聚酰胺柱层析

摘 要：目的：采用柱层析――分光光度法测定6批广藿香叶中总黄酮的含量。方法：以芦丁作参照物，在室温25℃下，510nm处测定广藿香叶中总黄酮的吸光度。结果：该方法在线性10.1～50.5μg/mL范围内，r=0.9996，平均回收率为97.2%～98.3%；RSD≤2.0%。结论：该方法测定广藿香叶中总黄酮，方法简便，灵敏度和准确度高。

关键词：紫外分光光度法；广藿香叶；总黄酮；芦丁

中图分类号：R285.5

文献标识码：A

文章编号：1673-7717(2008)03-0602-02

Determination of the Content of Total Flavonoid in Leaves of Pogostemon cablin(Blaneo) Benth. by Spectrophotometry

PANG He1，YANG Ming1，HU Li-ping1，TIAN Yuan2，KANG Ting-guo1

(1.Liaoning University of TCM，Shenyang 110032，Liaoning，China；2.The Affiliated

Hospital of Lioaning University of TCM，Shengyang 110032，Liaoning，China)

Abstract：Objective：Content of total flavoniod in leaves of Pogostemon cablin (Blaneo) Benth. was determination by spectrophotometry. Methods：The detection was set at 510nm and temperature at 25℃. Results：The method was linear within the range of 10.1～50.5mg/mL，r=0.9996. The average recovery of assay was 97.2%～98.3% (n=5) and RSD≤2.0% with reference Rutin. Conclustion：The mothod appeared to be simple，highly accurate. It can be useed for the determination of total flavonid.

Keywords：spectrophotometry；Leaves of Pogostemon cablin (Blaneo) Benth；Total Flavonoid；Rutin

广藿香是唇型科刺蕊草属植物广藿香Pogostemon cablin (Blanco) Benth.的干燥地上部分。广藿香叶[1]为其药用部位之一。关于广藿香挥发性成分的研究较多，现代研究表明广藿香叶主要含萜类、黄酮类、醇、酸、酮、醛等化合物[2]。据文献报道广藿香中一些黄酮类成分具有抗菌活性、抗癌活性、抗病毒等作用[4-5]。所以，广藿香叶的有效部位不仅需要考虑挥发油成分，也应考虑黄酮类化合物。目前，关于广藿香叶中总黄酮的含量测定的研究国内未见报道，因此，笔者采用聚酰胺柱层析――紫外分光光度法对6批广藿香叶中的总黄酮进行测定，为科学评价广藿香叶质量提供依据[6-7]。

1 仪器与试药

UV1100型紫外可见光分光光度计(北京瑞利)；ANDFR-200电子分析天平(日本)。层析柱：2.5cm×14cm；超声震荡器TCQ-250超声仪(北京医疗设备二厂)。芦丁(中国药品生物制品研究所购，批号：100080-200306)，其他试剂均为分析纯。聚酰胺(80～100目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)使用前用70%乙醇预处理。广藿香来源于广东省高要市莲塘镇购得石牌广藿香，海南科源广藿香种植基地购得海南广藿香，及福州惠好药房、沈阳药房、江西(华氏)药房及成都锦通药房购得市售广藿香，经中药鉴定教研室主任翟延君教授鉴定均为广藿香Pogostemo cablin(Blanco)Benth。取上述6样品，除去杂质，抖下干燥的叶，粉碎过20目筛，备用。

2 实验方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品10.1mg(120℃干燥至恒重)置50mL容量瓶中，加甲醇适量，水浴加溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀。取25mL用蒸馏水稀释到50mL配制成0.1mg/mL的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 精密称取上述广藿香叶粉末各约1g，置100mL具塞瓶中，分别加入甲醇50mL，超声提取1h，取出，滤过，滤液挥干，拌于装有0.3g聚酰胺(80～100目)的层析柱上，以去离子水洗脱至无色后，用2.5倍体积20%甲醇溶液冲洗后，弃取洗脱液，再用2.5倍体积70%甲醇溶液洗脱，收集该段洗脱液，蒸干，加甲醇定容至50mL容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液备用。

