醇酯类成分HPLC图

2.2.4 线性关系考察 精密吸取千金子甾醇对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 μL进样，在“2.2.1”项色谱条件下测定，以峰面积为纵坐标，千金子甾醇的量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程Y=1 421 507.331 4X+3484.400 0，r2=0.999 8，千金子甾醇在0.034 1～0.170 5 μg范围内线性关系良好。

2.2.5 含量测定 按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，放入进样瓶中，按“2.2.1”项下色谱条件测定，采用外标法，以峰面积计算千金子甾醇含量，根据已建立的3种二萜醇酯类成分的“一测多评”方法[5]， f千金子素L2/千金子甾醇=1.26，f千金子素L3/千金子甾醇=0.9，分别计算千金子水煎液中千金子素L2和千金子素L3的含量，结果见表1。千金子（打碎）水煎液中千金子甾醇、千金子素L2、千金子素L3含量分别为0.015 9%、0.005 9%、0.024 1%，千金子整个入煎剂未检出以上3种成分。

2.3 秦皮乙素含量测定

2.3.1 色谱条件 ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%冰醋酸（18∶82），流速1.0 mL/min，检测波长340 nm，柱温40 ℃，进样量10 μL。色谱图见图2。

表1 千金子水煎液中3种二萜醇酯类成分含量测定结果

编号 称样量（g） 千金子甾醇 千金子素L2 千金子素L3

含量（%） 平均含量（%） 含量（%） 平均含量（%） 含量（%） 平均含量（%）

碎1号 10.024 2 0.016 096 0.005 961 0.0244 05

10.024 2 0.015 614 0.015 9 0.005 516 0.005 9 0.0240 01 0.024 1

碎2号 10.001 0 0.015 980 0.006 108 0.0239 24

10.001 0 0.016 007 0.005 832 0.0241 62

整1号 10.050 8 - - -

10.050 8 - - -

整2号 10.022 8 - - -

10.022 8 - - -

注：“-”为未检出

A

B

C

注：A.对照品；B.打碎入煎剂；C.整个入煎剂

图2 千金子水煎液中秦皮乙素HPLC图

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称定秦皮乙素对照品0.000 57 g，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，制成57 ?g/mL的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备 精密量取水煎液5 mL，置于蒸发皿中，水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于25 mL容量瓶中，0.45 ?m微孔滤膜过滤，即得。

2.3.4 线性关系考察 精密吸取57 ?g/mL秦皮乙素对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12、14 ?L进样，在“2.3.1”项色谱条件下测定，以峰面积为纵坐标，秦皮乙素的量（?g）为横坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程Y=1 896 653.714 8X-11922.302 4，r2=0.999 5，秦皮乙素在0.057～0.798 ?g范围内线性关系良好。

2.3.5 含量测定 按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，放入进样瓶中，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算千金子水煎液中秦皮乙素含量，结果见表2。千金子（打碎）水煎液中秦皮乙素含量为0.288 2%，千金子（整个）水煎液中秦皮乙素含量为0.693 6%。

表2 千金子水煎液中秦皮乙素含量测定结果

编号 称样量（g） 峰面积 含量（%） 平均含量（%）

碎1号 10.024 8 1 070 736.8 0.711 8

10.024 8 1 027 418.7 0.683 3 0.693 6

碎2号 10.041 5 1 060 884.3 0.704 1

10.041 5 1 016 910.5 0.675 3

整1号 10.007 3 408 466.6 0.276 9

10.007 3 436 210.0 0.295 1 0.288 2

整2号 10.037 1 423 191.4 0.285 7

10.037 1 437 366.8 0.295 0

3 讨论

本研究结果表明，4种有效成分含量千金子打碎入煎剂>千金子整个入煎剂，二萜醇酯类成分煎出较少，秦皮乙素煎出较多。千金子中含有的3种二萜醇酯类成分极性较小，用水煎煮难以溶出，所以千金子（打碎）水煎液中3种二萜醇酯类成分含量较低，千金子整个入煎剂未检出；千金子中含有的秦皮乙素为简单香豆素类成分，能部分溶于沸水中，因此，千金子水煎液中秦皮乙素含量较高。

千金子中二萜醇酯类成分主要为千金子甾醇、千金子素L2、千金子素L3，其中千金子甾醇对胃肠道有强烈刺激作用，可产生峻泻作用，千金子素L3也具有一定的提高小鼠小肠推进率的作用[2，6]。由于这3种成分水煎溶出不佳，因此，临床使用千金子泻下利尿时不