超声工作经验总结范文

超声工作经验总结篇1

关键词：乌腺金丝桃;总黄酮;超声提取;正交设计

基金项目：吉林农业科技学院大学生创新项目（2015008）

中图分类号： S567 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/ki.jlny.2016.24.043

乌腺金丝桃是藤黄科草本植物，功效为镇痛、止血、通乳，主要应用于吐血、子宫出血、风湿关节痛、神经痛、跌打损伤、乳腺炎[1]。研究表明，其具有治疗心脏病、抗肿瘤等作用，主要药效物质为黄酮类化合物[2，3]。黄酮类化合物因其具有抗菌、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、镇痛、保肝、利尿、调节血管渗透性、延缓衰老、防护紫外线损伤等广谱的药理作用引人瞩目[4]。鉴于乌腺金丝桃总黄酮提取工艺的研究少见报道[5]，且用超声法从乌腺金丝桃中提取总黄酮的研究未见文献报道，笔者在本试验中采用正交试验设计，对影响其提取率的多个因素进行了考察，以期优选出超声法提取乌腺金丝总黄酮的最佳工艺。

1 材料

1.1 试剂与材料

本试验材料为乌腺金丝桃叶，于2015年9月采自吉林农业科技学院左家校区乌腺金丝桃试验田，鼓风烘干（50℃）备用。金丝桃苷标准品;无水乙醇、甲醇、亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠。

1.2 仪器

电热鼓风干燥箱、 电子分析天平、循环水式真空泵、旋转蒸发仪、超声波清洗器、紫外可见分光光度计。

2方法

2.1试验流程

样品称重超声提取抽滤滤液浓缩定容离心测定含量计算提取率。

2.2标准品溶液的配制

精密称取金丝桃苷标准品3.8毫克，溶解于甲醇中，制成浓度为380微克/毫升的标准品母液。

2.3 空白溶液的配制

取甲醇0.5毫升，加入5% NaNO2溶液0.3毫升，摇匀，放置6分钟，加入10% Al（NO3）3溶液0.3毫升，摇匀，放置6分钟，再加入4% NaOH溶液3毫升，摇匀，放置15分钟，即为空白对照液[3]。

2.4测定波长的选择

对2份样品和金丝桃苷对照品经显色后，在350～700nm范围内扫描。金丝桃苷对照品的λmax=530nm处，样品提取液的λmax=525～527nm，故选择显色后在527nm处测定吸光度。

2.5标准曲线的绘制

取母液稀释得系列浓度标准品溶液。分别取各浓度标准品溶液0.5毫升，按2.3项操作，离心，在527nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，金丝桃苷浓度为横坐标做标准曲线，得线性方程y=0.0006x+0.00765（R2=0.99905），线性范围是5.93～380微克 /毫升。

2.6样品溶液的制备和总黄酮提取率的计算

取药材粗粉2.0克，精密称取，用乙醇溶液超声提取。提取液抽滤浓缩，用甲醇定容并依据试验情况适当稀释，精密量取溶液0.5毫升，按按2.5项操作，测定吸光度（A），计算总黄酮的含量及总黄酮的提取率，提取率=样品中总黄酮的量/药材重量×100%。

2.7单因素考察

平行条件分别考察乙醇浓度、温度、提取时间、料液比、超声功率在不同水平下对乌腺金丝桃中总黄酮提取效果的影响。

2.8正交试验

采用L9（34）正交试验安排表进行试验，以考察多因素对提取过程的交互影响，从而筛选出超声提取最佳工艺。因素及水平设置见表1。

3 结果与分析

表1超声提取法的L9（34）正交因素水平表

表2单因素考察结果

3.1单因素考察结果

单因素考察结果见表2，结果表明，乙醇浓度、温度、提取时间、超声功率对总黄酮提取效果有影响，料液比对提取效果影响不大，确定提取时料液比为1∶22。依据结果确定正交试验各因素的合理水平。

3.2 正交试验结果

表3 超声法提取的正交试验结果

极差分析结果的R值大小表明，四种因素对乌腺金丝桃中总黄酮提取影响程度A>B>D>C，即乙醇浓度>温度>超声功率>提取时间，说明因素A为影响乌腺金丝桃中总黄酮提取率的主要因素;四种因素的K值表明各因素水平的影响程度是A1>A2>A3，B2>B3>B1，C3> C1>C2，D2>D3>D1，综上所述，理论最佳的工艺条件是A1B2C3D2，即样品用60%乙醇采用超声功率为120W在超声温度60℃条件下提取50分钟，见表3。

3.3 验证性试验结果

按照上述确定的最佳条件，取5份样品做了5次平行试验，总黄酮平均提取率8.15%，算得相对标准偏差RSD=2.77%<3%，进一步说明正交试验所得的最佳条件为提取乌腺金丝桃总黄酮较为理想的工艺。

4 结语

以总黄酮提取率为评价指标的正交试验结果表明，乙醇浓度对乌腺金丝桃中总黄酮的提取影响程度显著，提取温度与超声功率影响次之、提取时间与料液比影响程度较小;正交试验分析及验证性试验结果表明，乌腺金丝桃中总黄酮超声提取最佳工艺条件是样品用22倍量的体积分数为60%乙醇采用超声功率为120W在超声温度60℃条件下提取50分钟，在此条件下总黄酮提取率是8.15%。

参考文献

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作者简介：薛颖，吉林农业科技学院，在读本科生，研究方向：中药学。

超声工作经验总结篇2

1理论准备

超声医师要有扎实的理论知识和超声专业知识是减少漏诊、误诊的首要因素。诊断是医师从搜集患者的有关资料（病史和体征）开始，经过思维中的分析和判断，再通过各种医技检查，综合地对病人作出诊断。但在实际工作中，超声医师因为患者多，工作忙，常常在不了解病史病情，没有分析判断的情况下就拿起探头检查，这种既缺乏明确的目的，又缺乏对必要征象的警觉，漏诊、误诊就在所难免。一例患者右上腹不适，食欲不振，超声图象显示胆囊壁增厚呈双层，我们就下胆囊炎的诊断是片面的，要知道胆囊壁增厚并非胆囊炎的特异所见，导致胆囊壁增厚的原因有很多，如肝炎、胆囊癌、胆囊周围炎、肝硬化腹水、等疾病均有胆囊壁增厚，此时就需超声医师综合分析，否则轻易下一个胆囊炎的诊断会耽误病人的治疗。

临床诊断的金标准是组织病理学检查，但在超声往往习惯于把超声检查的结论直接提升到病理诊断的高度，这是导致误诊的因素之一。比如在肝脏发现一高回声结节，有些超声医师习惯诊断为肝血管瘤，的确肝血管瘤约90%是高回声表现，但这不是肝血管瘤中血管丛、血窦和内皮细胞的特征性表现，并且肝脏的脂肪瘤、坏死不均质的肝癌都可以表现为高回声团，因此有可能发生误诊，因此就需超声医师掌握一定的临床知识，如肝脏强回声结节合并有肝炎病史等情况下，就不要轻易诊断肝血管瘤，就要让病人做进一步的检查。大家都知道，在腹部检查中肝脏是最易漏诊的部位，良恶性肿瘤的鉴别诊断也是超声检查中临床迫切要求解决的核心问题，恶性肿瘤的本质是生长失控，速度快，并发生浸润和转移，对此，作为超声检查所显示的肿瘤断面图象结构特征，具有重要鉴别价值。如肿瘤呈球形的膨胀性生长，对周边的挤压破坏征象以及丰富异常血流信号等均标志着生长速度快的恶性特点，但是肿瘤这种动态发展过程，只有病变达到一定程度时才有可能从其断面图象结构上显示识别出来，因而其灵敏性和特意性并不高，也就是说肿瘤越小特征越不明显，鉴别诊断就越困难，所以就要求超声医师依据不同病例具体分析，作出正确的诊断，否则，可能导致误诊。

2经验因素

超声医师具有的专业知识和临床经验是正确诊断的基础，我在学习过程中深有体会。一般而言，既无概念上的认识又无实践中的经验，即使超声检查中发现了异常，但因对它不认识，就不会想到有关问题，也就不能做出正确的诊断，这自然会导致漏诊，没有理论知识不可能有正确的实践，而理论只有通过实践即自身的经验才能发挥正确的指导作用。超声图象扫查的是不同的切面，手法很重要，这就需超声医师不断实践总结的。许多病例声象图有一定特征，但都不是特异性的，如肝硬化合并脂肪变或肝癌合并脂肪变都表现为高回声团，小肝癌的低回声区与局灶性炎症的低回声区，要做出鉴别诊断是很困难的，对此有经验的医师与缺少经验的医师在观察角度与思考的深度上不同诊断水平自然不同，因此在大量临床实践中取得丰富经验，拓展对疾病认识的广度和深度是减少误诊的重要基础。