2.3 测定波长的选择 精密吸取上述供试品溶液各0.1mL加甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀。取芦丁对照品，加甲醇溶液(浓度适量)作对照，于紫外可见光分光光度计200～600nm进行波长扫描，以甲醇为随行空白试剂。结果提示，6份提取液与芦丁对照品均在510nm处有最大吸收，故确定其为检测波长。

2.4 线性关系的考察 精密吸取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL分别置于10mL容量瓶中，各加入50%甲醇使至5mL，先加5%NaN2溶液0.3mL，摇匀，放置6min，再加入10%Al(NO3)3溶液0.3mL，摇匀，再放6min，加4%NaOH溶液4mL，各加水稀释到10mL，在510nm处测吸光度。用最小二乘法以吸光度对浓度进行线性回归，回归方程为Y=9.9406X+0.0022，r=0.9996(n=5)，结果表明，芦丁对照品在所试浓度10.1～50.5mg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验 分别取上述6批供试品溶液，测定吸光度，RSD均小于1%(n=5)。表明本法精密度良好。

2.6 重现性考察 分别取上述6批药材样品，按样品制备方法各平行制备5份，依法测定，RSD值均小于2%，表明重现性良好。

2.7 稳定性实验 取对照品及6批供试品溶液于室温分别放置0、2、4、6、8h后，测定吸光度，计算得对照品及6批供试品的RSD均小于1.5%。结果表明，对照品及供试品溶液在8h内稳定。

2.8 回收率实验 采用加样回收率法，取上述6批供试品溶液0.10mL各6份，分别添加已知含量的芦丁对照品溶液，按2.9项下方法测定，平均回收率分别为石牌97.2%；海南96.9%；福州98.3%；沈阳97.5%；江西97.8%；成都98.0%，RSD均小于2.0%(n=6)。

2.9 样品的测定和结果 分别精密取上述六批供试品溶液，照2.2制备供试品溶液，精密量取供试品溶液2mL，置10mL量瓶中，按2.4自“加入50%甲醇使至5mL”起依法操作，以芦丁为对照品溶液，在510nm波长处测定吸光度A。样品中总黄酮测定结果见表1。

表1中药材样品均按中国药典2005版一部附录项下烘干法测定水分，含量均以干燥品计。

3 讨 论

(1)文献未见有关广藿香叶总黄酮测定的报道，本试验以芦丁为对照品，建立了以聚酰胺柱层析――紫外分光光度法测定广藿香叶中总黄酮的方法，为考查广藿香叶的内在质量提供了一种可靠易行的方法。

(2)供试品中叶绿素严重干扰测定结果，选用石油醚脱色效果不理想，故选用聚酰胺柱洗脱，可有效排除叶绿素的干扰，减少广藿香叶总黄酮的损失。

(3)采用此方法测定总黄酮，简单快速，线性关系良好，灵敏度和准确度高。本文考察了6种广藿香叶药材中总黄酮的含量，广州石牌广藿香叶作为道地药材总黄酮含量最高。

参考文献

[1] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典・2005年版一部[S].北京：化学工业出版社，2005：663.

[2] 张广文.广藿香中的黄酮类化合物[J].中草药，2001，32(10)：871.

[3] 曾志.广藿香化学成分和指纹图谱研究[J].分析化学研究报告，2006，34(9)：1249.

[4] Miyazawa M，Okuno Y，Nakamura S，et al.Antimutagenic activity of flavonoids from Pogostemon cablin[J].J Agric Food Chem，2000，48(3)：642.

[5] Park E J，Park H R，Lee J S，et al.Licochalcone A：an inducer of cell differentiation and cytotoxic agent from Pogostemon cablin[J].Planta-Med，1998，64(5)：464.

[6] 陈芳群.柱层析―紫外分光光度法测定射干、川射干、白射干中总黄酮的含量[J].药物分析杂志，1991，11(3)：170-172.

[7] 车京梅.紫外分光光度法测定水红花子中槲皮素的含量[J].时珍国医国药，2006，17(3)：369.