时间：2022-02-17 04:31:15
[摘要] 目的 探讨MEF2A基因多态性位点及其冠心病相关性。 方法 收集该院心血管内科100例诊断为冠状动脉粥样硬化心脏病的病人作为研究组，同期100例来我院进行健康体检未患冠状动脉粥样硬化心脏病的正常人作为对照组，收集时间为2011年4月―2014年4月。对两组人员进行DNA提取，PCR扩增，SSCP分析，DNA测序。比较两组9、11号外显子多态性位点（891C/T中TT、CT；1294～1296CCG中DD、DW；1305G/A中AA、GA）中的突变频率。结果 研究组和对照组MEF2A基因的9号外显子多态性位点有891C/T变异，11号外显子多态性位点有1294～1296CCG、1305G/A、1353G/T。研究组与对照组891C/T中TT、CT点位突变频率分别为（56%、43%；4%、8%），差异有统计学意义（P
[关键词] MEF2A基因；多态性；冠心病
[中图分类号] R541 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）10（c）-0182-03
据不完全统计在2013年全球共有超过1500万人死于冠状动脉粥样硬化心脏病[1]。既往研究发现冠心病的危险因素众多包括血脂代谢、高血压、高血糖、肥胖、吸烟、高尿酸血症等等[2]。近几年来随着分子遗传学的高速发展，学者们发现基因多态性与冠心病有密切的联系[3]。因此笔者拟收集该院心血管内科100例诊断为冠状动脉粥样硬化心脏病的病人作为研究组，同期100例来该院进行健康体检未患冠状动脉粥样硬化心脏病的正常人作为对照组，收集时间为2011年4月―2014年4月，目的为调查冠状动脉粥样硬化心脏病的病人与健康人群中9、11号外显子多态性位点（891C/T中TT、CT；1294～1296CCG中DD、DW；1305G/A中AA、GA）中的突变频率。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集该院心血管内科100例诊断为冠状动脉粥样硬化心脏病的病人作为研究组，同期100例来该院进行健康体检未患冠状动脉粥样硬化心脏病的正常人作为对照组。研究组，平均年龄（45.2±6.9）岁，其中男性55人，女性45人；对照组，年龄（47.1±5.5）岁，其中男性60人，女性40人。2组人员性别，年龄差异无统计学意义。所有研究对象均签定知情同意书。
1.2 入选标准
入选标准：①就诊时临床资料、治疗经过完整。②冠状动脉粥样硬化心脏病的诊断符合中华医学会心内科学分会关于冠状动脉粥样硬化心脏病的诊断与鉴别诊断[4]。③每个研究对象能自愿参与该次研究。
1.3 排除指标
①入院时生命体征不平稳的患者。②有各种急性、慢性感染， 严重肝、肾功能不全，恶性肿瘤，自身免疫性疾病者，药物有过敏、恶性心律失常者。③对照组中患有冠心病、或有冠状动脉粥样硬化心脏病家族史。
1.4 研究方法
1.4.1 主要试剂 TaqDNA聚合酶；EZNA胶回收试剂；DTCS StartDNA试剂盒。
1.4.2 仪器与材料 PCR仪器、垂直电泳槽及电泳仪（上海精密仪器有限公司）、凝胶成像仪、TICK400-测序仪、日本岛津UV265紫外分光仪。
1.4.3 引物和探针 引物由日本TEIL杭州生物公司合成，引物序列参考Lusis AJ等[7]的研究，其余引物用FACE-maker软件自行设计。
1.4.4 DNA提取 用EDTA抗凝收集研究对象外周血5 mL，采用盐析法提取基因组DNA。
1.4.5 PCR扩增 使用40 μl反应体系，PCR缓冲液，NaCl为2.0 mmol/L，1 μmol/L上下游引物， 0.2 mmol/LdNTP，Taq DNA聚合酶0.8 U。循环参数如下：5 min 94 ℃预变性，退火20 s， 72 ℃延伸20 s， 循环40次。从基因组DNA中扩增MEF2A基因的外显子。
1.4.6 SSCP分析 8 μlPCR扩增产物和2 μl缓冲液混合，先96 ℃加热10 min后立即冰浴，上样于聚丙烯酰胺凝胶，240 V电泳3 h，银染。
1.4.7 DNA测序 PCR产物全部上样琼脂糖凝胶，用E・EZNA胶回收试剂纯化产物。PCR正向、反向引物扩增，进行核苷酸序列测定，最终数据用DNA 分析软件比对，并用Chromas软件测定序列变异。
1.5 统计方法
将资料录入SPSS18.0软件。计数资料采频数描述，用χ2检验法。
2 结果
2.1 两组人群9、11号外显子多态性位点的检测
2.2 研究组和对照组9、11号外显子多态性位点突变频率的比较
研究组与对照组891C/T中TT、CT点位突变频率分别为（56%、43%；4%、8%），差异有统计学意义（P
3 讨论
MEF2A基因广泛在血管平滑肌和内皮细胞中有表达，对冠状动脉的发育起重要作用[5]。有国外学者发现白兔的MEF2A存在多态性，因此采取基因酶切除法将白兔MEF2A多态性点位切除，结果显示10 d后白兔血管异常，肌纤维破裂[6]。因此该研究认为MEF2A基因结构位点多态性与冠心病可能密切相关。
该研究发现研究组和对照组中MEF2A基因的9、11号外显子均存在多态性位点。9号外显子表明有891C/T变异，11号外显子有1294～1296CCG、1305G/A、1353G/T变异。但是该研究进一步比较发现：研究组与对照组891C/T中TT、CT点位突变频率分别为（56%、43%；4%、8%），差异有统计学意义（P
综上所述，MEF2A作为肌细胞增强因子家族的一员，编码转录因子，调节心肌和骨骼肌细胞的增殖、分化和凋亡[10]。笔者认为冠状动脉粥样硬化心脏病的病人MEF2A基因结构位点891C/T、1294～1296CCG、1305G/A、1353G/T点位突变频率明显高于正常人，MEF2A基因多态性与冠心病明显相关。
[参考文献]
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（收稿日期：2014-08-20）