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【关键词】脑蛋白水解物不良反应
【中图分类号】R472.2【文献标示码】B【文章编号】1007-8517(2008)12（B）-0032-01
2008年9月，我们治疗1例注射用脑蛋白水解物致不良反应患者，经精心护理，效果满意。报告如下。
1病例资料
患者男，63岁。因脑出血入院，于9月20日在全麻下行右侧去骨瓣减压脑内血肿清除术，术后入我科。9月24日神志转清，双瞳孔等大等圆，直径2毫米，光反应灵敏，双肺呼吸音清，言语清晰。右侧肢体活动好，肌力六级，左侧肢体无自主活动，肌力一级。患者以前无药物过敏史。9月29日早晨七点测体温36.5摄氏度，脉搏98次/分，呼吸18次/分，血压120/80mmHg。下午一点十分开始静脉注射脑蛋白水解物60mg入生理盐水500ml液，滴速40滴/min，在滴入约50ml时，突发寒战，心悸，呼吸急促，诉胸闷.憋气，后言语不清。呼吸42次/分，测血压140/90mmHg，心率150次/min，全身皮肤未见红斑皮疹。考虑为注射脑蛋白水解物后不良反应，立即停止输入。给予氟美松10mg静推，10%葡萄糖酸钙10ml静推。测体温39.3℃，给予安通定2ml肌注。30分钟后患者胸闷.心悸症状消失，寒战停止，测体温38.4℃，血压130/80mmHg，呼吸18次/min，心率110次/min。未再输入脑蛋白水解物。
2讨论
关键词：脑蛋白水解物；婴儿；新生；脑缺氧；脑缺血
【中图分类号】R722.1【文献标识码】B【文章编号】1672-3783（2012）11-0250-01
我院儿科自2009年3月-2012年3月应用脑蛋白水解物治疗中重度新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）疗效满意，现报告情况如下。
1资料与方法
1.1一般资料：选择2009年3月-2010年3月我院住院84例HIE患儿，均符合薛辛示主编《儿科学》制定的HIE临床诊断依据和分度标准[1]，且均经前囟B超和头颅CT证实，随即分为观察组（脑蛋白水解物）和对照组（胞二磷胆碱）各42例，观察组男24例，女18例，轻度15例，中度17例，重度10例，出生平均体重3.105kg，平均日龄2.1天，异常分娩79.1%，1min Apgar评分
1.2方法：在供氧、保证热卡、止痉、降颅压、镇静等支持疗法及对症治疗基础上，观察组予脑蛋白水解物（陕西开元药业股份有限公司生产，生产批号：20090104）4ml/次，静滴14天为1疗程，对照组给予胞二磷胆碱0.125/次，静滴1次/天，14天为1个疗程。
1.3疗效评定标准。显效：治疗7天面色红润，呼吸平稳，笑声有力，心率>100次∕min，原始反射恢复，肌张力恢复正常，有效：疗程7-14天以上症状体征改善，但未完全恢复正常，无效：治疗14天以上症状体征无变化或继续恶化。
1.4统计学处理：采用x2检验，t检验。
2结果
2.1治疗组显效33例，有效5例，总有效率90.5%，无效4例，其中1例死亡，1例放弃治疗，2例转上级医院治疗，对照组显效22例，有效8例，总有效率71.4%，无效10例，其中6例死亡，5例转上级医院治疗，3例自动出院，两组总有效率比较有显著差异（x2=4.94，p
[关键词] 脑蛋白水解物；苦碟子；血管性痴呆
[中图分类号] R749.1+3[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）06（a）-0089-03
Clinical effect analysis of brain protein hydrolyzate combined sowthistle-leaf ixeris seedling treating vascular dementia
GAO Jie
Cadres Ward,Yanji Hospital of Jilin Provice,Yanji 133000,China
[Abstract] Objective To study the analyze of the clinical effect of brain protein hydrolysate combined with sowthistle-leaf ixeris seedling treating vascular dementia. Methods 64 patients with vascular dementia treated in our hospital from January 2012 to December 2013 were selected as subjects,and they were divided into the two groups,30 patients in the control group were simply treated with sowthistle-leaf ixeris seedling,34 cases in the observation group were treated with brain protein hydrolyzate combined with sowthistle-leaf ixeris seedling,the clinical effect of the two groups were observed. Results The total effective rate (97.1%) in the observation group was significantly higher than that of the control group (76.7%),minimum mental state examination (MMSE) score and activities of daily living e (ADL) score were significantly higher than those of the control group (P
[Key words] Brain protein hydrolysate;Sowthistle-leaf ixeris seedling;Vascular dementia