3思维因素

正确的思维能减少漏诊、误诊。超声对胆囊结石或肝囊肿根据声象图特征就可以直接作出诊断，因其准确、灵敏、可靠临床较满意。有些超声医师看见胆囊内强回声团就诊断胆囊结石，看见肝内强回声团就诊断肝血管瘤，这样只是看图说话，而且思维很局限，事实上胆囊内强回声团表现有结石也有肿瘤、息肉、凝血块、胆泥等等，同样肝内强回声团虽然最常见的是血管瘤但并非只有血管瘤，此时就要积极问病史，根据病人体征及声象图特征逐一排除，使疾病范围逐步缩小，病变特征掌握的好，观察敏锐、思路正确的医师往往能一步步使诊断接近甚至符合病理。

4建立良好的超声质量控制流程

质量控制是避免误诊、漏诊的前提，也是提高超声诊断质量的措施。超声科要对仪器调节、操作手法、观察记录及报告、随访等方面应规范化并进行具体质量控制

超声工作经验总结篇3

关键词：细叶鼠曲草（Gnaphalium japonicum Thunb）；总黄酮；超声提取；正交试验

中图分类号：TQ461 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）04-0712-04

细叶鼠曲草（Gnaphalium japonicum Thunb）为菊科鼠曲草属植物，鼠曲草属植物全世界共有200多种，分布广泛，资源蕴藏量大。中国鼠曲草属植物有20余种[1]，在民间有相当长的使用史，俗称“面蒿”、“清明菜”，是具有浓郁民族资源特色的食品[2]；同时也是丰富的药用资源，广泛用于痛风、炎症、痈疮肿毒、肠炎痢疾、活血止血等病症[3-6]，细叶鼠曲草就是其中的一种。细叶鼠曲草主要分布在中国长江以南的地区，贵州省江口、贵阳、平塘、荔波、雷山均有分布，生长在海拔780～1 200 m的山坡阳处草地，全草入药，性甘平，清热利湿，解毒清肿，主治结膜炎、咽喉肿痛、尿道炎[7]；畲族同胞常用于治疗肝炎疾病，疗效显著[8]。前人的研究表明，鼠曲草属植物的主要化学成分为黄酮和二萜类[9-11]。尚未见细叶鼠曲草提取纯化相关化学成分方面的研究报道。本研究首次通过筛选细叶鼠曲草总黄酮提取工艺，获得提取优化工艺条件，为今后进一步分离纯化细叶鼠曲草总黄酮获得有效成分提供参考，也为该资源的深入开发利用创造条件。

1 材料与方法

1.1 试验仪器与材料

721型紫外分光光度计（天津冠泽科技有限公司）；HB-10250型数控超声仪（江苏汉邦科技有限公司）；BS210S型电子天平（北京赛多利斯天平股份公司）；EYELA N-1100型旋转蒸发仪（倍捷科技有限公司）。

细叶鼠曲草采集于贵州省江口县，经贵州省农业植物鉴定专家孟祥顺鉴定为菊科植物细叶鼠曲草；芦丁由中国药品生物制品检定所提供；其他试剂均为分析纯。

1.2 试验方法

1）细叶鼠曲草的提前处理。取细叶鼠曲草样品于60 ℃烘箱中干燥3 h，粉碎后移入干燥器中保存待用。

2）细叶鼠曲草总黄酮提取方法考察。细叶鼠曲草粉末60%乙醇浸泡0.5 h回流3次，合并滤液，回收乙醇定容供试液A。细叶鼠曲草粉末60%乙醇浸泡0.5 h超声3次，合并滤液，回收乙醇定容供试液B。细叶鼠曲草粉末蒸馏水浸泡0.5 h回流3次，合并滤液定容供试液C。细叶鼠曲草粉末蒸馏水浸泡0.5 h超声3次，合并滤液定容供试液D。

3）测定波长的选择。精密量取供试品溶液和对照品溶液适量，按标准品的方法进行显色，在波长为200～800 nm处对供试样品溶液和对照品溶液扫描。供试品和对照品均在510 nm处有最大吸收峰，故确定510 nm为测定波长。

4）标准曲线的绘制。精密移取芦丁1 mg/mL对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL置于5个10 mL的量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀并放置6 min，加入10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀并放置6 min，加入4%氢氧化钠溶液4 mL，加入60%乙醇至刻度，摇匀并放置15 min，以60%乙醇溶剂为空白对照，于510 nm处测定吸光度。以芦丁含量为横坐标，吸光度为纵坐标作图，计算线性回归方程为y=0.147x+0.086，R2=0.992（n=5），结果显示芦丁浓度在20～60 μg/mL时具有良好线性关系。

5）细叶鼠曲草总黄酮含量的检测。取供试液用60%乙醇定容至100 mL，取1 mL按标准品方法显色，测定吸光度，并根据标准曲线计算样品中总黄酮含量，即总黄酮含量=提取物总黄酮质量/细叶鼠曲草质量。

6）单因素试验。选择适宜的溶剂和提取方法，对影响细叶鼠曲草总黄酮提取的可能因素，包括超声时间、乙醇体积分数、提取温度和料液比4个因素进行考察。在此过程中，以所得提取液的总黄酮含量作为考察指标，考察单因素对细叶鼠曲草总黄酮提取工艺的影响。

7）正交试验。为全面考察影响因素，优化黔细叶鼠曲草中总黄酮的工艺提取条件，在单因素试验的基础上，选定超声时间（A）、乙醇体积分数（B）、提取温度（C）、料液比（D）为考察因子，每个因素各取3个水平，按L9（34）正交表进行正交试验（表1），以细叶鼠曲草总黄酮含量为考察指标，确定最佳工艺条件。

8）验证试验。为进一步验证最佳工艺的可靠性，以优化工艺进行细叶鼠曲草总黄酮提取试验，重复3次，测定获取细叶鼠曲草总黄酮的含量。

2 结果与分析

2.1 提取工艺优选

分别称取药材2 g，加50倍量60%乙醇，浸泡0.5 h，进行回流提取和超声提取各3次，合并回收乙醇至无醇味，用60%乙醇定容于100 mL量瓶中，得供试液A和B。分别称取药材2 g，加50倍量蒸馏水，浸泡0.5 h，进行回流提取和超声提取各3次，合并回收乙醇至无醇味，用60%乙醇定容于100 mL量瓶中，得供试液C和D。结果显示乙醇超声提取优于其他方法，故选择乙醇超声提取作为总黄酮提取的方法（表2）。

2.2 单因素水平的确定

2.2.1 乙醇体积分数 分别准确称取2 g干燥的黔细叶鼠曲草粉末5份，分别加入50%、60%、70%、80%、100%的乙醇溶液各60 mL，在温度70 ℃、100 W超声波功率的条件下超声30 min，抽滤，定溶到100 mL，每次取1 mL，按标准品的方法进行显色测其吸光度（图1）。由图1可知，乙醇体积分数增加有利于提取含量的增高，但不是越高越好。随着乙醇体积分数的提高，细叶鼠曲草总黄酮含量得以提高。当乙醇体积分数达到60%时，提取总黄酮含量达最大值，继续增加乙醇体积分数，提取总黄酮含量增加不显著。当乙醇体积分数大于80%时提取总黄酮含量迅速降低，其原因可能是乙醇体积分数大于80%时，提取液杂质增加，溶液颜色变深，干扰紫外检测因素增加。因此，筛选乙醇体积分数60%～80%的范围作为进一步优化范围。

2.2.2 料液比 分别准确称取2 g干燥的黔细叶鼠曲草粉5份，按1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60（g/mL，下同）的料液比加入乙醇溶液，在70 ℃、100 W超声功率的条件下超声30 min，抽滤，定容到100 mL，每次取1 mL，按标准品方法显色，测定吸光度（图2）。由图2可知，适当增加溶剂有利于细叶鼠曲草总黄酮的溶出，当料液比达到1∶30时，提取细叶鼠曲草总黄酮效果最好；然而继续增加溶剂用量，提取总黄酮含量有所下降，究其原因可能与杂质含量随溶剂量增加而增大有关，并且溶剂量的增大势必增大工艺提取成本，造成浪费。因此综合考虑各方面因素，选择料液比1∶20～1∶40作为进一步优化的范围。

2.2.3 超声时间 准确称取2 g干燥的鼠曲草粉5份，分别加入60 mL 60%乙醇，在70 ℃、100 W超声波功率的条件下分别提取20、30、40、50、60 min，抽滤，定容，按标准品显色方法测定吸光度（图3）。由图3可知，超声时间控制在30 min左右，所提细叶鼠曲草总黄酮含量达到最大，当超声时间超过30 min，提取总黄酮含量有所下降。因此筛选超声时间20～40 min作为进一步优化的范围。

