HPLC法测定平胃散中聚乙炔类成分

[摘要] 目的 应用RP-HPLC方法，对平胃散中苍术素、（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰等两种聚乙炔类成分同时进行含量测定。 方法 反相高效液相色谱法，色谱柱promosll-C18（4.6mm×250mm，5μm），柱温25℃，检测波长：340nm，流速：1.0mL/min，流动相：乙腈-水，梯度洗脱。 结果 苍术素在0.052～248.5mg/L（r=0.9997）呈良好线性关系，（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰在0.052～251.0mg/L （r=0.9996）呈良好线性关系，回收率分别为99.2%和99.3%，RSD为0.72%和0.64%（n=6）。 结论 建立一种同时测定平胃散中两种聚乙炔类成分的质量评价方法，其结果准确，重现性好，具有一定参考价值。

[关键词]平胃散；聚乙炔类化合物；苍术素；（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯

[中图分类号] R284 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）16-49-03

平胃散最早记载于《简要济众方》，后完备于《太平惠民和剂局方》卷3[1]，其功效燥湿健脾，行气和胃。主治湿困脾胃症。处方由君药苍术（麸炒）配以厚朴（姜炙）、陈皮、甘草4味组成，为全面提高药品质量标准，保证临床用药安全、有效，本实验采用高效液相色谱法对平胃散中的苍术素和（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯两种聚乙炔类成分进行了含量测定。

1 材料与方法

1.1 仪器

手提式粉碎机（浙江中药机械有限公司）；Sartorius CP225D型电子天平（十万分之一，德国Sartorius公司）；AR2140电子分析天平（上海奥豪斯公司）；KH-300P型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；高效液相色谱仪为Angilent 1100系列：四元泵、在线脱气机、柱温箱、Angilent 1100化学工作站；Promosil C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱（Bonna-Agela technologies）。

1.2 试剂和药材

苍术素和（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰对照品（上海中药标准化研究中心，纯度大于

98%）；乙腈（色谱纯，瑞典欧森巴克化学公司）；甲醇（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；其余试剂均为分析纯；苍术（麸炒）、厚朴（姜炙）、陈皮、甘草（炙）均购自北京同仁堂大药房大连分店，经辽宁中医药大学鉴定教研室李峰教授鉴定，均符合《中国药典》规定。

2 方法

2.1 对照品溶液的制备

分别精密称取苍术素和（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰对照品适量，加甲醇配成质量浓度分别为497mg/L和502mg/L的储备液；不同浓度的对照品溶液的配制均用以上储备液混合并用甲醇稀释，定容，微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得对照品混合溶液。以上溶液均密封避光保存备用。

2.2 供试品溶液的制备

取苍术24g，厚朴18g，陈皮12g，甘草6g，四种药材混合粉碎（过60目筛）去，取约0.5g，精密称定，置于具赛锥形瓶中，加入甲醇20mL，密塞，超声提取60min，取出，放至室温后滤过，滤液经减压旋蒸浓缩后，移至5mL量瓶中，用甲醇定容至刻度线，摇匀，静置。取溶液过0.45μm微孔滤膜，作为供试品溶液备用，整个过程要求避光。

2.3 阴性液的制备

取厚朴18g，陈皮12g，甘草6g，三种药材混合粉碎（过60目筛）去，取约0.5g，精密称定，置于具赛锥形瓶中，加入甲醇20mL，密塞，超声提取60min，取出，放至室温后滤过，滤液经减压旋蒸浓缩后，移至5mL量瓶中，用甲醇定容至刻度线，摇匀，静置。取溶液过0.45μm微孔滤膜，作为阴性对照溶液备用，整个过程要求避光。

2.4 色谱条件

色谱柱promosll-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流速：1.0mL/min，柱温：25℃；检测波长：340 nm；进样量为20μl；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱程序：48%A（8min）-54%A（7 min）-85%A（13 min）。理论塔板数以苍术素计不低于8000，以（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰计不低于8000。

3 结果

3.1 系统适应性试验

取阴性对照溶液、二合一对照品溶液和供试品溶液，按2.4项色谱条件下进样，其色谱图如图1所示阴性样品溶液在苍术素与（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯对应保留时间的出峰位置处无干扰。色谱图，见图1。

A阴性；B二合一对照品；C样品；1（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯；2苍术素

3.2 线性关系考查

精密吸取苍术素和（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰对照品溶液适量，加甲醇配制成不同浓度的溶液，按2.4项下所述色谱条件下，以标准品浓度为横坐标，以峰面积积分值纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表1。