血管性痴呆（vascular dementia，VD）是指由各种脑血管疾病引起的脑功能障碍导致产生获得性智能损害综合征，属于阿尔茨海默病的常见病因之一[1]。高龄、吸烟、复发性卒中史、痴呆家族史和低血压者等易患VD。根据VD的发病病因、累及的血管及病变脑组织的部位、神经影像学以及其病理学特征可将其分为多梗死性痴呆、关键部位梗死性痴呆、分水岭梗死性痴呆、出血性痴呆、皮质下动脉硬化性脑病等多种类型，临床上因类型的不同而表现出不同的临床症状。本研究选取本院收治的64例VD患者为研究对象，探讨分析脑蛋白水解物联合苦碟子治疗VD的临床效果。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取本院2012年1月~2013年12月收治的64例VD患者为研究对象，所有患者均经临床诊断及相关检查确诊，均符合VD相关诊断标准[2]，MMSE评分[3]为12~24分，所有患者在发生卒中前均无认知功能障碍，均存在脑卒中史，进行头部CT、MR检查均显示有出血灶或脑梗死。将其随机分成两组，观察组患者34例，其中男22例，女12例，年龄78~92岁，平均（84.8±4.3）岁，病程0.5~5.5年，平均（2.4±0.5）年；对照组患者30例，其中男21例，女9例，年龄79~90岁，平均（83.6±4.2）岁，病程0.3~5.4年，平均（2.5±0.3）年。两组患者在性别、年龄及病程等基本资料方面比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
两组患者均给予VD的基础临床治疗及护理，根据患者病情严重程度及相关并发症给予脱水、降脂、控制血糖及血压等治疗。对照组患者在此基础上给予苦碟子治疗，将40 ml苦碟子注射液（通化华夏药业有限责任公司，国药准字Z20025450）加入250 ml生理盐水中混匀给予患者静脉滴注治疗，1次/d；观察组患者在苦碟子治疗的基础上给予脑蛋白水解物治疗，将90 mg脑蛋白水解物注射液（哈尔滨三联药业有限公司，国药准字H20051202）加入250 ml生理盐水中给予患者静脉滴注，1次/d，两组患者均治疗2周为1个疗程。
1.3 观察指标及疗效判定
治疗前后采用MMSE及ADL评分标准[4]对患者认知功能及日常生活能力进行评分。疗效判定标准[5]分为治愈：患者的主要临床症状消失，了解常识性问题，定向较健全，生活能够自理，恢复一般的社会活动；显效：患者的主要临床症状基本消失，能基本正确回答常识性问题，定向基本健全，生活基本能够自理；有效：患者的主要临床症状减轻或部分消失，能基本正确回答常识性问题，生活部分自理，但反应相对较迟钝，存在智力及人格障碍；无效：患者的主要临床症状无改善，甚至有所恶化。总有效=治愈+显效+有效。
1.4 统计学处理
采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P
2 结果
2.1 两组临床治疗效果的比较
观察组的总有效率为97.1%，对照组为76.7%，观察组的临床效果显著优于对照组（P
表1 两组临床治疗效果的比较[n（%）]
与对照组比较，χ2=4.34，P
2.2 两组治疗前后认知功能及日常生活能力的比较
两组患者治疗前的MMSE、ADL评分比较差异无统计学意义（P>0.05）；治疗15 d后，两组的MMSE、ADL评分均有所改善，且观察组的评分显著高于对照组（P
表2 两组治疗前后认知功能及日常生活能力的比较（分，x±s）
3 讨论
VD是由缺血性卒中、出血性卒中和造成记忆、认知和行为等脑区低灌注的脑血管疾病所致的严重认知功能障碍综合征，其以血管或循环病理引起的脑血管疾病作为引起痴呆的唯一的主要原因[6-8]。
VD在治疗上首先要对原发性脑血管疾病进行治疗，如高血压的治疗，临床认为将收缩压控制在135~150 mm Hg范围内能有效改善患者的认知功能；2型糖尿病是VD的一个重要危险因素，给予糖尿病患者有效的降糖治疗对VD具有一定的预防治疗作用；抗血小板聚集治疗，使用阿司匹林等药物治疗能有效改善患者的脑血管循环；使用他汀类药物治疗能有效降低患者的胆固醇含量，对脑血管疾病具有积极的预防作用[9]。在相关临床认知症状的治疗上，使用维生素C、维生素E及银杏叶制剂等对患者进行治疗能起到一定的辅助治疗效果；使用胆碱酯酶抑制剂治疗能有效改善VD的认知症状；对于出现精神症状、睡眠障碍，出现各种不良行为的患者可给予相应的药物治疗。
脑蛋白水解物是一种大脑所特有的肽能神经营养药物，其含有16种游离氨基酸以及少量的低分子肽，能透过血-脑脊液屏障进入患者的神经系统，以多种方式作用于中枢神经[10]，调节和改善神经元的代谢，其能有效加强胆碱酯酶的活性，使腺苷酸环化酶活性提高，促进突触的形成，诱导神经元的分化，对神经元的修复以及生长具有促进作用，从而维持缺氧、缺血、中毒环境下脑细胞线粒体结构的完整性，进一步保护神经细胞免受损害，减轻脑细胞的损害程度。苦碟子注射液是由天然草本植物苦碟子（即败酱草）为原料提取精制而成的注射液，《本草纲目》中记载苦碟子味辛、苦，具有有清热解毒、祛瘀排脓、抗病毒、抗肿瘤、利胆、利尿及促肝细胞再生等功效。现代药理学研究[11]称，苦碟子的主要成分为腺苷、黄酮及异黄酮等。相关实验证实，发挥其药效的主要成分为腺苷类似物，其能有效扩张微细动脉，对组织细胞代谢以及微循环具有良好的改善作用，能有效抑制自由基的产生，防止出现细胞过氧化现象，其能有效降低白细胞自发活化率，对磷脂酶A2的活性具有较好的抑制作用，从而对细胞产生保护作用。另外其能有效抑制血小板聚集，使纤溶酶活性有所提高，减少血栓哦形成，扩张血管作用较好，从而改善脑血液循环。
本研究中，脑蛋白水解物联合苦碟子组患者的总有效率达到97.1%，显著高于单纯苦碟子治疗组的76.7%，这和朱尚峰等[12]相关研究结果基本相符。两组患者治疗后精神认知及生活能力均得到改善，且联合用药组的改善效果显著优于单纯苦碟子治疗组。
综上所述，脑蛋白水解物联合苦碟子治疗VD的临床效果较显著，能有效改善患者的临床症状，提高其生活质量，值得推广应用。
[参考文献]
[1]卡力比努尔・吾买尔，那祖克・玉素甫.尼莫同和脑蛋白水解物注射液治疗非痴呆型血管性认知障碍的效果分析[J].中国医药导报，2013，10（14）：76-77，80.
[2]李朱明.血管性痴呆30例临床观察[J].医学理论与实践，2012，25（10）：1183-1185.
[3]陈宗树.老年血管性痴呆临床治疗进展[J].河北联合大学学报，2013，15（1）：26-28.
[4]蔡敏.血管性痴呆的危险因素及综合诊治的临床分析[J].重庆医学，2010，39（1）：34-36.
[5]张海燕.苦碟子注射液治疗脑梗塞37例的初步观察[J].哈尔滨医药，2007，27（1）：18.
[6]欧阳方，欧阳存.尼莫同联合脑蛋白水解物治疗非痴呆型血管性认知障碍的临床观察[J].江汉大学学报，2012， 4（12）：643-644.
[7]刘双秀，郭和宗，冯书凤，等.通心络胶囊治疗血管性痴呆的临床疗效观察[J].疑难病杂志，2014，11（4）：336-338.
[8]魏慧利，刘亚娴，陈改霞，等.自拟地圣珠水煎剂对血管性痴呆小鼠海马IL-1β、IL-6的影响[J].疑难病杂志，2013， 12（1）：45-47.
[9]贾玉洁，成海燕，于涛，等.老年期痴呆的临床治疗进展[J].中国老年学杂志，2011，31（2）：343-348.
[10]殷军蕾，龙君.银杏叶片联合脑蛋白水解物治疗血管性痴呆的疗效观察[J].中外健康文摘，2011，8（43）：450-451.
[11]张玉红.血管性痴呆中医药治疗进展[J].天津药学，2012， 24（3）：76-78.
[12]朱尚峰，张千，金跃春.脑蛋白水解物联合中药对脑梗死稳定期治疗的研究[J].山东医药，2010，50（28）：101-102.
