腧穴组方对胃粘膜损伤大鼠胃粘膜保护作用的研究

［摘　要］　目的：探讨腧穴不同组方对急性胃粘膜损伤大鼠胃粘膜的保护作用。方法：以乙醇造成大鼠胃粘膜损伤后，动态观察针刺"足三里"不同组穴对胃粘膜损伤模型血清及胃粘膜组织中NO和ET含量的影响。结果：NO/ET的平衡与胃粘膜的保护机制有关。电针"足三里"等穴对胃粘膜具有保护作用，尤以"足三里"＋"内关"＋"中脘"对胃粘膜保护作用最强。

［主题词］　胃粘膜/针灸效应；穴，足三里；配穴法；一氧化氮/分析；内皮缩血管肽类/分析

StudyonProtectiveActionofPointCombinationsonGastricMucosaintheRatof

InjuryofGastricMucosa

JiLaixi,YanPing,HaoChongyao,etal.

(AcupunctureandMassageDepartmentofShanxiTCMCollege,Taiyuan030024,China)

［Abstract］　Purpose

Tostudyprotectiveactionofdifferentpointcombinationsongastricmucosai

ntheratofacuteinjuryofgastricmucosa.Methods

EffectsofacupunctureofdifferentcombinationsofZusanli(ST36)

withotherpointsonnitricoxide(NO)andendothelin(ET)

contentsinbloodandgastricmucosaweredynamicallyinvestigatedintheratw

ithinjuryofgastricmucosainducedbyalcohol.Results

No/ETratioisrelatedwithprotectivemechanismsofgastricmucosa.Electroa

cupunctureatZusanli(ST36)

andotherpointshasprotectiveactionongastricmucosa.Particularlly,Comb

inationofZusanli(ST36),Neiguan(PC6)andZhongwan(CV12)

hasthestrongestprotectiveactionongastricmucosa.

［Keywords］　GastricMucosa/acupeff;Point，ST36(Zusanli)；

PointCombination;NitricOxide/anal;Endothelins/anal

针刺对胃粘膜有保护作用，文献及实验研究以单穴足三里居多，而对穴组的研究甚少。多数研究表明，对胃粘膜的保护作用，其作用机理与血浆、组织中的一氧化氮(NO)、内皮素(ET)有很大关系［1］，本研究即观察针刺不同穴组对胃粘膜损伤模型血清及组织中NO，ET含量的变化，以期观察足三里不同配穴对胃粘膜的保护作用。

1　材料与方法

1.1　动物与分组

Wistar大鼠72只，雌雄不拘，体重180～200g，由山西医科大学动物实验中心提供，随机分为6组：正常对照组，模型组，"足三里"组、"足三里"＋"内关"组，"足三里"＋"中脘"组，"足三里"＋"内关"＋"中脘"组。每组又分为即刻组、8h组，每小组6只。

1.2　造模与处理方法

以上各组动物于实验前24h禁食，自由饮水，实验前2h禁水。

正常对照组：取生理盐水1ml，用鼠胃饲器灌入大鼠胃中，2h后再灌生理盐水1ml，70min后用1%戊巴比妥钠按40～50mg/kg体重的剂量将动物麻醉，随后取材测定各项指标。

模型组：开始以生理盐水1ml灌胃，2h后再灌入无水乙醇1ml，70min后麻醉取材检测。

"足三里"组，"足三里"＋"内关"组、"足三里"＋"中脘"组、"足三里"＋"内关"＋"中脘"4组动物操作步骤同模型组，只是在无水乙醇1ml灌胃60min后，电针10min。之后即刻组随即麻醉取材检测，8h组在8h后麻醉取材检测。

1.3　针刺方法

取穴："足三里""内关""中脘"穴均根据全国协编教材《实验针灸学》［2］大鼠穴位定位方法确定。

仪器及刺激方法：用G91A型电针仪(天津电子仪器厂产)，"足三里"直刺6～7mm，分别连于电针仪正负极。"内关"直刺穿皮达筋间，每侧选第3趾为无关极连正极，负极接穴；"中脘"直刺2mm，腹股沟处为正极，穴位接负极。

电针参数选择：频率30Hz，强度10～20N，时间10min。

1.4　检测指标

(1)胃粘膜损伤指数(LI)

颈椎脱臼处死大鼠，切下全胃，沿胃大弯侧剪开，展开全胃，用生理盐水冲洗胃粘膜，按Guth标准［3］计算胃粘膜损伤指数，损伤面积以mm2表示。正常胃粘膜计0分，点状损伤计1分，病损＜1mm2计2分，1～2mm2计3分，依此类推，损伤面积＞2mm2者，计分加倍。

