时间：2023-03-02 15:55:12
人们对于鱼精蛋白也许并不陌生。2011年下半年，鱼精蛋白在全国多省市缺货。北京部分医院非紧急手术只能临时叫停，就连北京安贞医院、中国医学科学院阜外医院这样的“用药大户”，也被迫到用量相对较小的医院去调剂用药。哪知5年过去，救命的鱼精蛋白依然还缺货。
鱼精蛋白是开展心脏外科手术等必须备用的药品，现在只有上海第一生化药业有限公司和北京悦康凯悦制药有限公司两家药品生产企业可以生产。事情看似并不复杂：鱼精蛋白是从鱼类新鲜成熟中提取的一种碱性蛋白质的硫酸盐。因为定价偏低，其生产积极性可想而知。问题恰恰出现在两个层面：第一，此药既然没有可替代性，又属于救命的基础用药，“特殊保障机制”面临着严峻考验！市场不是万能的，价格调节更不是零风险的，明知断供有生命危险，公共责任为何不能兜底呢？第二，鱼精蛋白“断供”无论是涨价前的“逼宫”，抑或是“技术攻关”的症结，既然5年前就上演过此般“险情”，相关部门为何迟迟未能做出改进？
当微信朋友圈在慨叹“长效青霉素仅剩两药企生产”的时候，实际上，更多知名或不知名的廉价药，早就杳无音讯了。今年年初据媒体报道，受原材料价格急剧上涨、利润不足等因素影响，西地兰、注射用红霉素、潘生丁等多种供应数十年的基本药物，正逐渐从市场上消失，患者只能用其他高价药替代。一项对全国12个城市40余家三甲医院临床用药情况的抽样调查显示，国家和地方增补的基本药物有500多种，其中有342种短缺……
便宜药不长命，似乎是情理中的事。成本翻倍，定价却束手束脚，亏本买卖自然没人愿做。有疗效，无“钱”途，劣币驱逐良币，廉价药自然就死在过于廉价这一症结上。
肝素抗凝是体外循环（extracorporeal cirulation，ecc）必不可少的条件，而ecc结束后又必须用鱼精蛋白中和肝素的抗凝血作用。鱼精蛋白作为中和肝素的药物，目前尚无更好的替代品。但在使用鱼精蛋白的过程中，常常出现一些毒性反应和过敏反应。对于这些反应的原因和处理方法，有过很多相关的研究和报道［1-3］，但是鱼精蛋白不能中和肝素的病历报道却十分罕见。
1 资料与方法
1.1 临床资料 患者男性，22岁，44 kg。术前诊断为“先天性心脏病，法洛四联症”，超声心动图示：室间隔膜周部回声中断20 mm，主动脉骑跨率为50%，右室流出道肌性狭窄，内径为4～5 mm，右室前壁明显增厚，室间隔运动异常。肺动脉主干16mm，左右肺动脉内径分别为11 mm和12 mm。术前血气分析示：pao2 35.1 mmhg，sao2 71.1%；血常规示：红细胞8.52×1012/l，血红蛋白256 g/l，血小板134×109/l；凝血酶原时间活动度15.1%，凝血酶原时间为31.0 s；肝功能：谷丙转氨酶100 u/l，谷草转氨酶139 u/l。肾功能正常，乙肝六项检查全阴。
1.2 ecc过程 采用jostra-20滚压泵，膜式氧合器（东莞科威），人工超滤器（宁波），预充乳酸林格氏液2200 ml，20%甘露醇100 ml，血浆450 ml，抑肽酶200万单位，20%白蛋白50 ml。ecc中追加乳酸林格氏液1000 ml，5%碳酸氢钠150 ml，超滤2000ml。降温至鼻咽温28.8℃。停机后，机器余血500 ml全部装瓶静脉点滴。
1.3 肝素化和鱼精蛋白中和方法 ecc前测act（美敦力-ⅱ监测仪）生理值126 s，全身肝素化，首次肝素剂量4 mg/kg，共176 mg。首次肝素后10min测act值为900 s，建立ecc。转机后90 min测act值999 s，超过机器值部分未记录在内。
停机后鱼精蛋白按1∶1拮抗肝素，首次鱼精蛋白剂量按常规4 mg/kg，共176 mg。见无血凝块后追加鱼精蛋白30 mg，同时测act值为999 s。然后分两次追加鱼精蛋白20 mg和40 mg，测act值仍为999 s。停止追加鱼精蛋白，放置心包及纵隔引流管，关胸。
2 结 果
转机时间107 min，心脏阻断时间75 min，辅助循环时间27 min。手术结束时有轻度血红蛋白尿。回icu后，第1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h、7 h心包及纵隔引流量分别为240 ml、10 ml、350 ml、 250 ml、300ml、100 ml、240 ml。决定再次入手术室行开胸止血，术中见各切口均无明显活动性出血，纵隔无积血及血块，心包腔内血块约30 g，纵隔组织广泛渗血。清除血块后电灼止血。冲洗创面，置心包及纵隔引流管，关胸。回icu后6 h心包及纵隔引流量减少为0～20 ml/h。患者痊愈出院。
3 讨 论
目前临床使用的硫酸鱼精蛋白是上海第一生化药业有限公司生产的，有效期为两年。给药方式有两种，成人一般用等渗盐水稀释成50 ml后从中心静脉或右心耳缓慢推注。鱼精蛋白失效的原因现在仍不太清楚，但值得总结的经验教训有：①在使用鱼精蛋白时，避免使用碱性药物如碳酸氢钠等。因为鱼精蛋白为强碱性，在体内与强酸性的肝素结合，使其失去抗凝作用，而碱性药物可使鱼精蛋白失去活性；②减少对血小板的破坏。除ecc本身对血液有形成分如红细胞血小板等的破坏外，肝素、鱼精蛋白对血小板分泌和凝集均有影响 ［4］； ③避免鱼精蛋白的用量相对过大。一般情况下鱼精蛋白的用量与首次肝素的用量相当。考虑到术中肝素代谢、超滤的肝素消耗等因素，术中追加的肝素用量不应计入中和范围。有实验证明，鱼精蛋白的用量超过首次肝素用量的1.5倍可加重出血［5］；④妥善保管药物，临床上使用的鱼精蛋白药品名称是硫酸鱼精蛋白，是鱼类新鲜成熟中提取的一种碱性蛋白的硫酸盐，是一种生物制剂，有效期通常为两年，保管不当也会使得药物效价下降。
临床处置方面，作者的经验是：停止继续使用鱼精蛋白，放置心包及纵隔引流后关胸。停止静脉回输机器余血，返回icu，密切观察心包及纵隔引流量。如引流量大，可补充新鲜血浆或血小板。肝素静脉推注的有效期为4～6 h，当肝素在体内代谢完后，凝血功能恢复正常。如果引流量在术后6 h内持续增加，且没有减少的迹象，可再次开胸止血。这时的出血往往表现为创面的渗血，可用凝胶海绵填压，生物蛋白胶或凝血酶局部涂抹、电灼等方法止血。另外，对于一些术前有严重肺动脉高压、心功能差的患者；术中见肺动脉明显增粗或在注射鱼精蛋白时出现血压下降、心率减慢、心脏饱胀、气道阻力增加等的患者，为了预防注射鱼精蛋白时出现的毒性反应所造成的严重后果，作者也采用了：①放弃使用或停止继续使用鱼精蛋白；②不再输入机血；③及时输入新鲜血浆或凝血因子，如血小板等；④外科止血处理等方法。取得了满意效果。
【参考文献】
［1］ 凤旭东，景卫山，钟成跃，等.体外循环心内手术中鱼精蛋白毒性反应的处置 ［j］. 实用医药杂志,2007,24（2）:157-158.
［2］ 吕立波，李军，刘永勤.心脏手术中严重鱼精蛋白毒性反应一例 ［j］.临床麻醉学杂志,2007,23（1）:86.