【关键词】 钩藤；基质金属蛋白酶；脑血管疾病
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.01.023 文章编号：1004-7484（2013）-01-0023-02
脑血管疾病主要包括高血压、脑缺血、脑出血、脑血栓［1］，这一系列疾病致残率及致死率及高，严重危害人民的健康并增加了社会医疗的负担。对于脑血管疾病的进一步诊治，已经成为目前关注的热点问题。国外文献发现，大部分脑血管疾病发病与基质金属蛋白酶的变化有关［2］，基于此，MMPs已成为治疗及预防脑血管疾病的一个新靶点。目前应用于临床脑血管类疾病治疗的药物多为中药制剂，钩藤作为中药防治脑血管疾病的常规药物，其用药历史悠久，费用较低，且已知副作用较少因而被广泛应用于临床中［3］。本实验对钩藤体外抑制基质金属蛋白酶活性进行研究如下。
1 实验仪器与实验材料
1.1 实验材料 钩藤（内蒙古民族大学附属医院中药房提供的道地药材），缓冲溶液应用自治（50mM HEPES，10mM CaCl2，0.2M NaCl，0.05% Brij-3520μM ZnSO4），荧光底物DQ-gelatin（Sigma公司、美国）。
1.2 实验仪器 Bio-Tek ELx-808荧光酶标仪（宝特），DNP-9272-1 电热恒温培养箱（常州恒德仪器制造股份公司）。
2 原理与方法
2.1 实验原理 本实验采用可激发荧光的底物为底物，基质金属蛋白酶降解荧光底物后发荧光，通过荧光酶标仪检测荧光的变化强度并记录数值。如果在反应体系中加入药物的提纯物质，药物提纯产物中的抑制成分与基质金属蛋白酶结合，从而影响荧光底物的反应，使其荧光强度发生变化。
2.2 实验方法
2.2.1 提取物的制备 将钩藤3g放入水中（100摄氏度）持续时间3小时，滤纸三重滤过得沉淀物，应用冻干机处理后，得到钩藤水提取物。配制的药物起始浓度为1g/l每升增加浓度1g，最高浓度为6g/l的水提取物溶液。
2.2.2 抑制活性的测定 将6种浓度的钩藤水提取物分别取1μl与一定量的基质金属蛋白酶-16加入96孔酶标板中，然后加入缓冲溶液，使其最终体积为50μl，放入37℃培养箱中孵育30分钟，然后加入含有0.2μg荧光底物缓冲溶液50μl，最终反应体系为100μl，钩藤水提取物最终浓度分别为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml和60μg/ml，立即用Bio-Tek ELx-808荧光酶标仪进行计算，发射波长为520nM，激发波长为460nM。实验时间为500秒。仪器计算的荧光强度就等同于酶降解底物活力的强弱。
2.2.3 抑制活性计算 用Vo代表没有加入抑制剂组的荧光强度变化，Vi代表加入抑制剂组的荧光强度变化，钩藤的抑制百分数用下边的公式表示：1—Vi/Vo=抑制百分数（%），当抑制百分数为50%时，则为钩藤抑制基质金属蛋白酶活性的IC50。
3 结果
具体结果如下，图中“Mean V”表示随时间变化的荧光强度的变化速率，可以作为相对的底物降解速率，根据实验方法中所给出的公式，能够计算出不同浓度的钩藤提取物对基质金属蛋白—16的抑制百分数。通过以上数据，我们能够推测基质金属蛋白酶—16的活性抑制50%时所需要的钩藤的量，如图8，IC50=52μg/ml。
3 讨论
钩藤始载于《名医别录》，原名钓藤。甘苦；微寒，归肝、心包经，具有清热平肝；熄风止痉的作用［4］，被历代医家成为因其疗效确切，副作用较少，长期以来一直被应用于脑血管疾病的治疗之中。
基质金属蛋白酶是一类自然进化中高度保守的酶。基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）通过自身的表达调控基质金属蛋白酶的含量。当机体出现神经系统疾患时，基质金属蛋白酶受到疾病影响后其表达水平向上调节，使基质金属蛋白酶抑制剂与基质金属蛋白酶之间的平衡失控，因为这种基质金属蛋白酶含量的升高，细胞外基质成分被过多降解，从而为许多疾病如脑血栓、脑出血、高血压等疾病［5］的发生创造条件，Galis等人的研究表明基质金属蛋白酶是造成斑块不稳定的重要原因之一［6］。基质金属蛋白酶通过破坏斑块的结构，从而在治疗脑血管疾病方面达到治疗作用 ［7］。血管源性脑水肿的机制既基质金属蛋白酶表达上调，降解Ⅳ、Ⅴ型胶原，破坏细胞外基膜和基质，导致血管内膜通透性增加所致。同时造成白细胞活化渗出至神经系统内，并释放多种炎性介质、细胞因子造成缺血脑组织的损伤［8］。这一病理生理学因素使通过基质金属蛋白酶抑制剂治疗脑血管疾病具有了新的理论依据，国外临床资料表明［9-13］，在原发性高血压、脑出血、脑缺血、颈动脉粥样硬化斑块、脑梗死等病理状态下多种基质金属蛋白酶抑制剂的活性明显增高，提示心脑血管病与基质金属蛋白酶含量的关系及其密切，大量实验结果表明，脑梗塞及脑损伤时应用基质金属蛋白酶抑制剂能使这种脑组织的损伤降低，动脉粥样硬化斑块稳定不易于破裂，对脑血管疾病的发生达到治疗及预防的作用。关于钩藤治疗神经系统疾病的机理是国内外医学工作者临床工作的热点，本实验的研究结果进一步证实了钩藤水提取物含有基质金属蛋白酶抑制剂，因此其治疗脑血管疾病的机制可能同抑制基质金属蛋白酶的活性相关，为中药提取物治疗脑血管疾病提供了评价标准及理论依据。
参考文献
［1］ Milan A，Puglisi E，Ferrari G，et al.Hypertensive emergency and urgency：clinicalupdate［J］.G Ital Cardiol （Rome），2010，11（11）：835-848.
［2］ Hansson J，Vasan RS，rnlv J，etal.Biomarkers of extracellular matrix metabolism （MMP-9 and TIMP-1）and risk of stroke，myocardial infarction，and cause specific mortality：cohort study［J］.PLoS One，2011，19，6（1）：e161-185.
［3］ Wu LX，Gu XF，Zhu YC，Zhu YZ Protective effects of novel single compound，Hirsutine on hypoxic neonatal rat cardiomyocytesEur J Pharmacol，2011，10，650（1）：290-297.
［4］ 黄青萍等.钩藤的药力作用及临床应用［J］.广西中医药，2003，8（26）：192-194.
［5］ Hidalgo M，Eckhardt SG.Development of matrix metalloproteinase inhibitors in cancer therapy ［J］.Natl Cancer Inst，2001，93（3）：178-193.