2.2.4 提取囟 分别准确称取2 g干燥的鼠曲草粉5份，分别加入60 mL 60%乙醇，在70 ℃、100 W的超声条件下分别于30、40、50、60、70 ℃超声30 min，抽滤，定容到100 mL，每次取1 mL，按标准品显色方法测定吸光度（图4）。由图4可知，适当提高提取细叶鼠曲草的温度，有利于总黄酮的溶出。温度的增加，有利于溶剂分子的热运动，增加渗透扩散溶出的速度，提高了总黄酮的浓度，且温度控制在70 ℃时提取效果最好，当温度进一步提升，将增加细叶鼠曲草其他杂质的溶出，降低总黄酮含量。因此，选择提取温度60～80 ℃作为进一步优化的范围。

2.3 正交试验设计及分析

为综合考察细叶鼠曲草总黄酮提取工艺影响因素的交叉效果，根据上述单因素试验结果及参考相关资料，确定以超声时间（A）、乙醇体积分数（B）、提取温度（C）和料液比（D）4个考察因素考察药材总黄酮含量，采用L9（34）正交表进行设计。由表3、表4可知，各因素对细叶鼠曲草总黄酮提取影响的顺序为C>A>B>D，即提取温度>超声时间>乙醇体积分数>料液比。并且提取温度对提取细叶鼠曲草总黄酮有显著影响，其他3个因素对结果的影响不显著。因此，通过比较试验结果，筛选出的最优试验条件为超声时间30 min、乙醇体积分数80%、提取温度60 ℃、料液比1∶30。

2.4 验证试验

精密称取细叶鼠曲草2 g，共3份，按最佳工艺提取，药液过滤，浓缩，定容于100 mL量瓶中。精密量取提取液1 mL定容于10 mL量瓶中，按照标准品显色方法测定吸光度，按照结果显示最佳工艺提取3组药液，所得细叶鼠曲草总黄酮吸光度为0.542、0.481、0.530，平均含量2 mg/g，试验结果高于正交试验其他组合，所得试验结果稳定可行。

3 小结与讨论

细叶鼠曲草作为一种贵州省民间药食两用的植物流传甚广，主要成分为黄酮和二萜类，然而目前深入研究开发的报道不多，仅局限于生药学、理化性质鉴定等方面[7]。本试验开创性地对细叶鼠曲草总黄酮提取工艺进行了研究，取得了一定的成果。通过正交试验，得到细叶鼠曲草在提取时间30 min、乙醇体积分数80%、提取温度60 ℃、料液比1∶30时提取效果最好，所得总黄酮含量为2 mg/g。另外，继续筛选其他方法提取细叶鼠曲草总黄酮，不失为提高提取条件的优良策略。比如微波提取法、碱性（酸性）稀醇提取法、酶法提取、热压流体萃取、超临界流体萃取等。

参考文献：

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超声工作经验总结篇4

【关键词】 草珊瑚；总黄酮；提取工艺；含量

［Abstract］ Objective To optimize the extraction process of the flavonoids from sarcandra glaber.Methods Used sarcandra glaber as raw materials，took ethanol extraction methods and used ultrasonic water bath to extract the flavonoids，then used L9（33） orthogonal experiment to optimize the extraction process of flavonoids.One of the experiments is the single factor experiment.According to the given conditions and measured flavones，what we will do is to have single factor experiments about different concentrations of ethanol，feed ratio，extraction time and temperature.According to the remarkable conditions from single factor experiments，we will have an orthogonal design and then select the best conditions.Results The optimum conditions of ultrasonic methods are for the concentration of 50 percent ethanol，feed rate 1∶15，the extracted time 45 minutes，the flavones in 69.25 mg/g.The optimum conditions of water bath for ethanol methods are for concentration of 50 percent，feed rate 1∶20，the extracted temperature 80 ℃ and the flavones in 49.60 mg/g.Conclusion The time used in ultrasonic extraction is greatly shorter than that of water bath and the experiment is easier to control than that of water bath，and the extraction rate of flavonoids also raise 28.38% than that of water bath.

［Key words］ sarcandra glaber；flavonoids；extraction process；content

随着草珊瑚在医药、兽药、保健食品及保健用品领域中的应用越来越广泛，对其有效成分的提取分离显得越来越重要。黄酮类化合物是草珊瑚中含量最多、最主要的活性成分之一。目前，对草珊瑚总黄酮的提取分离工艺技术研究尚未见有详细报道，本学位论文拟对草珊瑚总黄酮提取分离工艺技术进行较系统的研究并筛选最佳新技术新工艺。采用正交实验方法考察沸水提取法及乙醇提取法对草珊瑚总黄酮提取效果的影响；采用中药高新工程技术大孔吸附树脂对草珊瑚总黄酮进行分离纯化研究，以确定草珊瑚总黄酮最佳提取分离工艺条件及方法。以确定的草珊瑚总黄酮最佳提取工艺对不同季节采收的草珊瑚中总黄酮含量的动态变化，草珊瑚自然存放时间不同对总黄酮含量的影响，贵州草珊瑚根、茎、叶中总黄酮的不同含量进行动态变化研究，以确

定草珊瑚原料的最佳利用时机。从而为生产中最有效的开发利用草珊瑚，获得草珊瑚总黄酮的最大提取率，发挥草珊瑚的最大经济效益提供实验依据及指导，以达到提升草珊瑚药、食用产品的质量档次，使其更具三效（高效、速效、长效），三小（剂量小、毒性小、不良反应小），三便（便于贮藏，便于携带，便于服用）的特点，使其产品能走出国门、出口创汇，有着重要的经济和社会意义［1］。

1 材料与方法

1.1 实验材料 原料：草珊瑚购于贵阳花果园药材市场；NaNO2（固体）（重庆北碚精细化工厂）；95%的乙醇溶液（分析纯） （遵义国营化学试剂厂）；Al（NO3）3（固体）（汇源化工有限公司）；NaOH（固体）（天津市化学试剂六厂三分厂）。

1.2 实验器材 HH-S2s型恒温水浴锅（金坛市环保仪器厂）；UV2755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；抽滤机（金宇机械有限公司）；JY88（96）-IIN型数控超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科技有限公司）；FA1004型电子分析天平（上海天平仪器厂）。

1.3 实验方法

1.3.1 黄酮类化合物的超声波法提取研究 超声波提取方法：取原料草珊瑚5 g按实验要求的料液比加入乙醇，放入准备好的烧杯中，超声波提取，抽滤液体，取0.3 ml加入25 ml容量瓶中，再在25 ml容量瓶中加入1 ml 5%的NaNO2溶液，等待6 min后，再在25 ml容量瓶中加入0.5 ml 5%的Al（NO3）3溶液，等待6 min后，再在25 ml容量瓶中加入10 ml 5% NaOH溶液，并加入60%乙醇溶液定容。等待15 min后在500 nm处检测吸光度，然后记录数据［做空白对比的不加Al（NO3）3］。

超声波提取过程：（1）称取草珊瑚5 g分别装入准备好了的烧杯中，在烧杯上填上编号，并记录好数据。（2）用95%乙醇分别配制50%、60%、70%、80%的乙醇，按正交实验设计搭配装入对应号的锥形瓶中。（3）根据以上配置好的原料，放入超声波仪器中进行提取。（4）将以上提取物过滤，将滤液按照实验方法测出吸光度，并记录好数据。

1.3.2 黄酮类化合物的水浴提取研究 取原料草珊瑚5 g 按实验要求的料液比加入乙醇，放入锥形瓶中，水浴锅加热，抽滤液体，取0.3 ml加入25 ml容量瓶中，再在25 ml容量瓶中加入1 ml 5%的NaNO2的乙醇溶液，等待6 min后，再在25 ml容量瓶中加入0.5 ml 5%的Al（NO3）3的乙醇溶液，等待6 min后，再在25 ml容量瓶中加入10 ml 5% NaOH的乙醇溶液，并加入60%乙醇溶液定容。等待15 min后在500 nm处检测吸光度，然后记录数据［作空白对比的不加Al（NO2）3］。

水浴提取的实验过程为：（1）称取草珊瑚5 g分别装入准备好了的锥形瓶中，在锥形瓶上填上编号，并记录好数据；（2）用95%乙醇分别配制50%、60%、70%、80%的乙醇，按正交实验设计搭配装入对应号的锥形瓶中，并用保鲜膜密封好；（3）把锥形瓶放入已准备好的一定温度的水浴中加热，2 h后取出抽滤液体转入干净的烧杯中，并用保鲜膜密封好；（4）将以上的提取物过滤，将滤液按照实验方法测出吸光度，并记录好数据。