［3］ 林仙菊，杨灵君.不同途径注射鱼精蛋白不良反应的临床观察 ［j］.浙江创伤外科,2006,11（6）:551-552.
［4］ 李茂源，隋波.肝素、鱼精蛋白对血小板膜糖蛋白影响的实验研究 ［j］.医学杂志,2003,28（1）:79-80.
鱼精蛋白缺货，心脏难以承受之痛
近日，鱼精蛋白在全国范围内的缺货，让各大医院纷纷面临“无米下锅”的窘境。
对于这种状况，阜外心血管病医院心脏外科副主任医师孙宏涛向记者解释说，许多心脏外科手术需要在心脏停跳的情况下进行，这类手术需要用到一种体外循环机，暂时代替人的心脏工作，进行血液循环。但机器毕竟是机器，血液一旦流出就会凝固，容易形成血栓，因此，手术需要用一种被称作肝素的抗凝剂来稀释血液。而在手术最后，患者需要迅速止血，否则将无法下手术台，鱼精蛋白正是有抗凝血作用的一种药物。
据了解，早在1870年，科学家就发现了这种从鱼的头部巢中分离出来的碱性蛋白，截至目前，鱼精蛋白还不能化学合成，这也在一定程度上限制了它的产量。不过，孙宏涛表示，鱼精蛋白缺货的根源显然不是官方回复的是因为从国外进口的一批原料经检测不合规而退货，生产原料问题的不足，导致鱼精蛋白产量减少、甚至停产。他说，长期以来，鱼精蛋白的定价就不高，药厂利润微薄，生产积极性自然不高。
在孙宏涛看来，药价虚高的确是老百姓看病贵的一个原因，国家应该加大力度，打击药品价格的飙升。但同时，也应该清楚地看到，一方面，药品价格的飙升主要是在流通领域发生的，药品经销商的层层转包、层层加价是其根本问题。国家应有的放矢，擒贼先擒王。另一方面，对于药价的打压不能一刀切，像这样关系民生、但价格低廉的必需药品，国家物价部门应将政策有所倾斜，网开一面。而且，这样药品的生产应该像军需品的生产一样，纳入国家强制要求生产的范畴，合理提高药品价格，既满足民生需要，也保证生产厂家的合理利润。 文/记者胡珉琦
Underground pipeline management
北京普查城市地下“生命线”
近日，北京市启动对全市地下管线的全面普查，纵横交错9.3万余公里的地下管线，每一条的材质、位置、粗细、服役年限都将被详细建档，记录在案。今后，本市每年都将对地下管线进行普查，以实现对地下管线的精细管理。
为何要对这些地下管线进行普查呢？“城市的运行基础就是由这些地下管线构成的，可以说是一个城市的生命线。”中国社科院城市发展与环境研究中心主任牛凤瑞解释，通过对地下管线的普查可提高管线的工作效率，防患于未然。同时地下管线的普查也助于调整城市的安全系数，以防汛来说，由于受到投资等多方面的限制，可能一个城市之前的城市防汛指数只能做到10年一遇，而通过对地下管线的普查，政府就会有一个合理度的把握，可根据需要达到50年一遇或是百年一遇的标准。
当然，牛凤瑞还强调，其实各个地下管线的分属机构能够做到资源的整合，统一管理才是进行城市规划最有效的途径。 文/记者 谭娜
Beijing Science Festival
国际大狂欢，科学嘉年华来了！
每年9月的第三周公休日是全国科普日，今年全国科普日的北京主场活动首次采用了西方科学节的形式。一场集科学秀、科普剧、文艺演出、游戏、企业互动于一体的科学嘉年华，9月16日在北京奥林匹克公园开幕。
北京科学嘉年华持续8天，其中包括30场科学秀表演、50场科学剧演出、70个科普项目展示、100部科普影片展映。“热带雨林大冒险”主题迷宫、“节能节水环保产品”、德国创意科普实验秀等主题活动，成为了嘉年华的亮点，吸引了近30万观众互动体验。
据了解，北京科学嘉年华采用了国际化的时尚科普形态。包括德国、新加坡、日本、新西兰、南非、英国、美国等30多个国家，携带了140多个科普体验项目前来捧场。 文/记者 吕择
China's second lunar probe, the Chang'e-2
“嫦娥”万里发信息，卫星数据传地球
今年81岁的中国药学家屠呦呦教授近日获2011年拉斯克奖。这是至今为止中国生物医学界获得的世界级最高大奖。拉斯克奖素有“美国的诺贝尔奖”之美誉，是美国最具声望的生物医学奖项，也是医学界仅次于诺贝尔奖的一项大奖。迄今为止，共有超过300人次获得拉斯克奖，其中有80位获奖者后来获得了诺贝尔奖，所以该奖项也被看做诺贝尔奖的“风向标”。
“今天上午集团刚刚开了内部会议，部署了鱼精蛋白的生产和供应，预计接下来每个月供应可以提高到8万~9万只。”9月13日，上海医药总裁徐国雄表示。
被卷入“鱼精蛋白断货风波”的上海第一生化药业，是上药集团的全资子公司。从今年开始，第一生化药业与过去的原料供货商终止合作，原料供应的短缺直接导致市场上的鱼精蛋白供应告急，很多心脏病手术被迫停摆。
徐国雄告诉记者，目前全国有3家企业手握鱼精蛋白的生产批文，但另外2家两三年前就已经停止生产这个品种，目前全国只有上海第一生化一家还在供应。
独家生产供应告急
鱼精蛋白是从鱼类新鲜成熟中提取的一种碱性蛋白质的硫酸盐，用于因注射肝素过量所引起的出血及自发性出血，尤其对于心脏手术中采用了体外循环的患者而言，术后必须使用，且无其他药品可替代。
从2011年上半年开始，南京、武汉、南通等地鱼精蛋白纷纷告急，由于这个急救药的缺货，一些心脏手术不得不停做，医院和患者四处求药无门。
国家药监局相关人士表示，目前国内只有三家公司拥有鱼精蛋白的生产批文，分别是“上海第一生化药业有限公司”、“悦康药业集团北京凯悦制药有限公司”以及“多多药业有限公司”。目前的缺货状态下，除了协调这些企业进行生产，对于其他公司提出生产报批要求的，也会紧急办理，在流程上给予“绿色通道”支持。目前拥有鱼精蛋白生产批文的三家企业中，北京悦康药业集团已在药监部门的协调下开始生产。
“鱼精蛋白的生产周期大概半个月，我们的第二批货本月16日左右开始生产，月底可以上市供货。”悦康药业集团销售部一位工作人员称，第一批货已经全部配发北京地区。
为什么会出现全国供应短缺？
“要货太集中了。只有我们一家药厂还在继续生产这个药，但从今年开始我们换了原料供应商，需要有3个月的质量稳定考察期，所以耽误了供应。”徐国雄告诉记者，过去，第一生化的原料药采购自青岛一家药厂，但从今年开始，出于安全监管和降低成本的考虑，第一生化药厂开始自己供应原料。而按照新的药典标准生产，对原料的标准和生产工艺的要求都更高，又有3个月的考察期，受限原料因素第一生化的鱼精蛋白产量锐减。
他告诉记者，2010年第一生化共向市场投放了120万只鱼精蛋白，而今年1到8月份，总共只供应了20万只，巨大的落差直接导致市场供应告急。
“很多医院院长打电话来要我们供货，我们也很着急。”徐国雄告诉记者，虽然鱼精蛋白的利润微小，在盈亏边缘，但公司不会放弃生产。“这个特殊时期过去后，我们马上就能恢复每个月8万到9万只的供应量，开足马力生产，基本能满足全国市场的需求。”
尴尬的廉价老药
鱼精蛋白在心脏手术中是急救用药，为何全国只有一家药厂生产？其中是否另有隐情？
“这个药是老药了，十几年的政府定价都没有变动过，企业都是逐利的，没利润肯定就不愿意生产。”一位药业人士坦言，这个药绝对用量又不大，对于一个大药厂来说，药价不高，利润太低，而用量又上不去，物流成本、原材料价格上涨，企业难以承受。“从市场和医学的角度，鱼精蛋白属于用量不会大，但又必须准备、紧急情况下确实需要的药物。”
徐国雄告诉记者，一只鱼精蛋白的出厂价为8.5元，而招标价是11.5元，第一生化生产这个药物，利润微薄。“这个药十几年前就是这个价格了。”