［6］ Galis Z S，Sukhova GK，Lark M W，et al .Increase expression of matrix metalloproteinases and matrix degrading activity invulnerable regions of human atherosclerotic plaques ［J］.J Clin Invest，1994，94：493-503.
［7］ Shah P K，Falk BadinomJ J，et al .Human monocyte derived macrophages induce collagen breaddown in fibrous caps of atherosclerotic plaque ：potential role of matrix degrading metalloproteinases and implications for plaque rupture ［J］.Circulation，1995，92（15）65-66.
［8］ Rosenberg GA，Navratil M.Metalloproteinase inhibition block sedemain intracerebral hemorrhage in the rat［J］.Neurology，1997，48（4）：921-924.
［9］ 李全庆.高血压性脑出血患者基质金属蛋白酶-9含量的临床意义［J］.右江民族医学院学报，2004，8（4）：517-518.
［10］ 郭正清，肖小华.脑梗死血清MMP23的测定及临床意义［J］.江苏大学学报（医学版），2004，6（3）：209-219.
［11］ 程震锋，朱建华.原发性高血压患者血清基质金属蛋白酶9及其抑制因子水平［J］.2004，4（2）：12-14.
［12］ 杨建江，邹升安，林映奇.缬沙坦对稳定型心绞痛伴高血压患者血清MMP21、MMP29及TIMP21水平的影响［J］.西南军医，2005，8（4）：17-19.
关键词 糜蛋白酶 治疗颅内血肿
AbstractObjective:To evaluate the therapeutic effect of a-Chymotrypsin on intracranial hematoma.Methods:38 cases of intracranial hematona were divided into two groups:contral group combined therapy with conventional,treatment group,combined therapy plus routine intramuscular chymotrypsin.Results:The treatment group was significantly shorter intracranial hematoma absorption time.Conclusion:Greatly increased the use of chymotrypsin hematoma absorption rate,shortening the time residual hematoma in the brain,reducing hospital costs and hospital stay.
Key Wordsintracranial hematona;therapy;a-Chymotrypsin
脑外伤后颅内血肿除少数需要紧急行开颅血肿清除术抢救外，大部分颅内血肿患者采取非手术治疗［1］。糜蛋白酶也能使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白溶解酶，由此除去大部分纤维性渗出物所致阻塞，使血液和体液通畅。根据这一作用机制，我科对自2003年6月～2009年6月以来20例脑外伤后颅内血肿患者予以糜蛋白酶进行治疗，现将资料汇报如下。
资料与方法
一般资料：本组38例脑外伤后颅内出血患者，男27例，女11例；年龄11～78岁，平均46岁。致伤原因：交通伤29例，坠落伤9例。入院时情况：本组患者伤后1～36小时入院，昏迷时间＜30分钟31例，30分钟～6小时7例，GCS评分均＞12分。头颅CT扫描：硬膜下血肿8例，脑内血肿21例，复合血肿10例，其中迟发血肿8例。血肿5～35ml，平均11ml。中线移位均＜0.5cm，侧脑室无或轻度受压。
方法：38例患者分成二组：对照组18例，治疗组20例。对照组（其中硬膜下血肿7例，脑内血肿8例、复合血肿3例）采用常规综合治疗，降颅压脱水、止血、抗感染、吸氧、营养脑神经等治疗。治疗组（其中硬膜下血肿8例，脑内血肿9例、复合血肿3例）采用常规综合治疗加用糜蛋白酶4000U+生理盐水2ml肌内注射，1次/日，连续使用7天。以促使血肿吸收。
结 果
全组38例患者均恢复良好。对照组血肿完全吸收所需时间9～36天，平均22天；治疗组血肿完全吸收所需时间5～14天，平均9天。以上结果提示，使用糜蛋白酶大大提高了血肿的吸收速度，缩短了血肿在脑内残留时间，减少了住院费用和住院时间。
讨 论
糜蛋白酶即α-糜蛋白酶，系从牛或猪胰中提取得到的一种蛋白水解酶，不仅具有肽链内切酶作用，能选择性地水解由芳香族或脂肪族氨基酸形成的肽键，迅速分解蛋白质为分子量较小的肽，而且具有脂酶样活性，能水解脂键。糜蛋自酶通过对蛋白质的肤键水解作用，可以液化脓液，分解坏死组织，增加白细胞的游走及吞食作用，从而促使炎症消除。糜蛋白酶也能使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白溶解酶，由此除去大部分纤维性渗出物所致阻塞，使血液和体液通畅［2］。我们将其应用于颅内血肿的治疗，取得了良好效果。
颅内血肿是颅脑损中最多见而且最危险的继发性病变，其发生率占闭合性颅脑损伤的10%，其中非手术治疗约70%。糜蛋白酶的机制与脑的血液循环和脑脊液的循环有关，故对硬膜外血肿无明显效果，对硬膜下血肿和脑内血肿效果显著。糜蛋白酶应在患者伤后24小时行CT复查明确无手术指征的前提下使用，以免影响患者的抢救和治疗，而且在糜蛋白酶治疗过程中要严密观察患者的病情变化［3］。
参考文献
1 胡长林,吕涌涛,李志超,主编.颅内血肿微创清除术规范化治疗指南［M］.北京:中国协和医科大学出版社,2003:92.
2 陈新谦,金有豫,主编.新编药物学［M］.北京:人民卫生出版社,2002:156.