2 实验结果与讨论

2.1 标准曲线的制备 见图1。从芦丁对照储备液中分别吸取1 ml，放入1号、2号容量瓶中（25 ml），各加60 %乙醇至5 ml，加5%NaNO2溶液1.0 ml，摇匀放置6 min，再加10%Al（NO3）3 溶液0.5 ml（空白对照不加），摇匀再放置6 min，加4%NaOH溶液10 ml，摇匀放置15 min，从400～600 nm处测吸光值：可得出芦丁在500 nm处存在最大吸收峰。

回归方程：A=0.0095C+0.0016，线性范围为0～59.82 μg/ml，相关系数R2=0.9991

图1 标准工作曲线

首先，精密称取芦丁对照品18.6 mg，置于100 ml量瓶中，加60%乙醇溶解至刻度，摇匀即得对照品溶液。然后，分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0和5.0、6.0、7.0、8.0 ml对照品溶液置于25 ml容量瓶中，各加60 %乙醇至5 ml，加5%NaNO2溶液1.0 ml，摇匀放置6 min，再加10%Al（NO3）3 溶液0.5 ml，摇匀再放置6 min，加4%NaOH溶液10 ml，摇匀放置15 min，在500 nm波长处测定吸光度值，以同法配制空白（不加硝酸铝）对照。显色剂的配置：含量测定，标准曲线的绘制。所用试剂均为分析纯，4%NaOH乙醇溶液（200 ml）： 称取8 g NaOH置入烧杯中，用200 ml 60%乙醇溶解。10% Al（NO3）3乙醇溶液（25 ml）：称取2.5 g Al（NO3）3置于烧杯中，用25 ml 60%乙醇溶解。5%NaNO2乙醇溶液（50 ml）：称取2.5 g NaNO2置于烧杯中，用50 ml 60%乙醇溶液溶解［2］。

2.2 黄酮提取过程

2.2.1 提取方法 （1）超声波提取：精密称取干燥、粉碎的草珊瑚粉末5 g置于烧杯中，按实验要求的料液比加入乙醇溶液浸泡，然后用超声波提取。

（2）水浴法提取：精密称取干燥、粉碎的草珊瑚粉末 5 g 置于锥形瓶中，按实验要求的料液比加入乙醇溶液浸泡并用保鲜膜密封好，然后放在水浴锅上加热2 h，滤去残渣。

2.2.2 样品测定 精密吸取黄酮提取液 0.3 ml于25 ml容量瓶中，分别加入60%的乙醇6 ml，再加入5% NaNO2 1.0 ml，摇匀放置6 min，加入10%Al（NO3）30.5 ml（做空白对照的不加），摇匀放置6 min，加入4%NaOH 10.0 ml，加入60%的乙醇定容至刻度。摇匀放置15 min在500 nm处测吸光度，利用标准回归方程计算出浓度。得到标准曲线回归方程：A=0.0095C + 0.0016，相关系数R2=0.9992，根据标准方程可以推导出C=（A-0.0016）/0.0095，C为物质浓度（单位为μg/ml），提取黄酮的质量（mg）=C·25/3·10·V·10-3，提取总黄酮含量=提取黄酮的质量（mg）/原料草珊瑚质量（g）。

2.3 超声波法提取黄酮的单因素实验设计及正交实验数据处理

2.3.1 乙醇浓度对超声波法提取效果的影响 在五个烧杯中各取5 g草珊瑚放入，分别用40%、50%、60%、70%、80%乙醇溶液50 ml浸泡后超声波萃取15 min，按以上的含量测定方法测定吸光度值。见表1。表1表明：随着乙醇浓度的增加，黄酮的提取率也逐渐增加，但是当乙醇浓度超过60%的时候，黄酮的提取率反而降低，是因为随着乙醇浓度的增大，会使提取粗品中杂质含量增加，黄酮成分含量反而降低。表1 乙醇浓度对草珊瑚黄酮提取的影响

2.3.2 料液比对黄酮提取效果的影响 在四个烧杯中各取5 g草珊瑚放入，用60%的乙醇，料液比分别1∶5、1∶10、1∶15、1∶20浸泡后超声波萃取15 min，按含量测定方法测定吸光度值。见表2。表2 料液比对草珊瑚黄酮提取的影响表2可见，浸提固液比在1∶10至1∶20的范围内，浸提固液比在1∶15时提取率最高，但随后增加溶剂的量对提取率的变化不大，在实际操作中，当浸提固液比过小时，提取液偏少，不利于过滤分离，因此选择浸提固液比在1∶15较为合适。

2.3.3 超声波萃取时间对黄酮提取效果的影响 在四个烧杯中各取5 g草珊瑚放入，在料液比1∶10，60%乙醇条件下选择时间分别为15 min、30 min、45 min、60 min进行超声波萃取，按含量测定方法测定吸光度值。见表3。 表3 提取时间对黄酮提取的影响由表3可见，随超声波提取时间15~30 min，吸光度增长0.046，增长程度一般，而提取时间30~45 min时，吸光度增加了0.102，幅度大增，而提取时间45~60 min时，吸光度增长了0.012，增长程度大大降低。由此可以看出，再增加超声波提取时间，吸光度增速出现先增强再逐渐减缓趋势。造成提取物在超声作用达到一定时间后，提取率增加缓慢或呈下降趋势的原因可能是在长时间超声作用下，提取率逐渐向极限值靠近，致使提取率增幅降低。同时超声作用时间太长，会使提取粗品中杂质含量增加，有效成分含量反而降低，影响提取物有效含量。故45 min提取时间是最好的工艺条件。

由以上单因素实验可得出几个在实验过程中，对实验结果有显著作用的因素，他们分别是乙醇浓度 50%、60%、70%，料液比1∶10、1∶15、1∶20，提取时间15 min、30 min、45 min，运用这些条件做出提取工艺参数设计表（表4），为下面的正交实验做好准备条件。见表5、6。

由表5可看出R料液比＞R乙醇浓度＞R提取时间，所以本实验料液比作为主要因素，K1、K2、K3中数据最大者对应的水平为最佳水平，即转化率最高。本实验的最佳水平组合是A1B2C3，即最佳工艺条件为乙醇浓度50%、料液比1∶15、提取时间45 min。表4 提取工艺参数设计表表5 L9（33）提取工艺条件正交实验结果表表6 最佳工艺条件提取由表6可看出黄酮含量 69.25 mg/g，比正交实验中的A1B2C2（乙醇浓度50%、料液比1∶15、提取时间30 min）所提取出的黄酮含量还高，证明本次正交设计实验结论是合理的。

2.4 水浴法提取黄酮的单因素实验设计及其正交实验数据处理

2.4.1 乙醇浓度对水浴法提取效果的影响 在四个锥型瓶中各取5 g草珊瑚放入，分别用50%、60%、70%、80%乙醇溶液75 ml浸泡后，水浴提取2 h，按以上的含量测定方法测定吸光度值（表7）。表7 乙醇浓度对水浴法提取效果的影响由表7可看出：随着乙醇浓度的增加，黄酮的提取率也逐渐增加，但从60%～70%，吸光度增长幅度变小即提取的黄酮含量增长幅度变小，当乙醇浓度超过80%的时候，黄酮的提取率反而降低，提取的黄酮含量变小，是因为随着乙醇浓度的增大，会使提取粗品中杂质含量增加，有效成分含量反而降低，影响提取物有效含量。

2.4.2 提取温度对水浴法提取黄酮效果的影响 在四个锥形瓶中各取5 g草珊瑚放入，在料液比1∶20，60%乙醇条件下选择60 ℃、70 ℃、80 ℃、85 ℃进行水浴法提取，按含量测定方法测定吸光度值（表8）。

由表8可看出在乙醇浓度60%、料液比1∶20的不变条件下，随着提取温度的升高，吸光度值也在不断的增长，60 ℃~70 ℃的增长程度是最大的，吸表8 提取温度对水浴法提取黄酮效果的影响光度增长最大，但随着温度的继续升高，吸光度的增长程度越来越小，是因为随着温度的增加，提取出来的黄酮参与了其他的反应，故提取的增长率变小了（温度也不易太高，体积将会大量减少）。

2.4.3 料液比对水浴法总黄酮提取效果的影响 在四个锥形瓶中按料液比各取草珊瑚放入，在提取温度70 ℃、乙醇浓度60%条件下选择料液比分别为1∶15、1∶20、1∶25、1∶30进行水浴法提取，按含量测定方法测定吸光度值（表9）。表9 料液比对水浴法总黄酮提取效果的影响表9可见，浸提固液比在1∶15至1∶20的范围内，吸光度最高，但随后增加溶剂的量对吸光度的变化不大，在实际操作中，当浸提固液比过小时，提取液偏少，不利于过滤分离，因此选择浸提固液比在1∶20较为合适。