对于另2家拿到批文的企业，由于药价太低，这2家企业早在3年前就已经停止生产该药物。过去3年间，全国市场上的鱼精蛋白全部由第一生化供应。
廉价老药在市场供应短缺甚至直接消失的例子并不鲜见，此前上海通用药业生产的盐酸金霉素眼膏也遭遇了药店缺货，无处购买的窘境。
悦康集团旗下悦康源通医药的副总经理吕久辉表示：“北京市场上的鱼精蛋白10月份就能到货。这样的断货的例子还很多，很多没有替代品的药市面上都难以找到，鱼精蛋白只是被媒体关注的个案。”
2009年，北京药品最近一轮招标之时，曾对短缺药品专门列出清单单独组织招标。这份“短缺药品目录”上，除了血制品等老面孔外，维C银翘片、去痛片、红霉素等最普通药品都纷纷上榜，鱼精蛋白和治疗亚硝酸盐中毒的特效药“亚甲蓝”也赫然在列。
上述目录由北京市各医院根据2008年临床使用中收集的数据而制定，这些品种在全国也大多属于短缺品种。
尽管其中大部分已经列入国家基本药物目录，体现了政策的倾斜力度，但实际操作中，这些药物还是不好卖。
以红霉素为例，国家基本药物目录中，100片规格的红霉素最高限价为17.4元，甘肃目前的招标价最低为9.5元，安徽为9.1元。此前大连美罗的红霉素产能占全国的90%左右，2009年因搬迁索性停产，剩一些中小企业在苦苦为继。
江苏、北京等省市对廉价、短缺的药品都采取了专门的招标通道，但降价的大环境下，部分药品还是因无利可图而断供。
反面的例子则是，以肝素纳这个与鱼精蛋白配套用药的品种为例，在2009年曾经也出现供应短缺严重断货，2010年国家将这个品种的药价提高了40%左右，立刻有更多的药厂介入了生产环节。
徐国雄指，企业也在申请适度提高价格，但“这个过程很漫长。”事实上，医院和药店也都更乐于出售高价药物，销售使用这些换代新产品，整个利益链相关环节都能获得更大利益，患者却只能被迫为高价药买单。
【摘要】 目的：构建汉坦病毒（hantavirus， hv）单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1a8 scfv/cκ/p基因的原核表达载体，蛋白经表达后纯化并进行1a8 scfv/cκ/p融合蛋白的功能活性鉴定. 方法 ：采用pcr的方法，扩增单链抗体基因1a8 scfv和1a8 scfv/cκ，将鱼精蛋白片段的编码序列设计入扩增引物，获得hv单链抗体/鱼精蛋白片段的融合蛋白基因1a8 scfv/cκ/p. 将获得的重组基因克隆入原核表达载体pet32a，并在大肠杆菌bl21中表达. 表达产物经sds?page和western blot鉴定，用ni?nta螯合层析介质进行纯化. 采用elisa方法 分析 1a8 scfv/cκ/p融合蛋白与hv抗原的结合活性，凝胶迁移阻滞实验检测1a8 scfv/cκ/p融合蛋白与质粒dna的结合活性. 结果：成功构建了hv 1a8 scfv/cκ/p融合蛋白基因的表达载体，在大肠杆菌中实现了可溶性表达. 通过功能活性测定，纯化的1a8 scfv/cκ/p融合蛋白既保持了与hv抗原的结合能力，同时又具有与核酸的结合活性. 结论：构建和表达的hv 1a8 scfv/cκ/p融合蛋白具有hv抗原结合活性和dna结合的活性.
【关键词】 汉坦病毒; 单链抗体; 鱼精蛋白; 融合蛋白; 靶向输送
0引言
选择性地转移基因到体内各种类型细胞和器官，可以对人类疾病尤其是肿瘤和病毒感染性疾病进行靶向 治疗 ［1］. 鱼精蛋白（protamine，p）是一种碱性蛋白，截短至22个(8～29)富含碱性氨基酸片段仍然保留着核酸结合功能. 单链抗体（single chain，scfv），分子小，穿透力强，免疫原性低，有导向载体功能. 我们构建和表达一种由汉坦病毒（hantavirus，hv）白的单链抗体（1a8 scfv）和鱼精蛋白片段组成的融合蛋白1a8 scfv/cκ/p， 以期获得具有抗原结合活性和核酸结合活性的1a8 scfv/cκ/p融合蛋白.
1材料和方法
1.1材料1a8vh?lgl/w6e和3g1vh?lalckgshis 质粒、vero?e6细胞、汉坦病毒76~118株(第四军医大学微生物教研室)；pet32a载体，大肠杆菌dh5α，bl21(de3)，（第四军医大学生物化学与分子生物学教研室）；限制性内切酶、连接酶（takara公司）；iptg（promega公司），质粒小量提取试剂盒、胶回收试剂盒（合肥优晶生物技术有限公司）；hitrap ni?nta螯合层析介质(invitrogen公司)；hrp?6 his tag antibody（abcam公司）；ecl化学发光试剂盒、bca蛋白定量试剂盒（pierce公司）.
1.2方法
1.2.1pcr引物和鱼精蛋白片段序列设计扩增1a8 scfv和1a8 scfv/cκ基因的引物，同时将鱼精蛋白片段的序列设计入3′ 端引物. 扩增1a8 scfv的引物， s5: 5′?tttgaattccaggtccagctgcaggag tc?3′；s3：5′?tttgtcgacacgtttgatctcgagct?3′；扩增1a8 scfv?cκ序列的引物， cκ3：5′?tttgtcgacacactctcccctgttgaagc?3′ ；采用引物二次延伸的办法在cκ之后引入编码鱼精蛋白片段的寡核苷酸序列（双下划线部分），其引物如下：p1：5′?ttgtctctggcggtaatatctgctccggctctggctgcgacactctcccctgttgaagc?3′，p2：5′?tttgtcgacgctccgcct ccttcgtctgcgacttctttgtctctggcggtaatatc?3′；在两端引物中分别引入ecor i和sal i酶切位点（单下划线部分），引物由北京奥科生物技术有限公司合成.
1.2.21a8 scfv/cκ/p融合基因重组表达载体的构建及鉴定分别以质粒1a8vh?lgl/w6e和3g1vh?lalckgshis为模板，通过限制性酶切和pcr方法克隆1a8 scfv/cκ/p基因，将其克隆入pet32a质粒，转化大肠杆菌dh5α后，筛选阳性克隆，酶切鉴定，对酶切鉴定正确的克隆进行测序，将测序正确的质粒命名为pet32a?1a8 scfv/cκ/p.
1.2.31a8 scfv/cκ/p融合基因的诱导表达及鉴定将正确的重组质粒pet32a?1a8?scfv /cκ/p转化大肠杆菌bl21，挑取单克隆，接种于含有氨苄青霉素的lb培养基中，37℃过夜培养，次日以1∶100接种，37℃培养至a600 nm达0.6左右，加入iptg终浓度为0.2 mmol/l，30℃诱导培养6 h，取5 ml未诱导及诱导菌液离心收集菌体，以200 mmol/l tris·hcl (ph 8.0)重悬，超声裂菌后离心，取少量上清，加入等量2×sds loading buffer，沉淀重悬于适量1×sds loading buffer，煮沸5 min,离心后取上清进行sds?page分析，凝胶薄层扫描分析蛋白表达情况. 同时对表达产物进行western blot鉴定，蛋白样品经sds?page分离后电转移至硝酸纤维素膜，以脱脂奶粉室温封闭，依次加入鼠抗6 his mab（1∶400稀释，4℃孵育过夜），hrp标记的山羊抗小鼠igg(1∶5000稀释，室温1 h)，用化学发光试剂盒于暗室条件下x光片感光显影.