1 S100蛋白的结构及病理生理变化
1.1结构: S100 蛋白是在1965年由Moore BW [1]在牛脑中发现的，因该蛋白能溶解于100%硫酸铵中而得名。它是一种酸性的钙离子结合蛋白，相对分子质量为21000。在哺乳动物的中枢神经系统中，S100蛋白主要由神经胶质细胞合成和分泌，特别是星形胶质细胞和少突胶质细胞。在外周神经系统中雪旺细胞及卫星细胞含有丰富的S100蛋白，其基因表达水平与细胞的增殖和分化有关。S100蛋白的基因定位于染色体1q21[2 ]，且S100 蛋白的氨基酸序列在不同种属中都一致，说明该蛋白有重要作用S100蛋白由α、β两种亚基组成， 形成S100αα，S100αβ，S100ββ三种组合形式。S100αβ主要在胶质细胞中，S100β主要在神经胶质细胞与雪旺细胞中。S100αβ和S100ββ常被统称为S100β。S100β的功能包括调节细胞生长，能量代谢和参与细胞内信号传导[1]，它能帮助一些特殊神经元如皮层神经元、背根神经元、运动神经元的生长并增加发育中和损伤后的神经元存活，S100β还是神经胶质细胞的有丝分裂原。脑内生理量的S100β主要由星形胶质细胞产生，作用于神经元及其周围生长环境。星形胶质细胞是脑组织中最常见的细胞，它们与小胶质细胞等构成了支持神经元架构的三维网络。因此S100β是胶质细胞与神经元之间相互作用的桥梁。
1.2 病理生理改变: Bruni等[3]研究发现，生理状态下脑中S100β蛋白在胚胎第14天即有微弱表达，随后与神经系统的生长发育呈平行增加关系，成年后相对稳定。S100β蛋白在正常成人血清中小于0.2μg/L，通常较难测出。颅脑损伤早期S100β含量> 2μg/ L 表示脑损伤严重，高于3.8μg/ L 则有致命的结局，如果其含量持续性升高，说明脑继发性损害在进行。血清S100β蛋白的浓度与几种因素相关[4]：①脑损伤的范围和严重程度；②巨噬细胞或蛋白酶引起的降解；③血脑屏障被破坏的程度。Ingebrigtsen等[5～7]发现部分脑损伤患者在影像学检查中未发现损伤前血清S100β蛋白即有大幅度升高，CT显示有病理改变者血清S100β蛋白均升高，CT正常患者的血清S100β蛋白水平与脑损伤后的神经精神功能有关。而CT正常血清S100β蛋白升高者MRI显示有脑损伤。脑损伤尚处于无症状的亚临床状态，而此时结构上受损的神经胶质细胞会释出S100β蛋白进入脑脊液，进而通过血脑屏障进入血液。此时， 升高的血清S100β蛋白可作为脑损伤的指标使用。在对脑损伤的检测中，S100β有较高的特异性。Petrova等[8]在体外实验中也证实了S100β能刺激星形胶质细胞产生一氧化氮。由于S100β对神经系统发育有利，因此神经胶质细胞在神经系统受损后释出S100β可能是修复神经元的一种形式。有人认为低浓度S100β有神经营养作用，而当S100β浓度过高则导致神经元凋亡。所以S100β的释放可能既是脑损伤的机制又是脑损伤的后果。
2 S100蛋白与脑损伤的关系
2.1 越来越多的S100β蛋白与脑血管病的关系研究证明， 缺血性或出血性脑血管病急性期血浆和脑脊液中的S100β蛋白显著升高， 而且出血性脑病较缺血性脑病升高更明显[9]。
2.1.1 S100β蛋白与心血管手术脑损伤: 研究证实: 心血管手术期的血浆和脑脊液中的S100β蛋白升高明显， 主要原因是由于脑缺血缺氧导致神经胶质细胞坏死后S100β蛋白的释放和血脑屏障受破坏后通透性的增高。Wang等[10]对90例心肺分流术患者进行检测而得出结论: S100β的升高不仅发生在手术的术中和术后，在术前也有轻度升高。但是，Ishida[11]等提出，术中S100蛋白的增加并非由神经元破坏引起，而是由于术中污染导致，这种说法有待于进一步研究。
2.1.2 S100β蛋白与出血性脑血管病: 出血性脑血管病也可导致神经细胞的水肿、变性和坏死， 并且还能造成血脑屏障的破坏， 从而引起脑脊液和血浆中的S100β蛋白水平升高。Weiss等[12]报道，在74名蛛网膜下腔出血病人的血清S100β蛋白亦显著升高， 其血清S100β蛋白水平与神经症状的严重程度呈正比， 测定发病8天时的血清S100β蛋白浓度越高， 病人的预后越差。脑外伤时检测病人血清S100β蛋白水平是判断其损伤程度和预后的客观指标。Raabe等[13]研究认为伤后12h的血清S100β蛋白水平能反映出严重的原发性或进行性的继发性脑损伤， 恢复良好者均有较低的血清S100β蛋白水平， 血清S100β蛋白恢复正常的时间越长， 继发性脑损害越严重， 预后越差。
2.2 S100β蛋白与新生儿缺氧缺血性脑损伤缺氧缺血性脑损伤(HIBD)是新生儿期重要的疾病之一， 如何早期判断脑细胞损伤严重程度， 有其临床意义。多年来人们一直在寻找能早期诊断以及对预后作出正确估价的指标及方法。Tanga等[14]观察新生鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织中HIBD的S100β蛋白mRNA 表达的变化。结果新生鼠缺氧缺血性脑损伤时在血和脑脊液中S100β蛋白水平升高，与正常对照组比较差异有统计学意义。HIBD脑组织中S100β蛋白表达升高， 不仅对HIBD的诊断有意义， 而且S100β蛋白转录水平的变化可能与海马功能调控、细胞内钙内流有关，从而促使靶基因的表达，S100β蛋白是mRNA转录的最终产物的表达， 可发挥其对缺氧缺血性脑修复、再生和功能重塑。文献认为血和脑脊液中S100蛋白水平升高是由缺氧缺血时通透性增加和细胞破裂所致。Giussani等[15]已经证实， 新生儿血脑屏障发育不成熟，S100β蛋白在新生儿的穿透性高于成人。S100β蛋白在不同组织中也存在， 但其总的数量远远低于中枢神经系统， 至于新生儿脐血中S100β蛋白水平与HIBD的关系有待于进一步的临床实验观察。Spinella等[16]观察发现，脑脊液中S100β蛋白水平对儿童早期脑膜炎诊断有很重要价值。但是，Rajendra等[17]研究发现，在脑肿瘤儿童与健康儿童对比中，S100β蛋白变化没有统计学意义，这种情况同样发生在星型细胞瘤儿童与非星型细胞瘤儿童中，说明S100β蛋白作为脑肿瘤血清标记物在儿童脑肿瘤患者并不具有代表性。
[关键词] 超敏C反应蛋白;D-二聚体;急性脑梗死;颈部不稳定斑块
[中图分类号] R743.32[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)03(c)-046-02
急性脑梗死是目前国内外最受关注的疾病之一[1]。近年来,炎症反应与脑梗死的关系得到了越来越多的重视,其病原体感染和炎症反应与动脉粥样硬化和血栓形成有关[2]。本研究通过测定急性脑梗死患者血清中超敏C反应蛋白水平和D-二聚体水平,分析其与颈部血管斑块稳定性之间的相关性。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2008年3～12月我院收治的48例急性脑梗死患者作为急性脑梗死组,其中,男25例,女23例;年龄21～78岁,平均(35.43±18.78)岁。经全国第四届脑血管会议修订的诊断标准确立诊断,首发脑梗死48 h以内,并排除脑出血。另选取我院同一时期的48例健康体检者作为空白对照组,其中,男24例,女24例;年龄19～80岁,平均(34.26±12.37)岁。两组患者在年龄、性别等方面比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.2 方法