由以上单因素实验可得出几个在实验过程中，对实验结果有显著作用的因素，他们分别是乙醇浓度50%、60%、70%，料液比1∶15、1∶20、1∶25，提取温度60 ℃、70 ℃、80 ℃，运用这些条件做出提取工艺参数设计表（表10），为下面的正交实验做好准备条件，见表11、12。表10 提取工艺参数设计表表11 水浴法提取黄酮L9（33）实验表表12 最佳工艺条件确定表由表11可看出R料液比＞ R提取温度＞R乙醇浓度，所以本实验料液比作为主要因素，K1、K2、K3中数据最大者对应的水平为最佳水平，即转化率最高。本实验的最佳水平组合是A1B2C3，即最佳工艺条件为乙醇浓度50%、料液比1∶20、提取温度80 ℃。

由表12可看出黄酮含量49.60 mg/g，比正交实验中的A1B2C2（乙醇浓度60%、料液比1∶20、提取温度80 ℃）所提取出的黄酮含量还高，证明本次正交设计实验结论是合理的。

3 结论

本文是通过对两种不同的提取方法对草珊瑚进行总黄酮的提取的研究，以便为以后的提取研究找出合适的实验条件及设计。 两种不同的方法，同样的浸提试剂，所提取的黄酮量是超声波法提取的多于水浴法提取的，实验得出结果：超声波法的最佳工艺条件为乙醇浓度50%、料液比1∶15、提取时间45 min，根据确定的最佳工艺条件，按实验中的测定方法测得提取的总黄酮含量为69.25 mg/g。水浴法的最佳工艺条件为乙醇浓度50%、料液比1∶20、提取温度80 ℃、提取2 h，按实验中的测定方法测得提取的总黄酮含量49.60 mg/g。

超声波辅助提取的优点有： （1）所用的提取时间较水浴法缩短了两倍多；（2）实验过程中不用像水浴法一样，要注意温度的控制［3］；（3）所提取的黄酮含量比水浴提取高了28.38%。

提取黄酮量，超声波法提取的多于水浴法，分析原因可能是：（1）超声波的空化作用对细胞膜的破坏有助于总黄酮的释放与溶出；（2）超声波使浸提剂和提取物不断震荡，有助于溶质的扩散；（3）超声波的热效应使介质温度基本维持在60 ℃，对草珊瑚有水浴效果；草珊瑚分布广泛，资源丰富，成分多样。药理作用广泛、毒性小，用于治疗多种疾病，无明显副作用。目前已有厂家生产了针、片等剂型，日用化工厂以此为原料，制成草珊瑚牙膏。产生了较好的社会和经济效益。从文献资料［4］看来，尽管已进行了生药学、化学成分、药理、临床等方面的研究，但是仍有许多问题有待进一步深入研究。

【参考文献】

1 郁建生，李英伦.草珊瑚研究进展.安徽农业科学，2005，33（12）：2390-2392.

2 江苏新医学院.中药大辞典.上海：上海科学技术出版社，1997，57.

3 徐志杰.草珊瑚的研究概况.江西中医学院学报，1994，1：36-37.

超声工作经验总结篇5

【摘要】

目的 采用单频探头式超声(25 khz)技术对三七有效成分进行提取。方法 选择乙醇体积分数、物料粒径、提取固液比、提取温度、提取时间5个因素进行正交实验。结果 影响三七药材中人参皂苷rg1的提取率的因素依次为：乙醇体积分数>物料粒径>固液比>提取时间>提取温度，优化工艺参数为：乙醇体积分数95%，物料粒径80～100目，固液比1∶15，提取时间40 min，提取温度40 ℃。在此条件下，人参皂苷rg1的提取率是69.38%。结论 本研究将为三七工业化生产工艺参数的选择提供实验依据。

【关键词】 探头式 超声提取 三七 人参皂苷rg1 正交试验

abstract:objective to extract the active components of panax notoginseng by single?frequency ultrasound wave.methods the concentration of alcohol,size of material,ratio of solid to liquor,temperature and time of extraction were optimized by orthogonal design. results the factors influencing extraction rate of ginsenoside rg1 in panax notoginseng included ethanol concentration, particle size,solid/liquor,temperature and extraction time. their optimal parameters were: 95% of ethanol concentration,particle size 80-100 mu; solid/liquid ratio 1∶15 g/ml,ultrasound time 40 min,ultrasound extraction temperature 40 ℃. under this optimal condition,the yield of ginsenoside rg1 was 69.38%. conclusion this method provided useful parameters for the extraction of panax notoginseng.

key words:ultrasonic horn; panax notoginseng; ginsenoside rg1; orthogonal experiment

三七为五加科植物三七(panax notoginseng)的干燥根,有散淤止血、消肿止痛的功效，用于咯血、吐血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛等[1]。三七含有多种与人参皂苷类似的成分,如人参皂苷rb1、人参皂苷re、人参皂苷rg1和三七皂苷r1等皂苷类成分,总皂苷(total saponins of panax notoginseng)是主要有效成分[2,3]。三七总皂苷具有扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延长凝血时间、降血脂、清除自由基、抗炎等作用，临床上主要用于心脑血管疾病的治疗[4,5]。三七有效成分的常规提取方法有煎煮法、回流法、渗漉法等，采用溶剂多为乙醇或甲醇,这些方法具有提取效率低、温度高、溶剂消耗量大、有效成分容易被破坏等传统溶剂提取的缺点[6]。本文采用单频超声技术从三七中提取人参皂苷rg1，并用正交试验法进行工艺优化，为三七有效成分提取的工业化应用提供参考。

1 仪器与试剂

1.1 材料

三七药材(广州汉方现代中药研究开发有限公司提供，批号:200207)，人参皂苷rg1对照品(中国药品生物制品检定所，批号:0703?200120);乙腈(迪马公司，色谱纯);乙醇、甲醇、乙醚均为市售分析纯。

1.2 仪器

waters2695/2996型高效液相色谱仪(美国waters公司);pda检测器(waters 2996)。

变幅杆浸入式超声波设备是把发射超声波的“探头”直接浸入被处理溶液中。所谓“探头”是由超声波换能器驱动的声变幅杆的发射端，由换能器发射的超声波，经过发射端面直接辐射到被处理溶液中，通过调换所使用探头可以控制辐射声强。本文用的探头式超声波处理机(25 khz，功率可调，昆山市超声仪器有限公司)，见图1。

2 方法与结果

2.1 人参皂苷rg1的测定方法

2.1.1 色谱条件 色谱柱为hypersil ods(5 μm，250 mm×4.6 mm)，检测波长为203 nm，流动相为0.05 mol·l-1磷酸水溶液?乙腈(体积比81∶19)，柱温为30 ℃，流速为1 ml·min-1，分析时间60 min，进样量10 μl。

2.1.2 分析溶液的制备[1] 对照品溶液：取人参皂苷rg1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含80 μg的溶液作为对照品溶液。

供试品溶液：称取三七药材细粉0.5 g，加体积分数95%的乙醇溶液60 ml，用超声提取30 min，滤过，浓缩蒸干后加甲醇转移至50 ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.1.3 系统适用性试验 将对照品和供试品溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图。结果显示，在此条件下，供试品中人参皂苷rg1与其他杂质峰均能达到基线分离，人参皂苷rg1色谱峰的理论板数不低于2 000。

2.1.4 线性关系考察 分别精密吸取不同体积的人参皂苷rg1对照品储备液，用甲醇稀释调配成系列对照品溶液，分别进样10 μl，测定峰面积积分值。以人参皂苷rg1的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为：y=3.31×105x-4.39×104，r=0.999 7，表明人参皂苷rg1的质量浓度在0.080～1.620 mg/ml范围内与峰面积线性关系良好。

2.1.5 精密度试验 取同一质量浓度对照品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，结果峰面积的rsd值为0.89%，表明方法精密度良好。

2.1.6 重复性试验 分别取同一批样品6份，按上述色谱条件进行测定，测得含量的rsd值为1.79%，表明重复性较好。

2.1.7 加样回收率试验 取已知含量的同一批供试品适量，共6份，分别精密加入同一质量浓度(0.199 2 mg/ml)的人参皂苷rg1对照品溶液0.5 ml，按“2.1.2”项下方法制成供试品溶液进行测定，计算得回收率为98.4%，rsd为2.76%。

2.2 提取率的计算

精密称取三七粉末0.5 g，置索氏提取器中,加乙醚80 ml,水浴上提取2 h,取出,弃去乙醚液,再加甲醇80 ml提取4 h,提取液抽滤定容，按上述方法测定，计算提取液中人参皂苷rg1的含量,并以此计算出各处理的人参皂苷rg1提取率。