1.2.4表达产物的分离纯化取100 ml诱导菌收集菌体，用200 mmol/l tris·hcl (ph 8.0)重悬，冰浴中超声6次（每次2 min，间隔10 s），4℃，12 000 g离心20 min，用镍?次氨基三乙酸(ni2+?nta)螯合层析介质4℃旋转结合过夜，咪唑洗脱缓冲液洗脱. 各取少量洗脱液进行sds?page分析.
1.2.5elisa检测融合蛋白的抗原结合活性胰酶消化vero e6细胞，调整细胞密度为2×108/l，以100 μl/孔加入96孔细胞培养板，37℃，50 ml/l co2培养箱中培养24 h，加100 μl汉坦病毒76~118株（107 tcid50/l），37℃吸附90 min. 加入200 μl/孔含20 ml/l胎牛血清的dmem培养液，37℃，50 ml/l co2培养箱中培养7 d. 待细胞长满孔板，去培养液， 用2.5 ml/l戊二醛固定10 min. 在孔中分别加入100 μl不同稀释梯度的蛋白样品， 37℃孵育1 h. 加入鼠抗6 his mab (1∶10 000稀释)，37℃孵育1 h. 加入底物液100 μl/孔，37℃，10 min显色，终止反应后测定各孔a492 nm值.
1.2.6融合蛋白的核酸结合活性检测采用凝胶迁移阻滞实验. 将1 μg线性化质粒dna分别与不同量的1a8 scfv/cκ/p融合蛋白于0.2 mol/l nacl溶液中室温孵育30 min，10 g/l琼脂糖凝胶电泳分离，观察结果.
2结果
2.1重组表达载体的构建及鉴定pcr分别扩增出长度为750 bp的hv 1a8 scfv基因片段、1068 bp的1a8 scfv?cκ片段和1134 bp的1a8 scfv/cκ/p片段，片段的大小均与预期长度一致（图1a）. 1a8 scfv/cκ/p基因克隆入pet32a载体，克隆的酶切鉴定正确(图1b). 核苷酸序列测定结果正确.
a1： dl2000 marker；2：1a8 scfv基因的pcr产物；3：1a8 scfv/cκ基因的pcr产物；4：1a8 scfv/cκ/p基因的pcr产物. b1： dl2000 marker；2： pet32a?1a8 scfv；3： pet32a?1a8 scfv/cκ； 4： pet32a?1a8 scfv/ cκ /p（ecor i, sal i）.
图11a8 scfv/cκ/p基因的pcr扩增产物和其重组质粒的酶切鉴定
2.21a8 scfv/cκ/p融合蛋白的诱导表达及鉴定与空载体相比，经0.2 mmol/l iptg诱导后细菌裂解上清及沉淀中均出现mr约为60 000的新生蛋白带，与预期的1a8 scfv/cκ/p融合蛋白的大小相符. 光度扫描显示，1a8 scfv/cκ/p融合蛋白的可溶性表达量占上清蛋白的30.9%（图2a）. 经western blot 分析 证实，新生蛋白带即为带有6 his标签的1a8 scfv/cκ/p融合蛋白，表明目的蛋白表达成功，且以可溶性表达为主（图2b）.
a1：低分子质量蛋白marker； 2：pet32a空载体诱导全菌； 3：pet32a?1a8 scfv/ cκ/p未诱导全菌；4： pet32a?1a8 scfv/ cκ/p诱导全菌；5：pet32a?1a8 scfv/cκ/p诱导菌裂解上清；6： pet32a?1a8 scfv/cκ/p诱导菌裂解沉淀. b1： pet32a?1a8 scfv；2： pet32a?1a8 scfv/cκ； 3： pet32a?1a8 scfv/cκ/p.
图21a8 scfv/cκ/p融合蛋白的sds?page及western blot分析
2.31a8 scfv/cκ/p融合蛋白的纯化sds?page显示1a8 scfv/cκ/p融合蛋白获得有效纯化，经薄层扫描分析，其纯度达到86%以上(图3). 经bca法测定蛋白浓度，纯化的1a8 scfv/cκ/p融合蛋白的平均浓度为400 mg/l.
1： 低分子质量蛋白marker；2： 与ni?nta结合前的细菌裂解上清； 3： 与ni?nta结合后的细菌裂解上清； 4： 100 mmol/l咪唑洗脱液；5： 200 mmol/l咪唑洗脱液； 6： 300 mmol/l咪唑洗脱液； 7： 400 mmol/l咪唑洗脱液； 8： 500 mmol/l咪唑洗脱液.
图31a8 scfv/cκ/p融合蛋白的纯化和sds?page分析
2.41a8 scfv/cκ/p融合蛋白的抗原结合活性检测elisa检测结果发现，随稀释梯度的逐渐增加，1a8 scfv/cκ/p融合蛋白与hv抗原的结合活性也减弱，提示表达与纯化的融合蛋白能够与hv抗原特异性地结合. 与1a8 scfv相比，1a8 scfv/cκ/p仍保持良好的hv抗原结合活性（图4）.
图41a8 scfv/cκ/p融合蛋白抗原结合活性的elisa检测
2.51a8 scfv/cκ/p融合蛋白的核酸结合活性检测凝胶迁移阻滞实验结果显示，1a8 scfv/cκ/p融合蛋白与质粒dna作用后，可以使dna的迁移速率变慢，并且随着1a8 scfv/cκ/p融合蛋白量的增加，dna的迁移速率也随之越慢，表明该融合蛋白能够结合dna分子（图5）.
1： marker dl2000； 2： 1 μg质粒dna；3： 1 μg质粒dna+10 μg 1a8 scfv；4： 1 μg质粒dna+10 μg 1a8 scfv/cκ； 5： 1 μg质粒dna+1 μg 1a8 scfv/cκ/p；6： 1 μg质粒dna+4 μg 1a8 scfv/cκ/p； 7： 1 μg质粒dna+10 μg 1a8 scfv/cκ/p.
图5凝胶迁移实验检测1a8 scfv/cκ/tp融合蛋白与dna的结合活性
3讨论
sirna等小分子的临床 应用 所面临和需要克服的一项难题是基因药物的靶向输送. 使用抗体介导的靶向输送策略可能更具效力［1］.
scfv将抗体重链可变区和轻链可变区通过一段柔性短肽连接起来. 由于只保留了可变区，免疫原性大大降低，因而成为导向药物的理想载体［2］. scfv可与其他效应分子融合构建成多种具有双重功能的分子，最常见的如免疫毒素、放射性同位素标记的scfv等［3-4］. 鱼精蛋白是富含碱性氨基酸的碱性蛋白［5］. 鱼精蛋白氨基酸8～29片段，依然保留着与核酸的结合作用 ［6］. 我们将hv 白的1a8 scfv与鱼精蛋白片段在基因水平融合，为了避免两个结构域之间空间结构的相互 影响 ，在两个基因之间插入了一段轻链恒定区编码序列，以期获得具有靶向性和核酸输送性能的双功能活性融合蛋白1a8 scfv/cκ/p.
我们将重组的表达载体转化大肠杆菌bl21， 1a8 scfv/cκ/p融合蛋白以可溶性表达为主，表达量占30.9%以上. 采用ni2+?nta螯合层析介质成功的从表达菌裂解上清中纯化出了高纯度的融合蛋白. 融合蛋白功能活性的检测结果表明，其抗原结合活性并没有明显的变化，而且，1a8 scfv/cκ/p具有明确的核酸结合活性. 该融合蛋白的成功表达和其功能活性的特点，使其有望成为hv感染的基因 治疗 有效的靶向输送工具.