两组患者入院后均进行血液及颈部超声检查。①血清中超敏C反应蛋白水平:空腹新鲜静脉血取血清,采用试剂盒及全自动分析仪进行定期分批检测,并根据乳胶比浊法测定含量。②血清中D-二聚体(D-D)水平:空腹新鲜静脉血取血清,采用试剂盒及自动酶标仪检测含量。③颈动脉彩超检查:采用彩色多普勒超声诊断仪,对双侧颈总动脉、颈总动脉分叉、颈内动脉、颈外动脉进行检查,从而确定斑块是否形成。
1.3 评价指标
斑块定义:正常血管内膜厚度1.2 mm时为局部斑块形成。对两组患者血清中超敏C反应蛋白水平、D-D水平及颈部血管彩超检查结果等指标进行对比分析。
1.4 统计学处理
采用SPSS 12.0软件进行统计学处理,数据以均数±标准差(x±s)表示,采用t 检验,P
2 结果
2.1 两组患者血清中超敏C反应蛋白水平和D-D水平的比较
与空白对照组相比,急性脑梗死组患者血清中超敏C反应蛋白水平和D-D水平均明显升高,差异均有统计学意义(P
表1 两组患者血清中超敏C反应蛋白水平和D-D水平比较(x±s)
与空白对照组比较,*P
2.2 急性脑梗死组血清中超敏C反应蛋白和D-D水平与颈动脉不稳定斑块数目的相关性
急性脑梗死组血清中超敏C反应蛋白和D-D水平与颈动脉不稳定斑块数目的平均数水平比较见表2。从表2可知,血清中超敏C反应蛋白水平与颈动脉不稳定斑块数的相关系数r值为0.469,两者比较,差异有统计学意义(P
表2 急性脑梗死组血清中超敏C反应蛋白水平和D-D水平
与颈动脉不稳定斑块数目(x±s)
3 讨论
C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是一种由肝脏合成的急性时相反应蛋白,体内CRP水平升高可间接反映内皮细胞受损、炎性细胞因子激活、血管病变和血栓形成,是机体的自身调节反应[3-4]。现有大量资料表明,动脉粥样硬化的血栓形成除了是脂肪堆积过程外,也是一个慢性炎症过程,CRP是动脉粥样硬化血栓形成疾病的介导和标志物。D-D则是纤维蛋白原降解产物中最小的片断,是交联纤维蛋白的特异性降解产物,其升高可反映体内微血栓形成、全身或局部血管内凝血和纤溶亢进。血浆中D-D的检测有助于血栓性疾病的早期诊断[5-6]。
近年来,动脉粥样硬化的炎症反应理论逐渐成为脑血管疾病领域研究的热点,血清中超敏C反应蛋白是炎症过程的重要标志物。本研究结果表明,血清中超敏C反应蛋白与急性脑梗死患者颈部不稳定斑块的存在及其性质存在相关性,具有重要的临床意义。
[参考文献]
[1]陈应柱,邵国富,吴冠会,等.急性脑梗死患者血清超敏C-反应蛋白水平变化[J].临床神经病学杂志,2006,19(1):15-17.
[2]陈兵,孟祥红.测定D-二聚体和超敏C-反应蛋白对急性脑梗死患者的临床意义[J].中国康复理论与实践,2007,13(5):415-416.
[3]徐翔.血清超敏C反应蛋白水平与急性脑梗死的相关性分析[J].老年医学与保健,2008,14(1):39-41.
[4]王爱民,周颖,肖波,等.脑梗死患者血清高敏C反应蛋白水平的变化及其临床意义[J].临床神经病学杂志,2005,18(2):153-154.
[5]Napoli DM, Papa F, Bocola V. C-reactive protein in ischemic stroke: an independent prognostic factor [J]. Stroke,2001,32(4):917-924.
[6]Van-Der-Meer IM, De-Maat MP, Hak AE, et al. C-reactive protein predicts progression of atherosclerosis measured at various sites in the arterial tree: the Rotterdam study [J]. Stroke,2002,33(12):2750-2755.
关键词：脑动静脉畸形 脊髓动静脉畸形 蛋白质组学 线粒体 细胞外基质
Differential protein profiling in brain and spinal arteriovenous malformations
WANG Nai-li MENG Shu QIU Wen-ying WANG Xia
Department of Human Anatomy,Histology and Embryology,Institute of Basic Medical sciences CAMS,School of Basic Medicine PUMC; Department of Immunology,Institute of Basic Medical Sciences CAMS,School of Basic Medicine PUMC;
Abstract：Objective To explore the differences of protein profiling between brain arteriovenous malformation(bAVM) and spinal AVM(sAVM). Methods Proteins were extracted from bAVM,sAVM,control cerebrovascular and control spinal vessel specimens. The protein level in each group was measured by TMT-labeled quantitative proteomics. Results Totally 3 102 protein samples from bAVM, sAVM,control cerebrovascular and control spinal vessel were examined by high-throughput quantitative proteomics. Among them the expression level of 852 proteins was dramatically changed in bAVM and 205 proteins in sAVM. Bioinformatic analysis showed that 304 proteins were highly expressed only in bAVM, most of them were mitochondria proteins, mainly enriched in electron transport chain and calcium regulation pathways, 97 proteins were specifically highly expressed in sAVM associated with extracellular matrix organization. Conclusions The mitochondrial dysfunction and calcium regulation imbalance may play important roles in the process of bAVM. Disturbed extracellular matrix organization and glycoproteins are potentially involved in sAVM progression.
