茶籽油的鉴别与定量测定

摘要：本研究在茶籽油与醋酸酐―浓硫酸的显色反应基础上，对影响茶籽油定量分析的有关条件进行研究，结果表明：当醋酸酐用量为 1.0 mL，二氯甲烷 1.50 mL，浓硫酸 0.20 mL，冰水浴放置时间为5 min，无水乙醚温度在10℃左右时，茶籽油与醋酸酐一浓硫酸形成的有色络合物的最大吸收波长为 530 nm，纯茶籽油含量在 0～ 0.50 g/mL范围内符合朗伯――比耳定律。

关键词：茶籽油 鉴别 醋酸酐 定量测定

1、前言

茶籽油是一种营养价值高、具有一定的保健功能的木本植物食用油。它的物理、化学特性与橄榄油相似，茶籽油中富含油酸，易于人体消化吸收，茶籽油可润肠清胃、杀菌解毒、是一种理想食用营养油脂，并受到大多数人的喜爱。

由于茶籽油价格高，一些厂家和经销商在茶籽油中掺入其他植物油，冒充纯茶籽油出售牟取暴利。但目前还没有一种准确测定茶籽油含量的方法。因此有必要研究一种测定茶籽油实际含量的有效方法。鉴于此，笔者查阅了有关资料：得知用茶籽油与醋酸酐-浓硫酸的显色反应对茶籽油进行定量测定是一种较好的方法，此方法先通过单因素试验确定茶籽油定量测定的条件试验，再通过掺杂试验和样品中添加纯茶籽油的回收试验进行分析验证，从而得出茶籽油的定量测定的最佳试验条件。该试验方法能够简便、快捷的测定出茶籽油的实际含量。可以防止一些不法厂商为了谋取利益在茶籽油中添加其他植物油，从而维护消费者权益，所以此项研究意义非常重大。

2、材料与方法

2.1 材料、仪器与试剂

2.1.1 试验材料

菜籽油，大豆油和芝麻油

2.1.2 仪器与设备

2.1.3 试剂

2.2 试验方法

2.2.1 预测定

参照油茶籽油的定性方法（粮油标准汇编中），吸取纯茶籽油0.25 mL于10mL刻度试管中，加入0.80 mL醋酸酐，1.50 mL二氯甲烷，摇匀后放置于冰水浴中冷却，然后滴入0.20 mL浓硫酸，盖塞后摇匀再放入冰水浴中，5 min后加入无水乙醚至10 mL刻度，摇匀后观察。

2.2.2 最大吸收波长的确定

吸取 0.20 mL纯茶籽油，按照预测定方法摇匀显色后立即在7230G分光光度计上测得吸光度值，记录不同波长的吸光度，绘制茶籽油吸光度―波长曲线。

2.2.3 醋酸酐用量的确定

分别吸取 0.20 mL纯茶籽油于5支10 mL具塞刻度试管内，各加入0.50 mL，0.80 mL，1.00 mL，1.25 mL，1.50 mL，1.75mL醋酸酐，以下操作步骤同预测定法。摇匀显色后，立即在7230G分光光度计上，用 1 cm比色皿，以剂空白调零，在530nm处测得吸光度值。绘制醋酸酐用量―吸光度曲线。

2.2.4 浓硫酸用量的确定

分别吸取 0.20 mL纯茶籽油于5支10mL具塞刻度试管中，各加入 1.0 mL醋酸酐 ，1.50 mL二氯甲烷 ，摇匀后置冰水浴中，再分别加入 0.10 mL，0.15 mL，0.20 mL，0.25 mL，0.30 mL浓硫酸 ，放置 5 min 后依次取出加无水乙醚至刻度 ，摇匀显色后立即在 7230G分光光度计上 ，用 1 cm比色皿 ，以试剂空白调零 ，于530nm处比色测定吸光度值。绘制浓硫酸用量―吸光度曲线。

2.2.5 缩合时间与吸光度的关系

各吸取0.20 mL纯茶籽油于10 mL刻度试管中，加入 1.0 mL醋酸酐，1.5 mL二氯甲烷和 0.2 mL浓硫酸，置冰水浴中静置 1 min，2 min，3 min，4min，5 min，6 min，7min后依次取出 ，再加入无水乙醚至10 mL刻度，摇匀显色后立即在 7230G分光光度计上 ，用 1 cm比色皿 ，以试剂空白调零 ，于530nm处比色测定得吸光度值 。绘制缩合时间―吸光度曲线。

2.2.6 无水乙醚温度对显色稳定性的影响

将无水乙醚盛于密闭容器中，置水浴中冷却或升温至一定温度 。吸取0.20 mL纯茶籽油于各刻度试管中，分别加入1.0 mL醋酸酐，1.5 mL二氯甲烷，摇匀后置冰水浴中冷却，滴入 0.20 mL浓硫酸，放置 5 min 后，再分别用5℃、10℃、20℃、30℃无水乙醚定容至刻度，分别摇匀后在7230G分光光度计上，用 1 cm比色皿，以试剂空白调零，于530nm比色测定吸光度值。绘制无水乙醚温度对显色稳定性的影响曲线。