【 参考 文献 】
［1］ song e, lee sk, wang j, et al. rna interference targeting fas protects mice from fulminant hepatitis ［j］. nat med, 2003, 9(3) ：347-351.
［2］ suzuki m, takayanagi a, shimizu n. targeted gene delivery using humanized single?chain antibody with negatively charged oligopeptide tail ［j］. cancer sci, 2004, 95(5)：424-429.
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［5］ junghans m, kreuter j, zimmer a. antisense delivery using protamine?oligonucleotide particles ［j］. nucleic acid res, 2000, 28(10): e45.
自1999年以来，我院进行体外循环心脏手术52例。其中分别出现鱼精蛋白过敏6例，抑肽酶过敏3例，均经抢救治疗脱险，平安回病房。但同时出现鱼精蛋白和抑肽酶过敏仅1例。现分析如下：
1病例介绍
患者，女，52岁，二尖瓣置换术。患者按常规采用全身复合麻醉气管内插管，全身肝素化为3 mg/kg。预充液：复方氯化钠、甘露醇、碳酸氢钠、肝素等CPB前在预充液中一次性加入抑肽酶200 KIU。体外循环停止时用鱼精蛋白中和肝素，肝素与鱼精蛋白的比例为1∶1.5。
转流后动脉压快速下降为35 mmHg，转流中氧合器储血室液面短时间内快速下降为750 ml，红细胞压积呈动态性升高伴有皮肤潮红和皮疹，并同时出现室颤，考虑为抑肽酶过敏。心脏复跳后用鱼精蛋白中和肝素时再次出现血压下降，手术直视下见心率变慢变弱，心脏充盈扩张，考虑为鱼精蛋白过敏。立即给予扩容，适当提高灌注流量，降温，应用肾上腺素、钙剂、组织胺受体拮抗剂及皮质激素，减慢给鱼精蛋白的速度并电极除颤复律等多项措施后，血压逐渐恢复正常，氧合器液面逐步稳定。
2讨论
2.1体外循环手术中，由于同时应用的药物比较多，包括物、抗生素、抑肽酶、鱼精蛋白、血液制品及体外循环预冲液等，这些药物进入体内后往往成为新的抗原，若机体此前接受过同种的或化学性质相似的致敏原就会导致抗原抗体的相互作用而引起过敏。但引起过敏反应的主要为抑肽酶和鱼精蛋白。
2.2抑肽酶是一种天然的多肽丝氨酸蛋白酶抑制剂。它抑制纤溶酶、激肽释放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶，既可阻断内源性凝血通路，又保护了外源性通路，既有血小板保护作用，又有全身抗炎作用，它能减少体外循环产生的炎性酶，增加抗炎细胞因子释放，大大减少失血量。但抑肽酶是生物制品易发生过敏反应，应注意观察及时处理。用药时最好在体外循环开始后使用并坚持先用实验剂量，待稳定后无异常反应再全部注入。
2.3鱼精蛋白是临床上用于中和肝素的常用促凝血药。能消除肝素的抗凝作用，鱼精蛋白本身无抗原性，但鱼精蛋白快速进入血液循环后刺激肥大细胞释放组织胺引起血管扩张、血压下降、心跳减漫减弱。此例患者使用肾上腺素和地塞米松后情况逐渐稳定则符合过敏表现。预防措施：（1）除询问过敏史外，注意二次接触抑肽酶的患者，应常规做抑肽酶皮试，对疑有过敏体质的患者应作诊断试验，术前可用H1受体拮抗药苯海拉明或H2受体拮抗药西咪替丁，从而预防组织胺从细胞释放，有助于预防过敏反应的发生或减轻其症状。（2）使用药物时应认真查对药物的有效期及有无变质、沉淀，避免注射速度过快。体外循环中出现过敏反应，表现常常不典型，使用过程中应注意观察各种仪器检测指标和手术野变化，特别是心率和血压的变化。出现氧合器液面快速下降、低血压、心率减慢及手术直视下心跳减慢减弱、心脏充盈扩张、术野渗血减少等情况应及时提醒医生注意，以免延误治疗。
收稿日期：2007-02-13
《爱情买卖》 “便宜药版”
2011年，一首恶俗的歌曲红遍大江南北，它就是《爱情买卖》。“爱情不是你想卖，想卖就能卖。”主唱慕容晓晓把这首歌演绎得“很欠扁”，但就是因为它虽恶俗却朗朗上口，一夜之间传唱大街小巷、各大K房。2011年上半年，连搜狐老总张朝阳都翻唱了《爱情买卖》“甩饼版”，借以讽刺台湾女星大S与京城四少之一的汪小菲的婚礼。
谁知到了下半年，《爱情买卖》这一场恶俗的“瘟疫”，竟从娱乐圈穿越到医药界。
原本一直隐在公众视线之外，藏身药店最被忽视的角落的便宜药，因为一场场全国声势浩大的“寻找便宜药”事件，高调重出江湖，现身于大众视野之内。其中，最有娱乐精神的，当属鱼精蛋白。
随着鱼精蛋白的迅速蹿红，《爱情买卖》“便宜药版”热辣上线，更强势挤入音乐风云榜前十位，成为继原版、“甩饼版”之后又一畅销新版本：
“心脏要手术，缺鱼精蛋白；医院长缺货，全国无处买。记者来追问，为何没药卖；只有一家厂，做了不够卖。
当初顾客嫌太贵，太贵就不买。政府把价降下来，药店不肯卖。药店不卖就不卖，你想买也没得买。有些药物很奇怪，有钱没处买！”
这首歌在朗朗上口之余，也让人如坠云里雾里。药物、药店、药厂、医院、医生……这其中究竟是个什么关系？
狗血剧情大上演，年度最佳音乐剧，非《正在消失的便宜药》莫属。不赚看客眼泪，不赚点击量，不插播广告，不做软广植入（充分响应广电总局的铁腕号召）。就凭这些年发生在便宜药身上的那些真实故事，就能演出一部新版的《金枝欲孽》，让你看得生生将指甲掐入肉里。
别以为那些是遥远的事儿，是肥皂剧才有的情节，它可能随时影响你，影响我，影响我们每一个人。
《正在消失的便宜药》在2011年受到热烈追捧。究竟有哪些经典音乐？哪些经典镜头？请随着镜头，跟着耳熟能详的歌声，让它们再一一回放在大家的视线里。
《“心”有独钟》
“单单对你‘心’有独钟，没有了你，心脏手术没得做。”
首先一定且当然是鱼精蛋白。作为心脏手术必需药物，可谓“心”有独钟。
它的走红虽是意外，但绝非偶然。