(2)NO的测定

①血清NO的测定

各组动物在规定时间于大鼠眶后静脉取血2ml，离心取血清0.1ml，以北京瑞利分析仪器公司VIS7220型可见分光光度计，北京晶美生物工程有限公司提供的试剂盒进行测定。

②组织NO的测定

规定时间处死动物，切下全胃，沿胃大弯侧剪开，用生理盐水将胃粘膜冲洗干净，于胃窦部剪取胃组织200～300mg，以每100mg组织加0.9ml生理盐水，研磨，4000r/min离心5min，取上清液0.1ml。应用北京岳泰科技公司提供的试剂盒，于VIS7220型可见分光光度计上读取OD值，通过计算获得结果。

(3)组织中ET的测定

规定时间处死动物，切下全胃，沿胃大弯侧剪开，用生理盐水将胃粘膜冲洗干净，于胃窦部剪取胃组织，液氮速冻后收集于20℃冰柜中。检测时，组织块自然解冻后，生理盐水冲洗，滤纸吸干，微量天平称湿重。组织匀浆器内匀浆，6000r/min离心5min，吸取上清液，应用FMJ182放免慵剖 (中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂生产)测定。试剂盒由总医院科技开发中心放免所提供。

2　结果与分析

2.1　足三里不同配穴对胃粘膜损伤指数的影响(见表1)

表1　足三里不同配穴对乙醇所致急性胃粘膜损伤指数(LI)的影响

注：与模型组比，P＜0.01；与"足三里"＋"中脘"＋"内关"组比，P＜0.05；与即刻组比，P＜0.01

表1显示，造模后大鼠胃粘膜损伤明显，且8h后损伤进一步加重，说明乙醇灌注引起的急性胃粘膜损伤会持续一段时间。各针刺处理组与模型组比，LI值均不同程度地回降(P＜0.01)，其中前3个针刺组的各8h组与即刻组比较，回降更为明显，经统计处理，差异有非常显著性意义(P＜0.01)，说明针刺这3组穴对胃粘膜损伤有保护作用，且这种作用8h后更为突出；而"足三里"＋"中脘"＋"内关"组LI值降幅更大，且即刻和8h组效应一致，说明针刺该组穴即刻即能起到良好效应，并能维持一段时间。各针刺处理组间比较，又以"足三里"＋"中脘"＋"内关"组效果最好，无论即刻还是8h后效果均较其它针刺组显著(P＜0.05)。

2.2　不同配穴对模型血清及组织中NO的影响(见表2)

表2　不同配穴对急性胃粘膜损伤血清及组织NO的影响

表2显示，造模后，动物血清及组织中NO含量显著低于正常对照组(P＜0.01)，8h更趋降低，说明乙醇对胃粘膜损伤具有一段时间的持续性。针刺后，与模型组相比各针刺处理组的NO值均有不同程度的回升，但前3针刺组即刻变化不大，只在8h后才有较为明显的改善(P＜0.01)，但仍未接近正常对照组(P＜0.01)。而"足三里"＋"中脘"＋"内关"组无论即刻还是8h后NO值的回升显著优于前3针刺组(P＜0.05)，并接近正常对照组，说明该组效果最好。

2.3　不同配穴对模型组织中ET含量的影响(表3)

表3　不同配穴对急性胃粘膜损伤组织ET含量的影响

注：与正常组比，P＜0.01；与模型组比，P＜0.05，P＜0.01；与即刻组比，P＜0.01；与"足三里"＋"中脘"＋"内关"组比，P＜0.05，P＜0.01

表3显示，造模后，动物胃粘膜组织中ET含量显著高于正常组，且8h后更为严重。各针刺处理组与模型组比，ET值均不同程度地回降(P＜0.05，P＜0.01)，说明针刺效应肯定；但前3针刺组仍未回降至正常水平(P＜0.01)。各针刺处理组间比较，以"足三里"＋"内关"＋"中脘"组效应最好，无论即刻还是8hET值的回降显著优于前3针刺组(P＜0.05，P＜0.01)，并均回降到正常水平，与正常组比，差异无显著意义(P>0.05)。

