复方中药制剂“芪苓汤”对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗试验

摘要：为了观察复方中药制剂“芪苓汤”对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗效果，以大肠杆菌O78株人工感染12日龄海兰褐公雏致其发病，于接种后灌服不同剂量的复方中药制剂。结果表明，分别按每只0．05、0．10、0．20mL“芪苓汤”的剂量给药，对人工感染鸡大肠杆菌病均有较好的治疗作用，各组治愈率分别为70．00％、83．33％、90．00％，中、高剂量组与氧氟沙星组疗效相当。同时可显著或极显著（P＜0．05或P＜0．01）提高病鸡的增重，但与健康组比较差异不显著（P＞0．05）。上述结果表明，“芪苓汤”对人工感染鸡大肠杆菌病疗效显著，其作用优于或相当于氧氟沙星。

关键词：复方中药制剂；鸡大肠杆菌病；治疗

中图分类号：S853．73文献标识码：B文章编号：1007－273X（2011）09-0013-02

鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌所引起的传染病，不仅可单独发生，而且可与慢性呼吸道疾病、新城疫、传染性支气管炎及传染性法氏囊炎等混合感染。近年来，鸡大肠杆菌病的发病率越来越高，再加上其血清型众多，给防制工作带来了极大困难，给养鸡业造成了巨大的经济损失。该病迄今尚无有效的疫苗用于防控，临床常用抗生素和其他化学抗菌药物进行治疗，但因目前病原耐药性日趋严重，药物残留危害人体健康而受到强烈关注与质疑，因而，寻求新的防治药物已成当务之急［1－4］。

经参考各种资料［5］，组成中药配方，制成了复方中药制剂并命名为“芪苓汤”，为观察其治疗人工感染鸡大肠杆菌病的有效性，本试验采用大肠杆菌O78菌株人工感染12日龄海兰褐公雏致其发病，然后在其饮水中加入不同剂量的复方中药制剂，观察该药治疗人工感染性鸡大肠杆菌病的效果。该研究成果将为临床上鸡大肠杆菌病的防治提供一定的理论依据，为大肠杆菌病的诊治提供理论支撑。

1材料与方法

1．1材料

1．1．1复方中药制剂由黄芪30g、茯苓20g、香附20g组成。将以上中药烘干后，准确称取组方配伍中所需剂量，加入蒸馏水（1∶10，M／V）浸泡30min煎煮，煮沸后文火煎1h，用4层纱布过滤，药渣加入沸腾蒸馏水（1∶8，M／V），煎煮1h，过滤，合并两次药液用旋转蒸发器浓缩至药液中生药含量为1．0g／mL，置于4℃冰箱保存，备用。

1．1．2菌株及标准血清大肠杆菌O78株与大肠杆菌O抗原定型血清，购自中国兽医药品监察所。

1．1．3试剂LB培养基、肉汤培养基购自青岛海博生物技术有限公司。

1．1．4试验动物未经鸡大肠杆菌疫苗免疫的1日龄健康海兰褐公雏210只，饲喂无抗生素添加剂的饲料，自由采食与饮水。

1．2方法

1．2．1大肠杆菌感染液制备将冻干的大肠杆菌O78于室温下融化，无菌条件下划线接种于LB培养基上，37℃培养24h后挑取生长良好的单个菌落接种于肉汤培养基中，37℃培养24h。用倍比稀释进行计数，使细菌浓度为1．0×109CFU／mL，4℃保存备用。

1．2．2试验鸡分组与处理将供试鸡随机分为7组，每组30只。至12日龄时，除健康组外每组鸡只均胸肌注射大肠杆菌培养液0．2mL／只（1．0×109CFU／mL）攻毒，各组动物分别进行处理，为准确把握给药剂量，采用灌胃方式给药，各组不同剂量的药物稀释成同体积灌服。其中，A组为健康对照组，隔离饲养，不攻毒，不用药；B组为感染对照组，攻毒不给药；C、D、E组分别为中药低、中、高剂量治疗组，攻毒感染发病后，分别按每只0．05、0．10、0．20mL复方中药制剂的剂量给药；F组为氧氟沙星组，攻毒感染发病后，按每1kg体重0．1mL氧氟沙星的剂量，以温开水溶解后灌服，每日1次，连续5d。

1．2．3结果记录分别计算各组的发病率、感染死亡率、治愈率、增重率等。计算公式如下：发病率＝组内发病数／该组试验鸡数×100％；感染死亡率＝组内死亡数／该组试验鸡数×100％；治愈率＝组内治愈数／该组试验鸡发病数×100％；增重率＝组内最终平均体重－初始平均体重／初始平均体重×100％。