2011年7月份，炎热的季节，北京安贞医院的李香兰（化名）排队等待做心脏瓣膜置换手术，一等就是两个月。因为医院的心脏手术必需药物――鱼精蛋白一直缺货，安贞医院的绝大多数心脏外科手术被迫搁置。不仅仅是李香兰，也不仅仅是安贞医院，更不仅仅是北京，全国各大医院的鱼精蛋白库存严重告急。心脏手术独门药物鱼精蛋白，一针难求。
全国各大媒体纷纷参与到“寻找鱼精蛋白”这一行动中，对事件进行了深度追踪报道。随着越来越多媒体参与，鱼精蛋白名声大噪，鱼精蛋白的祖宗三代都被人肉出来了。
最终牵出的事实却让众人哗然：鱼精蛋白由于价格低廉，利润过低，全国只有一家药厂生产，供过于求。那段时间该厂在进行新的原料标准和生产工艺的考察，因而暂停了该药的生产，没想到引发了一场全国鱼精蛋白荒，连该厂老总都不知道自己原来竟是全国唯一生产厂商，而且这次的药物之荒与全国轰动都是他们始料未及的。
这一场“寻找鱼精蛋白”运动，可以说是引发了一场医药界的“海啸”，由它掀起的社会话题一波接着一波，并带来更多深层的思考。鱼精蛋白奇缺的原因、背后的故事、所属管理部门之间复杂的关系链，被一一解构分析，让官方也不得不开始关注鱼精蛋白奇缺现象所折射的深层问题。
尘埃落定：李香兰的儿子辗转打听到鱼精蛋白“黄牛党”的消息，每支炒到了600元，是医院公布价格的300倍！医生劝她慎重考虑，怕药品来源不明，有质量问题。但李香兰在犹豫，因为她不知道这样等待的日子还要持续多久……
最终，在官方干涉下，几家厂家恢复了对鱼精蛋白的生产。李香兰们终于等到了他们心脏手术需要的那支药。
解说：鱼精蛋白详解
鱼精蛋白是只能够从鱼类新鲜成熟的中提取的一种碱性蛋白质的硫酸盐，抗凝剂用于因注射肝素过量所引起的出血。由于只能从适宜的鱼类中提取，而不能进行化学合成，因此产量受限。
卫生部全国合理用药监测系统专家孙忠实披露，鱼精蛋白在临床上使用了50多年，蛋白提取工艺并不难，而且主要原料是海鱼，在我国从来不缺。但是根据国家食品药品监督管理局数据库显示，我国有三家公司拥有鱼精蛋白的批文，但截至2011年，我国仅有上海第一生化药业有限公司一家生产鱼精蛋白，并于2011年7月暂时停产，因此造成全国鱼精蛋白一针难求的窘迫现状。
《神啊，救救我》
“神啊，救救我吧。等了好久了，一支药都没有。病危是可怜的，如果没药救，人生是灭亡的……”
又是注射针剂，又是只要2元多一支，只不过主角由鱼精蛋白换成了复方磺胺甲唑注射针剂。李香兰们还能够等上两个多月而暂无风险，然而躺在儿童医院ICU病房的6岁孩子罗森（化名）却要等不下去了――他在气管插管下苦苦求生，等待那一针对他而言的救命药。而他的家长手中握着的是医院下达的病危通知单。
罹患白血病的罗森在化疗中期继发感染了卡氏肺囊虫，复方磺胺甲唑是对抗这种感染的特效药。虽然也有其他替代品，但复方磺胺甲唑的治疗效果是最佳的。然而这药太便宜，已经没有什么厂家生产了。
上海找不到这种药物。亲属们开始在志愿者服务网站发帖求助。无数志愿者与网友关注此药的寻找过程，该帖被转载到各大网站。最终，志愿者们发现：江苏兴化有厂家生产过这种药物。大家迫不及待跟该厂家联系，得到的答案却是，已经没有这种药物的库存。
几经辛苦之下，该厂家帮忙找到了当地一家药店还有复方磺胺甲唑……
家属跪地，医生叹息
其实，最初让人们对便宜药这一领域产生关注的，是新斯的明针。它被医生称为治疗重症肌无力病人和抢救危重症肌无力病人的经典药。这种药当时价格更便宜，才0.63元！实在太便宜了，难逃渐渐消失的命运。曾经有病人家属跪在医生面前，请求医生给她的孩子一针新斯的明，但医生也无能为力，只能扼腕。
一药天堂，一药人间
同样是中毒，因为有药没药的区别，让生命有了不同的结局。
2011年7月，贵州的李兰兴被毒蛇咬伤。家属奔走于贵阳市各大医院，寻找解毒药――抗蛇毒血清，始终无果。最终通过微博了“寻找抗蛇毒血清”后，才寻获救命药。
而在2010年1月，乌鲁木齐的张莹父母吃了自制臭豆腐而导致肉毒杆菌中毒。奔波于乌鲁木齐各大医院，解毒药肉毒杆菌抗毒素却始终未见踪影。最终，张莹只能眼睁睁看着她的双亲含恨离世……
《你快回来》
“没有你，时间寸步难行；我留在医院，等一个奇迹。黑夜里，祈求希望快来临。只有你，给我生命的希冀……
“你快回来，我一人承受不来；你快回来，生命因你而精彩！你快回来，把我的希望带回来，别让我的心苦苦等待……”
一个个镜头鲜活触目，一首首歌曲震撼人心。《正在消失的便宜药》就此戛然而止，而关于便宜药的故事还没有讲完。
讨 论
重组人胰岛素应用于临床以来，胰岛素过敏的发生率下降到1%左右，而胰岛素类似物的过敏更是罕有报道，且多数为1型变态反应，即于注射后的数分钟出现皮疹，数小时消退。上述病例分别在应用诺和灵30R及诺和锐30后出现过敏反应。诺和灵30R主要成分为30%可溶性胰岛素、70%低精蛋白锌胰岛素、硫酸鱼精蛋白及甘油等。诺和灵30R皮下注射后，以六聚体形式存在，可在局部皮下形成较大分子聚合物，产生免疫原性，导致过敏反应。该病人在注射诺和灵30R2个月后首次出现注射处皮疹，其特点为：注射2小时左右出现，3天消退，根据其特点，考虑为IV型变态反应。
门冬胰岛素是人胰岛素B28位的脯氨酸被天冬氨酸取代所形成的胰岛素类似物，其多以单体形式存在，易迅速入血发挥作用。诺和锐30主要成分是30%可溶性门冬胰岛素、70%精蛋白门冬胰岛素、硫酸鱼精蛋白等。其中具有免疫原性的物质为门冬胰岛素和鱼精蛋白。门冬胰岛素作为异种蛋白，可以刺激机体产生抗体，发生免疫反应［1］。
值得注意的是，胰岛素制剂中的鱼精蛋白也是引起过敏反应的因素。鱼精蛋白是一种富含精氨酸(大约67%)的多阳离子、强碱性多肽，能延缓皮下注射胰岛素的吸收。其毒性反应有快速给药反应型、过敏反应型及致命肺血管收缩型［2］。临床表现有极大的个体差异，有以心血管反应为主，也有以血液系统病变为主。有资料显示，接受结晶型鱼精蛋白胰岛素治疗的糖尿病患者，53%体内存在鱼精蛋白IgE抗体［3］。因此在用中效或长效胰岛素前，要详细了解病人过敏史，对鱼类过敏者，尽量不用含鱼精蛋白的胰岛素。
参考文献
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2 邱立成，王奇，石海燕，等.鱼精蛋白毒性反应的防治.武警医学，2006，17（7）：535-538.