3　讨论

3.1　NO对胃粘膜的保护作用

NO是由一氧化氮合酶(NOS)催化并以L精氨酸(LArg)为底物生成的一种重要的舒血管物质，从1989年发现NO对酒精引起的胃粘膜损伤有保护作用以来，研究不断深入。业已证明［1］，①胃粘膜具有较高水平的NOS活性；②应用小剂量NO供体以提供外源性NO后，可以减轻或预防许多实验性急性胃粘膜病变，并加速乙醇诱发的大鼠慢性胃溃疡病的愈合；③抑制内源性NO的生成则加重胃粘膜损伤；④适应性细胞保护作用和许多药物如硫酸铝、抗酸剂等的胃保护作用可能通过NO介导，阻断NO生成可部分消除其保护作用。NO对胃粘膜的保护作用可能与下列因素有关：①增加胃粘膜血流量；②减轻了损伤胃粘膜内中性粒细胞的浸润；③增加胃粘液层的厚度；④促进损伤坏死区域血管再生。最近的研究也提示：①胃粘膜和粘膜下层的传入神经释放CGRP能刺激NO的生成和释放，故NO可能是传入神经胃保护作用的最终介质；②NO具有拮抗氧自由基从而保护粘膜细胞的作用［1，4］。故在表现形式上，NO的胃粘膜保护作用主要体现在维持粘膜完整性，改善粘膜微循环，松弛血管平滑肌，增加粘膜血流，抑制血小板、白细胞与内皮细胞的粘附、聚集及血栓形成，同时抑制骨髓过氧化物酶活性，保持上皮屏障及促进上皮修复。

3.2　ET在胃粘膜损伤中的作用

ET是一类有21个氨基酸残基的多肽，具有极强的缩血管特性，在胃粘膜损伤过程中起重要作用［5］。研究表明，ET在胃粘膜损伤中的作用主要表现在：①降低胃粘膜的血流量；②减弱胃粘膜的保护机制，并有很强致溃疡性；

③可使乙醇诱导的胃粘膜损伤敏感性提高，其作用强于组织胺、白三烯(LT)、自由基等［6］。其作用机制可能为：①通过缩血管和增加渗出，从而降低胃粘膜的血流量；②通过调节血管平滑肌张力，影响胃壁平滑肌收缩，增强胃运动［7］。

NO和ET是体内一对相互拮抗的血管活性物质，而胃粘膜具有丰富的毛细血管，胃粘膜血管张力的最适调整、胃粘膜微循环的良好血流对于保护胃粘膜屏障、维持胃粘膜完整性具有重要作用。已有的研究已证实，在胃病大鼠模型中，存在胃粘膜NO含量增多，ET含量减少，内源性NO/ET失衡的现象。也有研究提示NO/ET失衡参与门静脉高压胃病的病理过程［1］。

3.3　足三里不同配穴组方可不同程度地保护胃粘膜损伤

本实验结果表明，乙醇灌胃后，造成胃粘膜急性损伤，肉眼观察粘膜损伤指数提高，同时NO含量减少，而ET含量增高，这与上述有关文献报道一致。通过电针"足三里"不同穴组，使胃粘膜损伤程度得到不同程度的改善，LI值逐渐回降，同时NO含量升高，ET含量减少。这些指标甚至在针刺即刻就有明显改善，这为针灸临床治疗胃病见效快、效果好提供了实验依据。在足三里的不同配穴中，又以"足三里"＋"中脘"＋"内关"组的效应最强。

"足三里"是足阳明胃经的合穴；"中脘"属任脉，为胃之募穴和腑之会穴；内关属手厥阴心包经，为八脉交会穴，阴维脉气所会。根据经络理论，这三穴均为治疗胃病要穴。但二穴或三穴配合治疗效应有何差异，能否确定一个治疗胃病的基本处方，迄今尚无定论。本实验对此进行了比较，结果显示将此三穴配合使用效果最好，优于其中任何两穴或单穴使用。针灸处方的组成原则乃局部选穴、循经远道取穴、特殊取穴，而中脘恰居胃脘部乃局部取穴，足三里属循经远取，内关为特殊取穴。三者配合完全符合处方的组成原则。提示今后教学、临床中可将此三穴作为治疗胃病的基本处方。由此可作系列病种的基本处方研究，这将对完善"针灸处方学"意义重大。

4　参考文献

1　张国锋.一氧化氮、内皮素与胃粘膜损伤.胃肠病学和肝病学杂志，1999；8(4)：293

2　林文注主编.实验针灸学.上海：上海科技出版社，1999；288～289

3　GuthPH,AuresD,PaulsenG.Topicalas.Pirin PlusHcl GastricLesion intheRat.Cytoprtective Effectof Prostag landin,Cimetidineand Probanthine.Gastr ocntcrology,1979；76(1):88

4　ChenRY,GuthPH.Interaction of EndogenousNitricOxideandCGRPinSensory Neuroninduced Gastric Vasodil atation.Am JPhysiol,1995;268(5Ptl):G791

5　崔忠敏.一氧化氮胃粘膜细胞保护作用机制研究进展.国外医学・消化系疾病分册，2000；20(1)：3

6　YangisawaM,KuriharaH,KimuraS,etal.A NovelPotent Vasocontricto Peptide Producedby Vascular Endothelia Cells.Nature,1988;337(31):411

7　孙绍金.内皮素对胃肠损伤作用机制的研究进展.新消化病学杂志，1996；4(4)：224

(收稿日期：20011025，齐淑兰发稿)