Keyword：brain arteriovenous malformation; spinal arteriovenous malformation; proteomics; mitochondria; extracellular matrix;
动静脉畸形(arteriovenous malformation, AVM)是一类动静脉血管间异常连接的罕见血管疾病，易破裂出血，是患者致残的重要风险因素。常发生于中枢神经系统，包括脑动静脉畸形(brain AVM,bAVM)和脊髓动静脉畸形(spinal AVM,sAVM)[1]。
对AVM发病机制的研究多集中于bAVM, 如血管形成异常，包括血管生成抑制基因 miR-137和miR-195*表达降低[2]、Sox2(transcription factor SOX-2,转录因子SOX-2)-JMJD5(bifunctional peptidase and arginyl-hydroxylase JMJD5,双功能肽酶和精氨酸羟化酶)作用引起内皮细胞间充质转化(endothelial-mesenchymal transition, End-MT)[3],细胞间通讯异常[4]。在sAVM发现细胞外基质和血管形成相关蛋白质表达量异常[5]。
此外，在bAVM和sAVM中均发现内皮祖细胞的富集[6]、及KRAS(GTPase KRas, GTP酶)/BRAF(serine/threonine-protein kinase B-raf, 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶)突变[1]诱导的内皮细胞MAPK-ERK(mitogen-activated protein kinase, 丝裂原活化蛋白激酶)通路激活[7]。尚无报道两种疾病间的分子表达特异性。对比bAVM和sAVM的蛋白质表达差异，对深入研究bAVM和sAVM的分子机制，开发疾病特异性的诊断或治疗方法具有重要指导意义。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 材料：
患者bAVM标本(4例)和sAVM标本(4例)来自于清华长庚医院，对照组脑血管(4例)和脊髓血管(4例)来自于国家发育和功能人脑组织库，对照组捐献者无神经系统和血管系统相关疾病。标本详细信息参见表1。所有标本于-80 ℃保存。本研究已获得中国医学科学院基础医学研究所伦理委员会审核(伦理批准号：2018008)。经患者知情同意。
表1 入组患者基本信息Tabel 1 Patient's information
1.1.2 试剂：
尿素(urea)、二硫苏糖醇和碘乙酰胺来自于GE Healthcare公司；蛋白酶抑制剂cocktail来自于Roche公司；Tandem Mass TagTM(TMT)试剂、PBS、甲酸、乙腈、蛋白marker(Thermo Scientific公司);Trypsin/Lys-C(Promega公司);三乙基碳酸氢铵溶液、羟胺、考马斯亮蓝染液(Sigma-Aldrich公司)。
1.2 方法
1.2.1 组织蛋白的提取：
在冷PBS中去除组织中血污染，去除bAVM标本中黏连的脑组织。标本在液氮中迅速冷冻并研磨成粉，加入冷组织裂解液(8 mol/L urea的PBS溶液，含蛋白酶抑制剂cocktail),4 ℃裂解40 min, 12 000×g离心10 min取上清即为组织蛋白提取液。使用超微量分光光度计(NanoDrop 2000)测定蛋白质浓度。
1.2.2 蛋白质的还原、烷基化和TMT标记：
组内按等质量混合各样本蛋白质，制备混合蛋白液。每组取100 μg上述蛋白液，加入10 mmol/L二硫苏糖醇，37 ℃反应1 h, 然后加入25 mmol/L 碘乙酰胺，室温反应1 h。加入Trypsin/Lys-C 37 ℃反应过夜，将蛋白酶解成肽段。脱盐后，0.2 mol/L三乙基碳酸氢铵溶液溶解肽段，各组加入0.8 mg TMT试剂室温标记1 h: TMT-126标记bAVM,TMT-128标记对照脑血管，TMT-129标记sAVM,TMT-131标记对照脊髓血管。加入羟胺中和游离的TMT分子，混合各组样品后脱盐。
1.2.3 高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)分级和液相色谱质谱联用(liquid chromatograph-mass spectrometry, LC-MS/MS)的检测：
为了提高质谱检测到的蛋白质数量，使用HPLC对肽段进行分组。简要步骤为：多肽溶解于100 μL 1%甲酸溶液中，注入HPLC分离。分离色谱柱为Xbridge BEH300 C18 柱子(4.6 mm×250 mm, Waters),柱温维持45 ℃;流动相为乙腈和水(pH=10),流速为1 mL/min; 紫外吸收波长设为214 nm。每1.5 mL收集为1管，最终合并为12组分，旋蒸去除所有溶剂。
将上述12组分分别溶解于20 μL 1%甲酸溶液中，进行LC-MS/MS (Thermo Q Exactive质谱仪)检测。梯度洗脱条件：C18分析色谱柱(300 Å,75 μm×150 mm),0.30 μL/min, 120 min。质谱检测条件：Q Exactive质谱采取数据依赖性采集模式，Orbitrap(400-1 800 m/z, 60 000分辨率)中行全谱扫描，随后以27%碰撞能量(higher-energy C-trap dissociation, HCD)进行10次数据依赖的MS/MS扫描。
质谱获得的数据使用Proteome Discoverer 2.2软件进行搜库，人源fasta数据库于2020年10月在Uniprot网站下载。
1.2.4 生物信息学分析：
可信蛋白质的筛选条件设置为：unique peptide≥2,FDR≤0.01,差异蛋白质的筛选条件设置为：变化倍数≥2.0或≤0.5。蛋白质组数据分析使用到多个分析平台和软件：悟空云平台(https: //omicsolution.org/wkomics/main/)进行PCA、HCA、相关性分析，Funrich软件进行Gene Ontology分析，Cytoscape软件进行ClueGO和蛋白质-蛋白质相互作用分析，网络版WEB-based GEne SeT Analysis Toolkit进行Wikipathway分析，GraphPad Prism辅助作图。
1.2.5 蛋白质表达水平的验证：
通过Western blot验证蛋白质在bAVM、sAVM、对照脑血管和对照脊髓血管中的表达水平。由于蛋白质总量有限，将各组的样本按照等质量混合。使用NanoDrop2000超微量分光光度计测定浓度后，将各组蛋白质进行SDS-PAGE分离，通过考马斯亮蓝染色确定各组上样量。将等质量蛋白通过SDS-PAGE分离，电转移至PVDF膜。用5%脱脂奶粉封闭后，使用1∶1 000稀释的一抗(MMP9,ab137867,Abcam; VDAC,cst-4866,Cell Signaling Technology公司)在4 ℃ 孵育过夜。与辣根过氧化物酶标记的二抗孵育1 h, 化学发光法检测抗原抗体结合条带。
2 结果
2.1 高通量质谱检测bAVM和sAVM中蛋白质表达谱的异同
在对照脑血管、bAVM血管、对照脊髓血管、sAVM血管中共检测到3 102个高可信度蛋白质。对照组脑血管和脊髓血管的蛋白质表达谱相近，相关性系数为0.98,bAVM畸形血管中蛋白质的表达丰度与其他3组的差异最大(图1)。
图1 对照脑血管和脊髓血管的蛋白质表达谱相近
bAVM畸形血管中蛋白质表达量发生变化的蛋白质数量更多(图2A)。相比于对照组血管，bAVM畸形血管中286个蛋白质的表达量下调，566个蛋白质的表达量上调；sAVM畸形血管中90个蛋白质的表达量下调，115个蛋白质的表达量上调。bAVM和sAVM中表达量变化的蛋白质共941个，其中116个蛋白质在两种畸形血管中的表达量均显著改变(图2B)。在本研究中，将这941个蛋白质定义为全部差异表达蛋白质。
941个差异表达蛋白质的HCA分析结果显示(图2C),这些蛋白质可分为12个cluster, 其中cluster 4中304个蛋白质仅在bAVM血管中显著高表达，cluster 5中97个蛋白质仅在sAVM血管中显著高表达。后续对cluster 4和cluster 5中的蛋白质分别进行分析。
2.2 bAVM畸形血管细胞中线粒体稳态及钙调节失衡
在bAVM中显著高表达的304个差异表达蛋白质主要为线粒体及相关蛋白质，富集于线粒体复合物I、电子传递链、钙调节等信号通路(图3)。