出生不到8个月的果果患上婴儿痉挛症，孩子母亲带着果果前往省儿童保健院进行治疗。医生说，用注射用促皮质素（ACTH）是最有效的治疗措施，但医院没药，很多都是病人自己想办法买药。打电话向多家医院询问无果后，孩子母亲将求助信息发到了微信朋友圈。
看到信息后，武汉协和医院的陈医师马上在医院内部系统搜药，也无货。他随即转发求助信息，多方寻找发现武汉基本无药，而且全国多地相熟的医学界人士都反映各自医院也无药。还好，最终有热心人联系得知上海医药集团股份有限公司有药。次日晚上，两盒ACTH连夜送到孩子父亲手中。
原价7.8元 炒到4000元
针对果果事件，ACTH生产厂商上海第一生化药业有限公司发出声明，为便于患者获取有关ACTH的信息，已经设立专线提供有关服务。然而，有记者致电该专线，接线员提供了一个业务员的电话，拨通后，业务员却直接表示没有药。
目前，黑市上的ACTH价格惊人。在一个有关婴儿痉挛症的QQ群里，群成员达到1944人，其中有不少患者家属及“黄牛”。调查发现，在“黄牛”手上，一盒ACTH被炒到4000元，相当于正常价格的500多倍。
“黑市”中的药从哪里来的？一位大型医药公司的销售负责人透露，黑市里流出的真药，绝大部分是“黄牛”通过一些医药公司、医院的渠道弄出来的。业内人士告知，一般是黄牛通过适用这个药的其他病症，将药品开出来，或者跟一些医院的医务人员、医药公司工作人员私下操作获得药品。
不只是ACTH，近年来，不少类似好用的廉价药，如鱼精蛋白、在心脏手术中用来控制血管痉挛的“罂粟碱”等，都曾出现紧缺。
缺失的救命药往往具备4大特点：生产厂家有限，产量少，需求量有限却超过生产量，价格低廉。尽管相关部门对特殊药品有定点生产的相关政策保障，但现实却是在正规渠道这些药仍踪影难觅。
业内人士指出，便宜救命药紧缺的重要原因是价格、分配管制和以药养医的体制存在弊病。在药品价格管制的情况下，药厂生产这类药物长期亏本或者至少不赚钱。
据了解，目前针对一些用量少但临床必需的便宜好用药，国家制定了相关政策来保障，比如定点生产、国家统一购买等，但是缺乏细化指标，缺乏严格监管以及问责制度，使政策并没有得到相应的落实。
“救心药”频喊“救命”
赵女士今年44岁，在一次体检中，她被查出患有风湿性心脏病，两个心脏瓣膜出了问题，一个需要更换，一个需要修补。随后，她住进医院，等待手术。
医生告诉她，因为缺少名为鱼精蛋白的药，手术没法进行。“我好不容易排到床位，不愿意轻意放弃。”赵女士说，她以为过几天就会等来药品。于是，她继续在医院住了下去。然而，半个多月过去，药还是没来，她的心情也越来越差。
据了解，像赵女士一样等药做手术的病人，不在少数。68岁的高先生心脏手术也是没药，等待小半年，手术还是被取消了。在此期间，其家人还去其他医院打听了一圈，希望能借到药。然而，各大医院都说没药。
鱼精蛋白的正式名称为硫酸鱼精蛋白注射液，是从鱼类新鲜成熟中提取的一种碱性蛋白质的硫酸盐，用于因注射肝素过量所引起的出血，在心脏手术结束时，患者需要使用鱼精蛋白解除抗凝。鱼精蛋白是心脏病人做体外循环手术时必需用的药品，且无其他药品可以替代，根据体重不同，每个成年人每次手术要用6～8支药，然而，一段时间以来，这种药品缺货，导致医院多个病人的手术不得不取消。
~精蛋白属于国家定价药品，价格很便宜，十几元钱一支，而且十多年来价格都没有涨过。由于鱼精蛋白没有可替代的药品，一旦出现断供的情况，可能导致心脏手术无法进行。
事实上，一直以来，鱼精蛋白缺货已成了一个全国性的问题。据媒体公开报道的资料显示，浙江、河南、山东和安徽等地均缺货。据介绍，全国每年要做22万例心脏病手术，这个庞大的群体，都是鱼精蛋白的最终使用者。因为缺乏鱼精蛋白，很多病人不得不延迟手术，其结果当然会影响病情发展。
为何鱼精蛋白会缺货？成都一家三甲医院药剂科负责人介绍，鱼精蛋白在国内的生产厂家非常有限，几十年来维持同一售价，在物价飞涨的今天，企业方面生产药品的经济驱动力大大降低，生产已无利可图，当然不愿意再生产了。该负责人称，除此之外，也不排除企业通过“断供”的做法，倒逼国家调价的可能性。
据了解，上海上药第一生化药业有限公司生产的鱼精蛋白，历史上曾有9.1元的供货价；2014年，北京悦康凯悦制药有限公司的供货价格是13元多。
事实上，在5年前，鱼精蛋白就曾出现过大面积缺货，并引起各界关注。后来，药企加紧生产，缺货情况得到缓解。时隔5年，这种价格低廉的手术必需药品再度缺货。
有不愿意具名的院方人士说，之所以缺货，是因为北京的那家企业生产的药品仅供北京地区使用，不再流通到北京之外的区域。因此，所有供药压力全部压在上海的那家企业。该人士还推测，这可能是药品生产企业涨价的前兆。
有媒体记者曾分别致电鱼精蛋白的两家生产企业，北京悦康凯悦制药有限公司公开的联系电话一直无法接通；上海上药第一生化药业有限公司的销售部门则反馈，负责人在开会，无法回答相关问题。
近年来屡屡曝出低价救命药缺货，并不只是上述提到的注射用促皮质素、鱼精蛋白，用于急性和慢性心力衰竭的盐酸环丙沙星胶囊、他巴唑，以及治疗甲亢的甲巯咪唑、麻醉用药氯胺酮等药品也面临紧缺。
有报道显示，甲巯咪唑这种药定价为每瓶4.9元，且该价格是2006年制定的，10年来人工成本上升，但该药价格一直维持在4.9元，使得很多企业生产积极性降低，陆续停产和半停产。2013年时，中国多个城市出现甲巯咪唑片“药荒”，有的城市甚至全城“一盒难求”。
一家医院的麻醉师杨医生表示，麻醉用的氯胺酮也属于紧缺药，但是还没有到“一药难求”的地步。“这种药医院使用量非常少，我们医院一年常备在5支左右，但是一年实际用量仅1～2支。”据他介绍，这种药价格比较低，每支售价在1～2元钱，医院为了缓解该药品紧缺的问题，购买了可替代药品，每支售价在5元钱。
据统计，10年间，有10种廉价药品断了货。
对于缺货事件，业界也有着不同的看法。
一家三甲医院心血管外科主任认为，要从根本上解决缺货问题，行政部门应该进一步放开条件，让更多企业参与到这类药品的生产中来，增大供应量。“当然，这涉及到企业生产资质和能力问题，从根本上解决这个问题需要的时间更长。”他说，在此之前，不妨国家适当放开这类药品的价格，增强企业生产这类药品的积极性，先解决目前最紧要的救心问题。
四川省某政协委员认为，鱼精蛋白的缺货是低价紧缺药的普遍现象与个案的关系。他建议针对低价紧缺药的现状，要发挥药品使用单位和行业协会的作用，他们要积极主动向区域内行政部门（包括卫计委和食药监局）提出建议，指导、扶持敦促低价紧缺药的企业加大生产力度，同时给这类企业提供一些政策的扶持与补贴。当更多企业愿意生产后，再通过行政的杠杆调整，降低它的补贴。
短缺药如何不“短命”
就目前来看，“救命药”存在“缺”与“贵”的乱象。一方面是基本药物、罕见药物的短缺，另一方面则是治疗癌症等疑难杂症的高价药“一药难求”。面对如此之大的用药缺口，黑市贩药、黄牛倒卖从中渔利，10元一支的鱼精蛋白因断货被炒至上千上万元。另外，由于某些国外药物尚未获得国内准入，一些病人和家属冒着触犯法律、中毒、死亡等风险，不惜铤而走险从国外购药。
到底为何这些“救命药”在生命危急关头“拖了后腿”？