2.3 正交试验设计

选择乙醇体积分数、物料粒径、提取固液比、提取温度、提取时间5个因素，按l16(45)表安排正交实验，见表1，正交试验结果及方差分析见表2、表3。

由表2可见，在影响探头式超声提取人参皂苷rg1的5个因素中，乙醇体积分数的影响最大，提取温度的影响最小，影响大小次序为：a>e>b>c>d，即乙醇体积分数>物料粒径>固液比>提取时间>提取温度。表3的方差分析结果表明，乙醇浓度、物料粒径和固液比对人参皂苷rg1提取率的影响有显著性，而提取温度对提取率的影响无显著性。最佳提取工艺条件为a4b4c4d4e4。考虑企业工业化放大生产的生产效益，为了获得较高的提取率和节省溶剂用量，优化工艺参数为a4b3c4d2e4，即乙醇体积分数95%，物料粒径80～100目，固液比1∶15，提取时间40 min，提取温度40 ℃。表1 因素水平表表2 l16(45)正交实验结果表3 正交实验方差分析表

2.4 验证试验

根据确定的工艺条件(a4b3c4d2e4)进行3次验证试验。3次试验人参皂苷rg1的提取率分别为68.85%、69.72%和69.57%，平均提取率为69.38%，故确定最佳提取工艺条件为a4b3c4d2e4。

3 讨 论

植物活性成分较复杂，对于不同物质超声提取工艺不同。本实验结果表明，采用25 khz探头式超声提取三七中的人参皂苷rg1是可行的，在乙醇体积分数95%，物料粒径80～100目，固液比1∶15，提取时间40 min,提取温度40 ℃的提取工艺下，人参皂苷rg1的提取率达69.38%。

据文献[7]报道，三七中人参皂苷rg1回流提取优化条件为：药材加体积分数60%乙醇浸泡1.0 h,回流提取2次,每次2.0 h,第1次加醇量为药材的10倍量,第二次加醇量为药材的8倍量。在此条件下计算得人参皂苷rg1的提取率是60.75%。本研究采用探头式超声提取三七中人参皂苷rg1的提取率达到69.38%。对比文献[7]结果可知，相对乙醇回流提取，探头式超声提取三七中人参皂苷rg1具有提取时间短、溶剂用量少、提取率高等优点。

【参考文献】

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[m].北京：化学工业出版社，2005：68-69.

[2] 元文勇,姜文泉,姜惟龙.三七总皂甙在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中肝细胞超微结构的保护作用[j].中国误诊学杂志,2003,3(11):1618-1620.

[3] 龙在云,伍亚民,曾琳,等.三七总皂甙对脊髓损伤后脊髓血流量和感觉诱发电位的影响[j].第三军医大学学报,2004,26(3):212-213.

[4] 刘群,朱辉,范佳,等.脑出血早期应用三七总皂甙治疗的临床观察[j].中风与神经疾病杂志,2004,21(2):144-146.

[5] 李青,杨晓阳.三七总皂甙对脑出血恢复期的疗效观察[j].中国误诊学杂志,2004,4(2): 262-263.

[6] 韩一波.三七总皂苷的研究进展[j].中国药师,2005，8(3):197-199.

超声工作经验总结篇6

【关键词】 石韦;，，，总黄酮;，，鞣质

摘要：目的优化石韦总黄酮和鞣质的超声提取工艺。方法以总黄酮和鞣质含量为考察指标，通过正交设计试验筛选石韦总黄酮和鞣质的最佳超声提取工艺。结果总黄酮的最佳提取条件为A1B3C2D2，即φ（乙醇）=60%，m［φ（乙醇）］∶m（石韦）=20∶1，提取时间60 min，共提取2次，测得石韦中总黄酮的平均含量为3.768%；鞣质的最佳提取条件为A1B3C2D1，即φ（乙醇）=10%， m［φ（乙醇）］∶m（石韦）=20∶1，提取时间30 min，提取1次，测得石韦鞣质平均含量为6.266%。结论 通过正交设计实验优选得到的石韦总黄酮和鞣质的超声提取工艺条件稳定可行。

关键词：石韦; 总黄酮; 鞣质

Study of Ethanol Extraction Process for Total Flavonoids And Tannin Containment of Flolium Pyrrosiae by Orthogonal Design

Abstract:ObjectiveTo optimize ultrasonic extracting process of the total flavonoids of and tannin Flolium pyrrosiae with orthogonal design. MethodsThe optimum ultrasonic extraction conditions were investigated by orthogonal design and with the total flavonoids and tannin as the content index. ResultsThe optimum extraction condition of the total flavonoids obtained was: A1B3C2D2，φ（CH3CH2OH）=60%，m［φ（CH3CH2OH）］∶m（Flolium pyrrosiae）=20∶1，the time of extracting was 60 minutes， the total times of extraction was 2， the average containment flavonoids of Flolium Pyrrosiae was 3.768% ；the optimum extraction condition of tannin obtained was: A1B3C2D1，φ（CH3CH2OH）=10%，m［φ（CH3CH2OH）］∶m（Flolium pyrrosiae）=20∶1，the time of extraction was 60 minutes，the total time of extraction was 1， the average containment tannin of Flolium Pyrrosiae was 6.266%. ConclusionThe optimized process is feasible for the extraction of the total flavonoids of Flolium Pyrrosiae and tannin.

Key words:Flolium Pyrrosiae; Total flavonoids； Tannin

石韦系水龙骨科石韦属植物的全草，主要分布于华北、西北及湖南等地。石韦味苦、甘、性微寒，归肺，膀胱经。具有利尿通淋、清热止血的功效。主治肺炎水肿、膀胱炎、泌尿系统结石、慢性气管炎、吐血、尿道炎、感冒咳嗽及小便不利等。药理研究表明庐山石韦水煎浓缩液及提取物经动物实验均有镇咳及祛痰作用，对于因化学疗法及放射疗法引起的白细胞下降，有使其升高作用，并有抗单纯性疱疹病毒作用［1］。石韦含有多种生物活性物质，对它的研究很少，尤其是对总黄酮和鞣质提取工艺的研究尚未见报道。超声技术的应用近年来得到很大发展。超声具有穿透力强、选择性高等特点。超声技术可以大大加快反应速度，缩短反应时间 ［2］。超声技术应用于植物细胞破壁，有效地提高了收率［3］。

本实验运用超声技术辅助研究石韦中总黄酮和鞣质的提取工艺，反应速度加快。

1 材料和方法

1.1 仪器和材料UV2401型分光光度计(日本岛津)，超声波仪 (浙江省象山县石浦海天电子仪器厂)，BS210S型万分之一电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；SHBB95型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司），HHS数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）。石韦（石韦粉碎备用）、95%的酒精、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、EDTA、铬黑T、醋酸锌、浓氨水（试剂为分析纯）。

1.2 方法

1.2.1

原理乙醇是常用的黄酮类化合物提取溶剂，利用黄酮类分子中的酚羟基可与Al3+在碱性溶液中显色的原理测定其含量［4］；鞣质为多羟基物，具有较强极性，不稳定的特点，故在提取时选用极性较大溶剂、短时间提取的方法，本实验选取的是一定浓度的乙醇溶液，采用超声提取法，最后用络合滴定法测其含量，计算公式为鞣质%= 0.1556×(V1×C1-20×V2×C2)

W×100%［5］。在正交设计研究石韦总黄酮和鞣质的提取工艺实验中［6］，总黄酮和鞣质采用的是超声提取法。用比色法测定黄酮含量，络合滴定法测定鞣质含量，最后运用数理统计方法处理实验数据 ，最终找出最佳提取条件。

1.2.2 标准曲线的绘制精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品10 mg置烧杯中，加适量乙醇在水浴上微热溶解，放冷后转移到50 ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀（每毫升含芦丁0.2 mg），精密吸取标准溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml于25 ml容量瓶中，分别加水至6 ml，分别加入5%亚硝酸钠1.0 ml混匀，放置6 min，然后加入10%硝酸铝1.0 ml，混匀，放置6 min，加入4%氢氧化钠10.0 ml，用水稀释至刻度，混匀，放置15 min，在510 nm处以第1瓶溶液作空白分别测定吸光度，绘制标准曲线，建立回归方程A=11.225C+0.0027，r=0.999 13。

1.2.3 从石韦中提取总黄酮精密称取一定量的石韦，按因素水平表超声提取石韦中的总黄酮，减压过滤，用100 ml的容量瓶定容。摇匀，放置5 min。吸取0.5 ml移至10 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠0.4 ml，放置6 min后，加10%硝酸铝0.4 ml，放置6 min后，再加4%的氢氧化钠4 ml加水至刻度，摇匀，放置15 min；在波长510 nm处，进行吸光度的测定，最后处理数据。