2.3 sAVM中细胞外基质蛋白质及其糖基化异常
图2 b AVM和s AVM中差异表达蛋白质分析
图3 bAVM畸形血管中线粒体稳态及钙调节失衡
sAVM畸形血管中显著高表达的97个蛋白质(cluster 5)主要是以ADAM10(disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10)、MMRN1(multimerin-1)、TNC(tenascin)、VCAN(versican core protein)、KNG1(kininogen-1)、LAMB1(laminin subunit beta-1)为核心的细胞外基质蛋白或糖蛋白(图4)。
2.4 Western blot检测bAVM和sAVM中蛋白质表达水平
线粒体蛋白VDAC(voltage-dependent anion channel)在bAVM中显著高表达，细胞外基质蛋白MMP9(matrix metalloproteinase-9)在sAVM中显著高表达(图5)。
图4 sAVM中细胞外基质蛋白质及其糖基化异常
图5 Western blot检测VDAC和MMP9在bAVM 和sAVM中的表达水平
3 讨论
蛋白质组学技术以蛋白质组为研究对象，可无偏见的、在整体水平探究细胞或组织的蛋白质组成及其动态变化规律。探究bAVM和sAVM的蛋白质组表达，可系统地评估两种疾病的相似和差异，为寻找疾病的特异性分子机制或靶标提供线索。
前期蛋白质组学研究报道，参与细胞间通讯的分子黏附通路蛋白质的表达水平在人bAVM和sAVM畸形血管中均显著改变[4-5]。本文中，作者发现线粒体稳态及钙调节相关蛋白质的表达水平在bAVM中明显改变，细胞外基质蛋白质在sAVM中显著高表达。该结果揭示了bAVM和sAVM特异性的分子特征，为充分理解bAVM和sAVM的分子机制提供参考和补充。
线粒体和内质网是细胞内重要的钙离子储存器，VDAC是线粒体外膜上高表达的钙转运蛋白，通过Grp75(glucose related protein 75)偶联IP3Rs形成大分子转运体，介导线粒体外膜将钙离子从内质网转运至线粒体内[8]。钙离子可直接激活电子传递链和ATP合酶的活性，促进ATP生成[9],调控线粒体能量代谢。在心肌细胞中，抑制线粒体复合物I可引起线粒体能量异常，导致细胞死亡[10]。本文结果显示bAVM中多个线粒体复合物I蛋白的表达水平显著升高，推测线粒体稳态及钙调节失衡在bAVM的病理过程中可能具有重要调节作用。
细胞外基质是存在于细胞间的动态网状结构，由胶原、蛋白聚糖、弹性纤维等大分子物质组成。通过与细胞表面上的受体结合，调控细胞骨架结构，引起细胞内细胞传导，影响细胞的增殖和分化。基质金属蛋白酶ADAM10-Notch通路、细胞外基质糖蛋白TNC-RhoA/ROCK通路可影响内皮细胞间紧密连接参与血管结构稳态调节[11-13]。细胞外基质黏附蛋白MMRN1结合内皮细胞 vWF(von Willebrand factor),稳定血小板黏附[14]。通过ADAMTS5水解VCAN成为versikines, 促进血管内皮细胞的黏附、增殖，促进新生血管形成[15]。在本研究中，作者发现以ADAM10、TNC、VCAN、MMRN1为核心的细胞外基质蛋白及糖蛋白的表达水平在sAVM中过表达，在bAVM中的变化差异无统计学意义。提示细胞外基质组成对sAVM血管结构的稳定具有重要调控作用。
本文仍存在一定的局限性：本文结论是基于小样本量蛋白质组学分析的推测，需在大数量样本上进行验证，并在细胞水平进一步证实该结论。
参考文献
[1] Hong T,Yan Y,Li J,et al.High prevalence of kras/braf somatic mutations in brain and spinal cord arteriovenous malformations[J].Brain,2019,142:23-34.
[2] Huang J,Song J,Qu M,et al.MicroRNA-137 and microRNA-195* inhibit vasculogenesis in brain arteriovenous malformations[J].Ann Neurol,2017,82:371-384.
[3] Yao J,Wu X,Zhang D,et al.Elevated endothelial Sox2 causes lumen disruption and cerebral arteriovenous malformations[J].J Clin Invest,2019,129:3121-3133.
[4] Wang X,Hao Q,Zhao Y,et al.Dysregulation of cell-cell interactions in brain arteriovenous malformations:A quantitative proteomic study[J].Proteomics Clin Appl,2017,11.doi:10.1002/prca.201600093.
[5] Guo Y,Xu B,Sun Z,et al.Quantitative protein profiling and pathway analysis of spinal arteriovenous malformations[J].Microvasc Res,2018,120:47-54.
[6] Gao P,Chen Y,Lawton MT,et al.Evidence of endothelial progenitor cells in the human brain and spinal cord arteriovenous malformations[J].Neurosurgery,2010,67:1029-1035.
[7] Nikolaev SI,Vetiska S,Bonilla X,et al.Somatic activating KRAS mutations in arteriovenous malformations of the brain[J].N Engl J Med,2018,378:250-261.
[8] 高鹏，杨明，孙林.线粒体相关内质网膜(mam)钙转运及调节蛋白介导线粒体钙稳态[J].中国细胞生物学学报，2018,40:585-593.
[9] Mallilankaraman K,Cárdenas C,Doonan PJ,et al.MCUR1 is an essential component of mitochondrial Ca2+ uptake that regulates cellular metabolism[J].Nat Cell Biol,2012,14:1336-1343.
[10] Li Y,Chen B,Yang X,et al.S100a8/a9 signaling causes mitochondrial dysfunction and cardiomyocyte death in response to ischemic/reperfusion injury[J].Circulation,2019,140:751-764.
[11] Alabi RO,Farber G,Blobel CP.Intriguing roles for endothelial adam10/notch signaling in the development of organ-specific vascular beds[J].Physiol Rev,2018,98:2025-2061.
[12] Chapados R,Abe K,Ihida-Stansbury K,et al.Rock controls matrix synthesis in vascular smooth muscle cells:Coupling vasoconstriction to vascular remodeling[J].Circ Res,2006,99:837-844.
[13] 王淳，李波，方文刚，等.PLGF通过激活Rho/ROCK信号通路介导人脑微血管内皮细胞间紧密连接开放[J].基础医学与临床，2013,33:960-965.
[14] Parker DN,Tasneem S,Farndale RW,et al.The functions of the A1A2A3 domains in von willebrand factor include multimerin 1 binding[J].Thromb Haemost,2016,116:87-95.