价格低廉，药厂生产亏损 复旦大学公共卫生学院卫生经济学副教授刘宝表示，当前，药品定价主要是由国家发展和改革委员会制定基本药物全国零售指导价格，在保持生产企业合理盈利的基础上压缩不合理营销费用。通常，进入《基本药物目录》的药物，需要经过公开招标采购，而价格低、需求量大的药往往竞争激烈。有些药厂为中标，恶意竞争，压低价格。但又因中标价太低，无利润空间，放弃生产，导致一定时期内部分药品短缺。
需求量少，非医院常备用药 北京医院药学部副主任药师张亚同指出，临床上，“救命药”针对的患者通常是罕见病和突发状况的患者，需求量很小。比如，手术用药或某些特殊病用药的患者，较为少见。另外，某些药物原料的短缺也会使医院未能储备充足的药品。像鱼精蛋白，主要存在鱼类（如鲑鱼、鳟鱼、鲱鱼等）成熟细胞核中作为和DNA结合的核精蛋白存在，但提取鱼类有季节性，便限制了原料的供应量。
价格形成机制不够清晰 刘宝指出，2014年5月9日，国家发改委公布《关于改进低价药品价格管理有关问题的通知》，首次取消了政府制定的低价药最高零售价，在日均标准费用内由企业自主定价，扶持了一些该类“救命药”生产企业。不过第二年该政策发生变化，药品最高零售限价政策取消，药品分类采购、医保支付价、医院二次议价等价格形成机制在实践中交错，客观导致价格信号进入一个更加不稳定时期，不利于药品企业生产。
特效药进入国内有时间差 “救命药”以癌症等重大疾病类用药为主，欧美是原研药的主要“阵地”，所以，用于肿瘤靶向和免疫治疗的一些药品目前在大陆均未上市。张亚同解释，国外原研药应用于国内临床，必须根据国人情况做试验，会比国外至少滞后3年，加之受知识产权保护，专利购买费用高，很难尽快引入。正因如此，很多国内患者纷纷到不受专利限制的印度，代购仿制药、海外就医。
“以需定产”才能救命
面对这种状况，国家出台相应政策缓解“救命药”短缺。国家卫生计生委《2016年临床必需、用量小、市场供应短缺药品定点生产企业招标公告》，将9种药品通过招标选择生产企业，为政府办基层医疗卫生机构和公立医院供应定点生产品种，推动恢复生产供应。
专家认为，除了政策上的规范与支持，最重要的还是要“以需定产”，才能保障“救命药”供给的持续性。中国药品流通行业专家王锦霞认为，对短缺药品实行带量采购，明确采购关系，建立合理的价格机制，才能刺激生产，真正地实现供给保障。
其次，要给予企业明确的价格信号。在刘宝看来，政府定点生产、定点采购对缓解短缺态势有一定作用，但从根本来说，企业生产面临困难，与不稳定的价格机制分不开，政府要做的是让价格改革突前、价格信号要准、方向要对，有效引导企业生产和供应决策，才能保持可持续性。
最后，建立短缺药品监测预警系统。刘宝建议，除了已推动的省级短缺药品监测预警系统外，国家药管平台也应加大资金投入，及时汇总全国药品短缺信息，加强与医疗机构、药品生产流通企业沟通，从而有效协调和解决药品短缺问题。
【写在最后】
“救命药”出现药荒，恐慌无奈的不仅仅是这些病患者，而是我们每个人。国务院的《关于完善公立t院药品集中采购工作的指导意见》，明确提出对临床必需、用量小、市场供应短缺的药品，由国家招标定点生产、议价采购，只是，该指导意见缺乏细化指标，缺乏严格监管以及问责制度，使政策并没有得到相应的落实，也因此出现心脏病人排队等药“救心”的窘境。
面对低价“救命药”全国缺货的现实， 国家扶持政策要跟上，应尽快出台相关措施，保证生产和供应。比如国家可设立专门的资金，用于补贴生产廉价“救命药”而亏损的企业，或者对生产廉价“救命药”的药厂给予一定的补偿；同时建立短缺药品供应保障制度，一旦发现某种“救命药”有断货可能，及时启动紧急生产等应急措施，避免药物短缺后才来补救。
前提选好时机
胰岛素适用于所有非2型糖尿病患者，包括1型糖尿病、妊娠糖尿病和特殊类型糖尿病。
对于2型糖尿病患者，也不必等到胰岛β细胞功能完全衰竭再用胰岛素。2010年《中国2型糖尿病防治指南》特别指出，在一定时间内口服药物治疗不达标，即可启动胰岛素治疗。《指南》并强调应该同时针对空腹高血糖及餐后高血糖，补充基础胰岛素与餐时胰岛素，以实现血糖的全面达标。
2型糖尿病患者如有以下情况需胰岛素治疗：①经饮食控制及口服降糖药治疗后血糖未达标；②肝、肾功能不全，严重胃肠道疾患；妊娠期、哺乳期妇女；③合并严重急性或慢性并发症，如酮症酸中毒、非酮症性高渗综合征、乳酸性酸中毒或反复出现酮症；④合并严重感染、创伤、急性心梗、脑血管意外、大手术等应激状态。
对新诊断的2型糖尿病患者提倡短期胰岛素强化治疗，尽快控制血糖到正常范围，以后酌情改用口服降糖药。如遇下列情况，提示患者胰岛功能差，应立即胰岛素治疗：①空腹血糖＞13.9mmol/L（毫摩尔/升）；②餐后血糖＞16.5mmol/L；③糖化血红蛋白＞9%；④糖尿病酮症或酮症酸中毒起病的患者；⑤ “三多一少症状（即多饮、多尿、多食、消瘦）明显的患者。这些患者尽早启用胰岛素强化治疗，有利于解除高血糖毒性，以达到保护胰岛β细胞功能。
必要选对胰岛素
目前，临床主要根据各种胰岛素开始发挥作用的时间特点，将胰岛素制剂分为4类：
短效类 可做皮下、肌肉或静脉注射，起效快但作用持续时间短。短效皮下注射一般在餐前30分钟，注射后约半小时起作用，高峰浓度2～4小时，持续6～8小时。短效（速效）胰岛素是唯一能静脉注射的胰岛素制剂。
中效类（低鱼精蛋白锌胰岛素） 含有鱼精蛋白，胰岛素与鱼精蛋白二者的比例为1:1，呈絮状或牛奶样。中效胰岛素只能皮下注射，皮下注射后吸收缓慢，注射后1小时起效，高峰浓度6～12小时，持续18～24小时。
长效类（鱼精蛋白锌胰岛素） 长效胰岛素和中效胰岛素不同之处在于内含更多的鱼精蛋白，注射后4～6小时起效，高峰浓度4～20小时，持续24～36小时。长效胰岛素由于其作用时间特慢，持续时间长而难确定其满意剂量。
预混胰岛素 指含有短效（速效）和中效胰岛素的混合物，起效快（15～30分钟），持续时间长达16～20小时。市场常见的有30%短效（速效）和70%中效预混（例如诺和灵30R）、优泌林（70/30）和短、中效各占50%的预混（诺和灵50R）等。制剂中的短效成分起效迅速，可以较好地控制餐后血糖；中效成分缓慢持续释放，主要起替代基础胰岛素分泌作用。
关键选好方案
胰岛素治疗需注意个体化，综合考虑患者的病程、胰岛功能、体重、依从性、经济状况、并发症等因素选择胰岛素的种类和方案。治疗中要勤查血糖，成人尽量把血糖控制在“45678”的范围内，即全天血糖≥4.0mmol/L以上，空腹血糖＜5.6mmol/L，餐后7.8＜mmol/L，每3个月做1次糖化血红蛋白检测，力争将其控制在7.0%以下。年纪大一些的，血糖标准可以适当放宽，但空腹血糖也不能超过7mmol/L，餐后血糖宜在10mmol/L以下；使用胰岛素的老年患者，餐后两小时血糖可放宽到15.0mmol/L，糖化血红蛋白小于7.5%，以减少低血糖引起的不良事件。
胰岛素治疗时，胰岛素可以单次、两次、多次注射或连续皮下输注治疗（胰岛素泵治疗），严重高血糖时需要静脉滴注短效或超短效胰岛素，病情好转可胰岛素联合口服降糖药或肠促胰岛素类似物降糖。
口服降糖药加用基础胰岛素治疗 针对口服降糖药加生活方式治疗，糖化血红蛋白＜10%的患者。最常用的是睡前加用长效人胰岛素类似物（主要有甘精胰岛素、地特胰岛素），初始剂量可按0.2U/kg.日起用，监测空腹血糖，根据空腹血糖水平进行基础胰岛素剂量的调整，每次可调整2～4U，每周或每3天调整胰岛素剂量，使空腹血糖达标。