3.3 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液20μL，按2.3项下所述色谱条件下进样，连续进样6次，苍术素峰面积的RSD为1.5%（n=6）；（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰面积的RSD为1.7%（n=6）。

3.4 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液20μL，按2.3项下所述色谱条件下进样，分别在0、4、8、12、24、36 h注入液相色谱仪测定，苍术素峰面积峰面积的RSD为2.4%（n=6）；（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰面积的RSD为3.7%（n=6）。表明供试品溶液在36h内稳定。

3.5 重复性试验

取同一批号药材粉末，平行称定6份，按2.2项下所述方法制备供试品溶液，按2.4项下所述色谱条件下进样，测定峰面积并计算含量，结果表明，样品中苍术素的平均质量分数为1.45mg/g，RSD为2.8%（n=6）；（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的平均质量分数为2.88mg/g，峰面积的RSD为3.6%（n=6）。

3.6 加样回收率试验

取已测定含量的平胃散药材粉末约0.25g，精密称定6份，加入适量对照品，按2.2项下所述方法制备供试品溶液，按2.4项下所述色谱条件下进样分析，测定峰面积并计算含量、回收率和RSD，结果见表2。

3.7 样品含量测定

取平胃散药材粉末6批，按2.2项下所述方法制备供试品溶液，按2.4项下所述色谱条件下进样分析，计算苍术素和（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的含量，结果见表3。采用本法测得（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的平均含量2.823mg/g，苍术素的平均含量1.444mg/g。

4 讨论

苍术素、苍术素醇和（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯均属于聚乙炔类化合物，且该类化合物在利胆、抗炎、消化道系统以及阻碍黄嘌呤氧化酶等方面体现良好活性[2-3]。该类化合物主要存在于苍术中，含量较高，同属植物白术中几乎不含有该类成分[4]，且已有利用HPLC法测定二妙丸中苍术素含量的相关研究[5]，故选用聚乙炔类化合物作为以苍术为君药的复方制剂平胃散的专属性测定成分具有合理性，但因苍术素醇化学性质较不稳定，易分解，因此以苍术素和（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯为指标，建立其含量测定方法更为合理。

供试品制备曾分别以甲醇超声0.5、1、2h，结果采用超声1h和2h提取的聚乙炔类含量较完全，且结果相差不大，故选用以甲醇超声提取，同时考察发现超声1h有效成分方可提取完全，故确定此提取时间。

在波长选择过程中，将（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8、10-二炔-1、3-二乙酸酯对照品溶于甲醇中，测定其紫外光谱，发现在320nm附近有较大吸收，紫外光谱图见图2。根据文献报道，苍术素的最大吸收波长为340nm[6-7]，且参考中国药典[8]规定苍术素的检测波长为340nm，为方便检测，故最终确定检测波长为340nm。

流动相选择上，由于平胃散成分较为复杂，对液相检测有较大干扰，本实验先后比较了乙腈-水（ 70∶30） 、甲醇-水（79∶21）等不同比例等度洗脱，结果表明等度洗脱很难保证在相对较短的保留时间内使两种聚乙炔类化合物达到较高的分离度，故采用梯度洗脱，其优点在于：色谱峰分离度好，保留时间适中。

[参考文献]

[1] 吴建红.简述平胃散源流发展[J].湖北中医学院学报，1999，1（2）：19-20.

[2] Resch M，Heilmann J，Steigel A，Bauer R.Planta Med，2001，67（5）：437.

[3] Sakurai T，Sugawara H，Salto K I，Kano Y.Phytother Res，1995，9（5）：340.

[4] 陈炎明，贵新，王峥涛.反相高效液相色谱法同时测定苍术中的两种聚乙炔类化合物[J].色谱，2007，1（25）：84-87.

[5] 王琰.HPLC测定二妙丸中苍术素[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（24）：65-66.

[6] 张晓兰，王晓玉，张丽媛，等.反相高效液相色谱法同时测定四妙丸中盐酸小聚碱与苍术素的含量[J].中南药学，2010，8（4）：259-262.

[7] 南洋，贾凌云，李倩，等.RP-HPLC法同时测定苍术中苍术素和白术内酯Ⅱ的含量[J].药物分析杂志，2010，30（1）：17-20.

[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].（第1部）北京：中国医药科技出版社，2010：150-151.

（收稿日期：2013-06-04）