1．2．4统计分析试验数据以SPSS12．0软件进行统计处理，试验数据以（x±s）表示。

2结果

2．1人工感染发病情况

试验鸡攻毒2h后，各组鸡开始陆续发病，最初出现精神沉郁，活动减少，蹲伏或拥挤扎堆。4h后除中药预防组仅有少数鸡只发病外，其余各组全部发病。病鸡精神萎靡，闭目呆立，或扎堆而卧，羽毛蓬乱，食欲减退，排黄色或黄绿色稀便；部分鸡呼吸困难，张口伸颈，气促喘粗；有的鸡站立不稳，腿翅无力或瘫软卧地。攻菌8h后开始有鸡死亡，10h后死亡数增加，24～48h后达死亡高峰，72h后死亡明显减少。各组鸡发病和死亡情况见表1。

2．2剖检变化

病死鸡鼻腔及口腔存有泡沫状液体，及其周围羽毛粘附粪污，早期死亡鸡剖检仅见急性败血症病变。中后期死亡病鸡出现典型的心包炎、肝周炎、气囊炎病变。心包腔积有淡黄色浑浊渗出液，心包壁增厚，不透明，附着纤维素性渗出物，严重的可见黄色干酪样物质；肝脏肿大，表面覆盖灰白色纤维素性渗出物，容易剥离，肝实质偶有灰色坏死区；气囊壁混浊，不均匀增厚，呼吸面被覆干酪样渗出物；嗉囊内容物充实，酸臭气味浓烈；腺胃、肌胃内容物有酸臭气味；十二指肠、空肠、回肠、盲肠等黏膜出血、脱落，肠系膜充血、出血；肾脏肿大充血。

2．4“芪苓汤”对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗作用

雏鸡接种大肠杆菌发病后，“芪苓汤”治疗组分别按每只0．05、0．10、0．20mL的剂量稀释成同体积灌服给药，使病情很快得到控制。8h后，病情逐渐趋于缓解，病鸡精神渐显活泼，活动增加；24h后饮、食欲明显好转；48h后病鸡临床症状基本消失，饮、食欲基本恢复正常。各治疗组疗效均极显著优于感染对照组（P＜0．01）。其中，低剂量治疗组疗效显著低于氧氟沙星治疗组（P＜0．05），其余各治疗组间无明显差异（P＞0．05）（表1）。试验期间没有发现试验鸡对复方中药制剂有明显的不良反应。

2．5“芪苓汤”对试验鸡增重的影响

试验鸡体重变化情况见表2。

由表2可见，各组鸡在12日龄时平均体重差异不显著（P＞0．05）。在17日龄各组鸡停药后，感染对照组增重率极显著低于其他各组（P＜0．01）；“芪苓汤”高剂量组增重率极显著高于其他各组（P＜0．01）；中剂量组增重率与健康对照组无显著差异（P＞0．05），但显著高于氧氟沙星治疗组（P＜0．05），同时极显著高于感染对照组和低剂量治疗组（P＜0．01）；低剂量治疗组增重率极显著高于感染对照组，同时极显著低于其余各组（P＜0．01）。

3讨论

（1）研究证实，黄芪对肺炎双球菌、痢疾杆菌、溶血性链球菌A、B、C及金黄色、柠檬色、白色葡萄球菌等均有抑制作用，对流感仙台BB1病毒及口腔病毒的致病作用也有一定的抑制作用，但无直接灭活作用［6］。黄芪可促进机体体液免疫和细胞免疫功能。茯苓多糖具有增强免疫的作用，既可增强细胞免疫，又可增强体液免疫。羧甲基茯苓多糖还具有免疫调节、保肝降酶、间接抗病毒、诱生和促诱生白细胞调节素等多种生理活性。茯苓具有抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、炭疽杆菌、绿脓杆菌、甲型链球菌、大肠杆菌、乙型链球菌等均有抑制作用［7］。香附提取物对由变形链球菌引起的龋齿有预防作用，对念珠菌性腹膜炎有治疗作用，香附根茎提取的总黄酮类和乙酸乙酯提取部分对肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和粪肠球菌有显著抑制作用［8－10］。

（2）人工感染鸡发病后，按每只0．05、0．10、0．20 mL的剂量灌服“芪苓汤”，每日1次，连用5d，可使病情很快得到控制，其治愈率分别为70．00％、83．33％、90．00％，表明复方中药制剂“芪苓汤”对鸡大肠杆菌病具有较好的治疗作用。每只0．20mL的高剂量“芪苓汤”内服也没有引起明显的不良反应，表明该制剂具有较高的临床用药安全性。

（3）试验鸡感染大肠杆菌O78后，其生长发育受到严重影响，“芪苓汤”内服在一定程度上抵消了大肠杆菌感染对鸡生长发育的影响，与感染对照组相比，可极显著提高病鸡的增重率（P＜0．01），其中以高剂量组增重效果最明显，其增重率极显著高于其他各组（P＜0．01），进一步从体重变化角度证明了复方中药制剂“芪苓汤”对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗作用。

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