1.2.4 从石韦中提取鞣质精密称取一定量的石韦，按因素水平表超声提取鞣质，减压过滤，将提取液恒温水浴15 min后，加入25 ml醋酸锌溶液，18 ml浓氨水，再恒温水浴30 min。取出冷却至室温，用一定浓度乙醇溶液在500 ml容量瓶中定容，静置10 min，精密吸取上层清液25 ml于250 ml锥形瓶中，加蒸馏水200 ml，量取25 ml氨－氯化铵缓冲溶液（pH=10），加少许铬黑T（固体），以0.05 mol・L-1EDTA滴定，记下EDTA溶液体积，最后处理数据。

2 结果

2.1 提取黄酮正交实验数据处理与分析见表1～2。

表1 因素水平（略）

表2 正交实验结果分析（略）

由表2中极差可知，各因素依次为B＞A＞C＞D，以A1B3C2D2为最佳。

2.1.2 提取鞣质正交实验数据处理与分析见表3～4。

表3 因素水平（略）

表4 正交实验结果分析（略）

由表4中极差分析可知，各因素依次为A＞B＞C＞D，以A1B3C2D1最佳。

3 讨论

研究表明，黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多种生理活性［7］。鞣质广泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗过敏、抗衰老等，鞣质类药物的研制引起了国内外学者广泛的关注［8］。本文根据正交设计实验采用超声技术从石韦中提取总黄酮，其优选的最佳工艺条件为：乙醇浓度为60%，乙醇与石韦的质量比为20∶1，提取时间60 min，共提取2次，测得石韦中总黄酮平均含量为3.768%；从石韦中提取鞣质优选的最佳工艺条件为：乙醇浓度10%，乙醇与石韦的质量比为20∶1，提取时间30 min，提取1次，测得石韦鞣质平均含量为6.266%。石韦提取工艺条件的筛选，其评价指标的选择十分关键。仅仅用鞣质和总黄酮得率评价工艺条件尚不完全，有待进一步研究。

参考文献

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超声工作经验总结篇7

【关键词】  桑黄; 总黄酮; 超声提取; 正交设计

research on the extraction of total flavonoids fromphellinus vaninii with ultrasonicassisted technique

xia guohua, ge yanru, fu haizhen, qi xueyong

(school of pharmacy, jiangsu university, zhenjiang jiangsu 212013, china)

[abstract] objective: the best extraction technique of total flavonoids from phellinus vaninii with ultrasonicassisted technique was explored.methods： the orthogonal design was used in the research on the ultrasonicassisted technique extraction technique. results： the optimum conditions of the extraction were as follows: ethanol 70%; extracting temp 45℃; the ratio of solid to liquid 1∶30; extracting time 45 min. conclusion： this process was featured by higher extraction rate and shorter extraction time.

[key words] phellinus vaninii; total flavonoids; ultrasonic; orthogonal design

桑黄属担子菌亚门、多孔菌科, 又称桑臣、桑耳、胡孙眼、孔菌等, 是一种珍贵的药用真菌，在我国传统中药中用于治疗痢疾、盗汗、血崩等[1]。目前主要应用于肝炎及癌症的治疗，其特有的抗肿瘤活性及低毒性使其成为研究热点[2,3]。桑黄主要化学成分为多糖和黄酮。现有的关于桑黄的文献报道中，提取桑黄总黄酮多采用乙醇浸提或回流提取，试验耗费时间长，且提取率不理想[4]。

本研究采用超声辅助提取，并对提取条件进行优化。

1 仪器与试剂

1.1 仪 器

kq250b型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);rotavapor r200旋转蒸发仪(德国buchi公司);fd1c50冷冻干燥机(北京博医康技术公司);uv2401型紫外分光光度仪(日本岛津公司)。

1.2 试 剂

芦丁标准品(南京泽朗，经高效液相色谱法检测纯度大于99%);桑黄子实体(phellinus vaninii，长白山区杨树野生桑黄，购自延吉长白山特产经营部，本院张朝辉教授鉴定);水为实验室自制去离子水，提取乙醇(广源医药，药用规格)，其余试剂为分析纯。

2 提取工艺

2.1 提取方案

准确称取60目桑黄子实体粉末15 g，加入一定体积的乙醇，室温下浸泡12 h后超声提取，残渣用相同浓度和体积的乙醇再超声提取一次，合并两次提取液，回收乙醇，浓缩液冷冻干燥，得到桑黄提取物。

2.2 黄酮的定性反应

2.2.1 盐酸-镁粉反应 少量提取物用乙醇溶解，加少许镁粉，浓盐酸3～4滴。加入镁粉前溶液呈暗黄色，滴加浓盐酸后有泡沫产生，且升腾的泡沫呈橙红色。

2.2.2 浓氨水反应 提取物乙醇溶液点在滤纸上，置于浓氨水上方30 s，紫外灯下观察，显黄色荧光斑点。

2.2.3 薄板层析 提取物乙醇溶液点于硅胶板上，展开剂(正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5)中展开，置于紫外灯下观察，显黄色荧光斑点。

2.3 uv法测定桑黄总黄酮的含量[5]

2.3.1 溶液的配制 准确称取芦丁标准品23.2 mg，用70%乙醇溶解并定容至50 ml，作为标准液备用。称取0.8 g硼酸和1.0 g乙酸钠，用70%乙醇溶解并定容至100 ml，作为络合试剂。

2.3.2 标准曲线 准确吸取标准芦丁溶液0.5,1.5,2.0,2.5,3.0 ml ,加70%乙醇定容至25 ml。分别精密吸取上述溶液5 ml，加5 ml络合试剂混匀后，384 nm处测光密度。

以光密度d为纵坐标，芦丁浓度c(μg·ml-1)为横坐标，绘制标准曲线，得芦丁浓度(c)与光密度(d)关系曲线的回归方程式：d=0.03c-0.0182，r2=0.9992。

2.4 正交试验

2.4.1 正交试验设计 选取乙醇浓度、提取温度、料液比和提取时间作为4个影响提取的因素，设计l9(34)的4因素3水平正交试验。如表1所示。表1 正交试验因素与水平表

2.4.2 总黄酮提取率 分别准确称取各提取条件下的提取物约17.3 mg，加70%乙醇定容至25 ml。精密吸取各样品液1.5 ml，加70%乙醇定容至25 ml。分别精密吸取5 ml与5 ml络合试剂充分混合，384 nm处分别测光密度，按照下列公式计算总黄酮提取率。

总黄酮提取率=提取物总黄酮黄酮量原药材量×100%

2.4.3 正交试验结果 以桑黄总黄酮提取率为指标，根据上述正交试验因素水平表，采用l9(34)来确定最佳提取条件，正交试验结果见表2。

由表2正交试验结果可以看出，影响总黄酮提取率的反应条件中各因素主次为b>c>a>d，即提取时间>料液比>乙醇浓度>提取温度;最优的提取工艺应为a2b2c3d2，即：乙醇浓度70%，料液比1∶30，提取温度为45℃，时间为45 min。表2 超声提取桑黄中总黄酮正交试验结果

2.5 验证试验

最优的提取工艺为a2b2c3d2，并未在正交试验中进行，需进行验证试验。准确称取15 g的桑黄子实体粉末，加入70%乙醇450 ml，室温下浸泡12 h后超声45 min，控制温度45℃，残渣以相同方法再超声提取一次，合并两次提取液，回收乙醇，浓缩液冷冻干燥后按“2.4.2”项下测得总黄酮含量为76.6%,提取率为7.07%，结果与正交结论一致。

最大料液比1∶30时并未出现提取效应的下降，因此对该条件进行验证，45℃时用70%乙醇提取45 min的条件，选取料液比1∶40与1∶50进行提取，测得其总黄酮提取率分别为6.44%与6.73%，与同等条件下料液比1∶30的验证试验相比没有提高，因此1∶30可认为是最佳料液比。2.6 加热回流提取

准确称取60目桑黄子实体粉末15 g，加入70%乙醇450 ml，室温下浸泡12 h后加热回流提取3 h，残渣加70%乙醇450 ml再回流提取3 h，合并两次提取液，回收乙醇，浓缩液冷冻干燥后按“2.4.2”项下测得总黄酮含量为33.0%,提取率为2.72%。

3 讨 论

相对于加热回流提取，超声辅助提取方法提高了桑黄总黄酮的提取率，缩短了提取时间，操作简单。

最优提取条件下总黄酮提取率高，但是其杂质含量也较高，可能会对进一步的分离纯化带来困难。

目前市场商品性 “桑黄”物种混乱，由于寄主不同、菌株来源不同等因素，其黄酮含量差异也较大，用上述工艺考察测定市面常见的几个品种，结果表明，杨树桑黄中总黄酮的含量最高，其次是白桦桑黄和黑桦桑黄，落叶松桑黄中含量最低。