2.2.7 其他植物油的显色反应

参照植物油定性试验，分别吸取各种植物油 0.25 mL于 10 mL刻度试管中，再分别加入1.00 mL醋酸酐，1.50 mL二氯甲烷，摇匀后放置于冰水浴中冷却，然后滴入0.20 mL浓硫酸，盖塞后摇匀再放入冰水浴中，5 min后加入无水乙醚至10 mL刻度，摇匀后观察显色液的颜色变化。

2.2.8 茶籽油标准曲线的制作

综合条件试验结果，得出茶籽油标准曲线的制作步骤：精确吸取纯茶籽油0.0 mL，0.05 mL，0.10 mL， 0.20 mL，0.30 mL，0.40 mL，0.50 mL于10 mL具塞刻度试管中，分别加入1.0 mL醋酸酐，1.5 mL二氯甲烷，摇匀后置冰水浴中冷却，滴加 0.20 mL浓硫酸，摇匀在冰水浴中放置5 min后 ，加入无水乙醚至刻度 ，摇匀，放置1.5-1.8 min，在7230G分光光度计上 ，波长530nm处 ，用1cm比色皿 ，以试剂空白调零，迅速读取吸光度值。记录绘制茶籽油标准曲线。

2.2.9 掺杂试验

由于茶籽油产量低、生产规模小、价格非常昂贵，因此像菜籽油、大豆油、花生油等这些产量高、价格又相对便宜的植物油常常被掺入茶籽油中。为此，我们用这三种植物油做掺杂试验。

2.2.10 样品中添加纯茶籽油的回收试验

将纯茶籽油当作标准样品添加到其他植物油中，按照纯茶籽油标准曲线法操作，用7230G可见光光度计在530nm处测得混合油的吸光度，根据吸光度计算出混合油中纯茶籽油含量。

2.2.11 样品测定

由于各地气候、水土条件的不一样，因此茶籽油的成分也会有所不同，为了能够提高试验数据的可靠性和准确性，我们选用了不同产地的纯茶籽油进行测定。

精确称取茶籽油样品各0.20ml于10mL具塞刻度试管中，按照标准曲线法的操作，摇匀后放置1.5-1.8min，在7230G分光光度计上，波长530nm处，用1cm比色皿，以试剂空白调零，迅速读取吸光度值。

3、结果与讨论

3.1 茶籽油试液色泽的变化规律

试液色泽的变化规律是：褐绿色棕红色玫瑰红浅玫瑰红浅棕色淡褐绿色。

3.2 最大吸收波长的确定

从图1可以得出，茶籽油与醋酸酐-浓硫酸形成的有色络合物在波长530nm处吸光度值最大。

3.3 醋酸酐用量的确定

从图2中显示：当醋酸酐用量为1.00mL时茶籽油与醋酸酐-浓硫酸形成的有色络合物的吸光度最大。

3.4 浓硫酸用量的确定

从图3显示可知 ，浓硫酸用量为 0.20 mL时茶籽油与醋酸酐-浓硫酸形成的有色络合物的吸光度值最大且达到稳定状态。

3.5 缩合时间与吸光度的关系

图4中结果显示：将试液放置冰水浴中5 min后茶籽油与醋酸酐-浓硫酸形成的有色络合物的吸光度达到稳定状态。

3.6 无水乙醚温度对显色稳定性的影响

图5中显示：当无水乙醚温度为5～10℃时茶籽油与醋酸酐一浓硫酸形成的有色络合物的的吸光度变化较缓慢， 20～30℃时吸光度曲线迅速下降。从而得知，无水乙醚温度对茶籽油与醋酸酐―浓硫酸形成的络合物有一定影响。

3.7 其他植物油的显色变化规律

参照植物油脂定性试验，其它几种植物油的显色情况如下表：

从上面列表中可以看出：不同种植物油通过定性显色试验，加入无水乙醚后的颜色变化均不相同（茶籽油和油茶籽油除外）。

3.8 茶籽油标准曲线

测得的吸光度值为： 0.0，0.364，0.701，1.319，1.824，2.286，2.699。经计算得标准曲线方程为y =6.6028x + 0.0411，相关系数 r = 0.9967，r0.05= 0.754， r > r0.05，证明回归曲线相关好。

3.9掺杂试验

掺入菜籽油、大豆油、花生油后的吸光度变化情况见图 7、图 8、图 9。

3.10 样品中添加纯茶籽油的回收试验

将纯茶籽油当作标准样品添加到其他植物油中，测得回收率。结果如下：

从表2中可以得出，样品中添加纯茶籽油测得的回收率平均值为97.92%，所以用该方法对茶籽油定量测定是一种较好的测量方法。

3.11 样品测定结果

不同产地的纯茶籽油进行测定结果如下：

从表3中可以看出，不同产地的纯茶籽油与醋酸酐―浓硫酸形成的有色络合物的吸光度值差别并不是很大。

4、小结与讨论

4.1 通过上述几个条件试验得出用醋酸酐―浓硫酸法测定茶籽油的含量的操作参数为：茶籽油用量 0～ 0.5g，醋酸酐 1.0 mL，二氯甲烷 1.50 mL，浓硫酸 0.20 mL，冰水浴放置时间为 5 min，无水乙醚温度在 10℃左右。