时间：2022-02-02 07:47:58
（陕西中医学院，陕西 咸阳 712046）
摘 要：目的：建立二色补血草中没食子酸的含量测定方法。方法：用HPLC法测定，流动相为甲醇-0.1％磷酸（5∶95）；检测波长273nm。结果：没食子酸在125.1ng～750.6ng之间呈良好线性关系。平均回收率（n=6）为99.86%，RSD=0.66%。结论：该方法稳定可靠，重现性好，可用于二色补血草中没食子酸的含量测定。
关键词：HPLC法；二色补血草；没食子酸
中图分类号：R284.2文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）01-0033-02
二色补血草又名燎眉蒿、扫帚草、匙叶草、血见愁、秃子花、苍蝇花、白花菜棵，为白花丹科（Plumbaginaceae）补血草属植物二色补血草［Limonium bicolor （Bunge） Kuntze］带根全草。性平，味甘苦。具有补血、止血、散瘀、调经、益脾、健胃等功效；主治崩漏、尿血、月经不调等。二色补血草的化学成分十分复杂，含有氨基酸、无机元素、维生素、黄酮类、鞣质、多糖、生物碱、有机酸等多种成分[1，2]，其中没食子酸具有显著的消炎作用，能抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌的生长[3，4]。本实验采用HPLC法测定了二色补血草中没食子酸的含量，结果表明，该方法简便快速，稳定可靠。
1 仪器与试药
1.1 仪器
LC-2010A型高效液相色谱仪（岛津有限公司），Hypersil ODS（25um，4.6 mm×250 mm）色谱柱，电子天平（萨多利斯GB204，瑞典）。
1.2 试药
二色补血草，购自陕西眉县，经陕西中医学院生药教研室王继涛教授鉴定为白花丹科二色补血草［Limonium bicolor （Bunge） Kuntze］的全草。没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100831-200302）。甲醇为色谱纯；其它试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。
2 方法与结果[5，6]
2.1 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS（250nm×4.6nm，5μm）；流动相：甲醇-0.1％磷酸（5：95）；检测波长：273nm；流速：1mL/min；柱温：室温。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取没食子对照品6.255mg，置于50mL量瓶中，加50%甲醇溶解至刻度，摇匀，即得（每1mL含没食子酸0.1251mg）。
2.3 供试品溶液的制备
取二色补血草2.5g，精密称定，加50％甲醇适量，加热回流提取2h，过滤，滤液蒸干，残渣用50%甲醇溶解置25mL量瓶中，50%甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 标准曲线的绘制
精密吸取对照品溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL与6.0mL，分别置于10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，照高效液相色谱法（《中国药典》2005版一部，附录Ⅵ D）测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=2959.5X-11264，r=0.9999。结果表明，没食子酸在125.1ng～750.6ng之间呈良好线性关系。
2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在0、30、60、90、120min进样，测定没食子酸的含量，其RSD值为0.41％，结果表明：供试品溶液在2h内稳定性良好。
2.6 精密度试验
取同一供试品溶液，重复进样5次，测定没食子酸的含量，其RSD值为0.62％，结果表明，仪器精密度良好。
2.7 重现性试验
取样品适量（5份），精密称取，分别按2.3项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下的色谱条件，测定没食子酸含量，其RSD值为0.45％，结果表明，本方法重现性良好。
2.8 回收率试验
精密称取已知含量（0.057%）的样品6份，分别精密加入一定量的没食子酸对照品溶液（每1mL中含没食子酸0.1251mg），按2.3项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下的色谱条件，测定没食子酸含量，平均回收率为99.86%，RSD值为0.66％，结果见表1。
2.9 样品的含量测定
吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，按2.2项下的色谱条件测定，记录峰面积，由回归方程计算没食子酸量的含量。见表2。
3 结论
（1）由于没食子酸的极性相对较大，为了与其它物质较好分离，必须使用极性大的流动相。通过流动相的考察，确定甲醇-0.1%磷酸溶液（5∶95）。
（2）本研究以没食子酸作为定量指标，采用HPLC法对二色补血草中的没食子酸的含量进行测定，结果表明，该方法稳定可靠，重现性好，可用于二色补血草中没食子酸的定量分析。
参考文献：
［1］ 朱蓉，陈新民.二色补血草化学成分的研究［J］.中草药，1991，22（9）：390-392.
［2］ 郭洪祝，袁久荣.中华补血草化学成分的研究［J］.中草药，1994，25（8）：39-41.
［3］ 王振恒，张继，哈飞，等.二色补血草资源综合开发利用［J］.中华实用中西医杂志，2005，18（7）：1077.
［4］ 吴冬青，李彩霞，冯雷，等.金色补血草花色素抗氧化活性及抑菌作用研究［J］.中兽医医药杂志，2005，26（5）：22-23.
［5］ 黄加宝，林娜等.高效液相色谱法测定拳参中没食子酸的含量［J］.时珍国医国药，2007，18（8）：1909-1010.
［6］ 潘小姣.HPLC法测定三效微型灌肠剂中没食子酸的含量［J］.广西中医药，2007，30（6）：56-57.