【参考文献】

 

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超声工作经验总结篇8

【关键词】 彩色多普勒超声； 锁骨下静脉； 穿刺置管失败

自1952年Au-baniac（法国）介绍了锁骨下腔静脉插管的方式，自此中央静脉导管治疗如雨后春笋般的发展，大大加速中央静脉输液治疗的发展，免去多次穿刺给患者带来的痛苦[1]。结合本院肿瘤科室情况，因肿瘤内科治疗多数以化疗及对症营养支持治疗为主，许多患者需多疗程化疗和（或）长期静脉补液对症治疗，在临床工作中常常遇到许多患者因长期输液治疗未结束时外周浅表血管已经被破坏，给浅表静脉穿刺造成很多困难，护理工作负荷加大，甚有刺激性强的化疗药物外渗引起组织坏死，长期不愈合，患者痛苦不堪[2-3]。有的因外周静脉穿刺困难导致经静脉输液治疗计划无法完成，锁骨下静脉穿刺置管术成为临床常用的血管穿刺技术，但常常遇到首次穿刺不成功的患者较多。本研究选取2005年5月-2007年6月本院实施经验性锁骨下静脉穿刺置管术失败的肿瘤患者共56例，随机分为观察组和对照组各28例。两组均采取锁骨下入路，观察组在彩色多普勒引导下实施锁骨下静脉穿刺置管，对照组采用常规经验性盲穿在穿刺失败的相应的对侧再次实施锁骨下静脉穿刺置管，取得了满意的效果，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2005年5月-2007年6月本院实施经验性锁骨下静脉穿刺置管术失败的肿瘤患者共56例，随机分为观察组和对照组各28例。观察组男16例，女12例，年龄36～76岁，平均（46.4±5.4）岁；对照组男15例，女13例，年龄34～77岁，平均（45.6±4.2）岁。手术前给予患者血常规、出凝血时间、心电图、胸片检查，生理盐水250 ml，2%利多卡因5 ml，肝素帽一只，3M敷贴一张，深静脉穿刺包一只，无菌手套，0.5%碘付消毒液，统一使用的中心静脉导管（单腔）一套，产品标准：进口产品注册标准YZB/USA 0053-20059（中心静脉导管），注册号：国食药监械（进）字2005第3770774号 ，生产商Arrow International Inc。两组患者性别、年龄、病情程度等一般资料比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法 观察组在超声治疗室，取仰卧位，头面部转向穿刺点对侧，肩下垫一薄枕，以充分暴露胸锁乳肌，采取锁骨下入路，采用多普勒超声技术给以血管定位，仪器多普勒超声参数设置为ATL，HDI，UM9电脑声像议，探头频10 MHZ，彩色多普勒超声血流显像检查，采用滤波低通（50～100 HZ）及底数度量程7 cm/s，脉冲多普勒超声检测取样角25～30度，取样门宽15 mm，速度以不产生成叠为标准，采用与超声仪器探头相配套的穿刺引导架，以保持穿刺针总是在超声扫查切面内，准确定位锁骨下静脉后，局部麻醉，穿刺针通过穿刺引导架进入右锁骨下静脉后，探头可以撤离，通过穿刺针置入导丝，退出穿刺针，经扩张器扩张皮下组织后退出，置入导管，退出导丝，成人导管到达上腔静脉左侧须15 cm，右侧12 cm。再次回抽导管，回血通畅后以肝素生理盐水封管，接上肝素帽。对照组根据血管解剖特点，经验性盲穿刺，对照组所有患者按常规锁骨下静脉穿刺置管流程进行，由穿刺技术熟练的临床医生进行。

1.3 评价方法 观察两组的一次穿刺成功率、总成功率、并发症发生率，比较两组一次穿刺成功率、总成功率、手术并发症发生率、手术平均利用的时间和手术总使用时间。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件包，对各组数据的统计结果进行统计学分析。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用配对t检验，计数资料以绝对数和百分率表示，疗效分析采用 字2检验，以P

2 结果

采用彩色多普勒超声引导下再次穿刺置管组，一次性穿刺成功27例，总成功28例，1例患者因导管置入后，导管回血不畅，实施再次超声引导下穿刺置管成功。其中最长手术时间为26 min，最短为14 min，平均时间（18.9±5.8）min，总时间为531 min，总成功率为100%，一次性成功率为93.1%，并发症发生率为0。对照组一次性穿刺置管成功10例，总成功21例，7例穿刺失败，其中2例因穿刺针刺破锁骨下动脉引起皮下血肿终止手术，3例手术后常规透视发现导管进入颈内静脉，防止栓子形成，拔除导管，1例患者在导管置入后出现心慌、胸前区不适，考虑导管置入过深到达右心房所致，拔除导管终止手术，1例没有穿刺到锁骨下静脉再次终止手术，最长手术时间62 min，最短时间16 min，平均时间（33.2±9.7）min，总时间为929 min，一次性成功率为35.7%，总成率为75%，并发症发生率为21%。两组一次穿刺成功率、总成功率、手术并发症发生率、手术平均时间比较差异均具有统计学意义（P

3 讨论

随着导管材料和介入诊疗技术的快速发展，近年血管穿刺技术也突飞猛进，常规血管穿刺技术是根据人体血管走行特点及常用穿刺工具[4]。虽然血管穿刺是最基本、最常用的医疗技术，锁骨下静脉位于锁骨后方，位置恒定表浅，粗大，经常处于充盈状态，经锁骨下静脉穿刺置管术具有体表定位方便，穿刺成功率高，易固定，治疗患者护理方便，活动不受限，不易受污染等优点，及锁骨下深静脉留置管价格相对PICC管价格低廉，广大患者普片经济能所承受，实施锁骨下静脉穿刺实施中心静脉导管置管术患者较多等特点，但有的患者锁骨下静脉血管变异较大，常常给锁骨下静脉穿刺置管带来困难[5-6]。临床中常常遇到经验性穿刺置管失败的患者较多，给临床治疗带来许多困难，同时考虑锁骨下深静脉与周围结构连接紧密，位置固定，管壁不易回缩，若穿刺不慎易进入空气，导致气栓，误入动脉后不易压迫止血，刺破胸膜易导致气胸等穿刺置管术并发症[7]。笔者充分地利用其彩色多普勒超声血流显像技术的特点，即属于实时二维成像技术与B超图象结合同时显示，根据来自流动中红细胞的超声散射频率变化来探测血管及血流情况按血流流向或离开探头方向以彩色（红或蓝）表示，彩色区即为血管区，根据颜色的不同区别锁骨下动脉、静脉，同时使用与B超探头相配套的穿刺引导架（保持穿刺针总是在超声扫查范围内，当针准确定位后，探头可撤离），在实施锁骨下静脉穿刺置管时可以在B超显示屏的直视下调整穿刺针的角度及深度，使穿刺针准确到达穿刺部位，直观性强，同时防止穿刺针穿出静脉[8]。因锁骨下深静脉都与相应的锁骨下动脉伴行，采用彩色多普勒超声技术很容易辨认锁骨下动静脉，在穿刺置管时可以避免刺破动脉造成血肿，同时可以在B超监视下观察导丝及中心静脉导管进入锁骨下静脉的深度及方向，及时调整导丝或中心静脉导管的深度及方向，防止导丝或中心静脉导管进入过深，因为导丝或中心静脉导管到达右心房时极易导致心率失常，防止导丝或中心静脉导管进入颈内静脉，对侧头臂静脉[9]。笔者采用彩色多普勒引导下实施对经验性锁骨下深静脉导管置入术失败的患者再次导管手术置入，与经验性盲穿再次导管置入手术相比，明显提高了锁骨下深静脉穿刺置管的成功率，减少手术中穿刺次数，减少手术并发症的发生，降低了医疗风险的发生，减少手术时间，减少了临床工作负荷[10-11]。

综上所述，在彩色多普勒超声引导下对经验性实施锁骨下静脉穿刺置管术失败的患者再次实施置管手术和常规经验性盲穿首次锁骨下静脉穿刺置管术失败患者再次手术相比较，明显提高了手术的成功率，减少手术中试穿的次数，减少了手术并发症的发生，减少手术时间，降低了医疗风险的发生，但采用彩色多普勒技术实施锁骨下静脉置管术，必需有超声医生的配合操作才可实施，同时对超声机器硬件有一定的要求，临床工作中很难把彩色多普勒超声作为常规引导进行锁骨下静脉穿刺置管，笔者认为对经验性锁骨下静脉穿刺置管术失败的患者再次实施置管手术时，采用彩色多普勒技术作为穿刺引导具有明显的安全性及有效性，可以作为穿刺置管失败患者的一种挽救措施在临床上推广使用。

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