细胞增殖论文范文
时间：2023-10-15 17:28:32
细胞增殖论文篇1
【关键词】 重组人表皮细胞生长因子；人表皮细胞；增殖
细胞增殖、分化、成熟的调控依赖多种活性蛋白质及多肽，统称为生长因子。目前已发现包括表皮生长因子(Epidermal Growth Factor， EGF)在内的多种生长因子。重组人表皮生长因子(recombinant human EGF，rhEGF)是通过人工合成的表皮生长因子基因片段在大肠杆菌表达系统进行有效表达而获得的可促进多类细胞生长的多肽类物质， 其活性和结构与天然产物高度一致[1]。具有广泛的促进细胞增殖和组织再生的生物学活性，对体表创伤、烧伤和溃疡等创面的治疗具有较大的临床应用价值。在制备过程中不同的提取以及纯化方法对多肽的活性影响较大，本文就应用细菌发酵法获得的rhEGF对人表皮细胞的增殖作用进行研究。
1材料及方法
1.1试剂
重组人表皮生长因子，细菌发酵法获得。DMEM、PRMI1640培养基为美国Gibeo产品，小牛血清、胎牛血清为成都哈里生物工程有限公司；MTT为美国Sigma产品。
1.2实验方法及结果
1.2.1表皮细胞取材以及培养包皮环切术后标本，PBS洗涤三次，眼科剪剔除多于皮下组织；25%trypsin冷消化过夜，分离表皮与真皮，并去除真皮，制备细胞悬液；1000 rpm×10 min离心，去上清，培养基重新混悬细胞沉淀，用血细胞计数仪计数，并用台盼兰染色，了解细胞存活率。将上述细胞悬液按一定细胞密度接种于培养皿中，置37 ℃，5%CO2孵箱中；2天～3天换液一次；当细胞长满瓶皿70～80%时，根据需要传代或冻存细胞。
1.2.2MTT 法测定细胞的增殖取对数生长期细胞1.5×105接种于96 孔培养板内，每孔100 μl，设6 个复孔。加rhEGF使浓度为 0，5，10，20，50，100 ng·ml-1及调零孔加100 μl培养液，继续培养48 h，结束前4 h，加10 μl MTT，常规终止实验，与酶联免疫检测仪上测各孔吸光值，波长490 nm。按下列公式计算相对增殖率（Relative growth rate， RGR）：RGR = 给药孔吸光度值/对照孔吸光度值×100%。
1.2.3流式细胞仪检测细胞周期以及蛋白的表达接种2×105个细胞于75ml培养瓶中，待细胞贴壁后加入不同浓度的rhEGF作用于细胞48小时，收集细胞，流式细胞仪检测细胞的增殖，根据细胞周期时相，计算细胞的增殖指数（PI）：PI=(S+G2/M) / (G0/G1+S+G2/M)×100% 。基因产物表达含量分析：上机检测前用PBS 洗离心除去固定液，冰冷PBS 洗涤细胞3 次，按免疫组化方法分别加入cmyc， cfos和cjun单抗，使用浓度1∶100，然后加入荧光素标记的二抗IgG，37 ℃作用30分钟，PBS洗涤，400目筛网过滤，流式细胞仪上机检测。Bios Consort30软件系统处理数据，计算阳性细胞标记率，结果扫描图和数据表示方式显示并打印。统计分析处理（x2检验）比较阴性对照组细胞和试验组细胞间有无显著性差异。
2 结果
2.1 细胞形态学观察
光学显微镜下，正常生长的细胞大多呈椭圆形，胞体较大，界限清楚（图1）。
图1 表皮细胞正常光镜图
2.2重组人表皮细胞生长因子对表皮细胞增殖率的影响
通过MTT 法测定细胞的增殖，rhEGF在浓度为5～100 ng·ml-1均可以促进人表皮细胞的生长，在10 ng·ml-1时促进细胞的生长作用最为明显。
图2 重组人表皮细胞生长因子对表皮细胞增殖率的影响
2.3流式细胞仪检测细胞周期以及蛋白的表达
rhEGF处理组的细胞在DNA合成前期减少，而处于DNA合成期的细胞增加，增殖率较对照组明显增高， S和G2/M期细胞数增加，G0/G1细胞数减少。表明重组人表皮细胞生长因子可以促进表皮细胞的分裂增殖。基因产物表达含量分析，rhEGF处理细胞后与细胞生长相关基因的表达出现明显的变化，cmyc的标记率和表达量明显升高， cfos和cjun表达量也明显升高，结果见图3。
图3重组人表皮细胞生长因子对细胞增殖指数及细胞生长相关基因的蛋白表达
2讨论
表皮生长因子（EGF）是广泛存在于人体多种组织的一种多肽因子，具有刺激上皮细胞增生，加快创伤愈合的作用[1]。随着分子生物学的研究进展，人们对创面愈合的调控机制认识不断深化。愈合能力差除与创面产生原因有关外，还与创面本身修复内环境的改变、内源性生长因子含量低下或受体活性下调等因素有关。生长因子在创伤修复中起着举足轻重的作用，调控着创伤的修复。EGF与其受体结合可激活直接调控或诱导细胞增殖的调节生长基因，参与体表创伤的愈合过程，并且为表皮的高速更新所必须。在创伤修复过程中，由于机体本身对创伤部位的修复机制，内源性EGF在创面明显积累，但由于组织中的EGF含量普遍较低，难以满足细胞增殖和肉芽组织发育的需要，因此，理论上外源性的EGF可加速创面的愈合速度[3]。
重组人表皮生长因子利用基因重组技术人工合成，其结构与天然产物一致，具有促进细胞增殖和组织再生的生物学活性，对体表创伤、烧伤和溃疡等创面的治疗具有较好的临床应用价值。我们研究表明，应用细菌发酵法获得的rhEGF对人表皮细胞具有增殖作用，而且在10 ng·ml-1时作用最为明显。流式细胞术的进一步研究表明rhEGF处理细胞48h后处于DNA合成期的细胞增加，细胞增殖率分别较阴性对照组增加。研究发现cmyc基因与细胞增殖有关，并且与不同的基因群协同控制细胞增殖与分化，参与细胞的调控特别是G0～G1期的过渡。cfos基因蛋白cfos可以识别和结合到基因组中特定的调控序列，从而调控细胞的增殖和分化。cjun所编码的蛋白质对细胞增殖分化中必不可少的基因表达进行调控。我们的研究表明，rhEGF处理表皮细胞后cmyc的标记率和表达量明显升高， cfos和cjun表达量也明显升高，提示rhEGF可以通过与细胞周期有关的基因促进细胞的分裂增殖。
参考文献
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细胞增殖论文篇2
【关键词】器官模型；平滑肌增殖；降钙素基因相关肽；表型转化；高血压相关基因；平滑肌22α
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.07.583文章编号：1004-7484（2013）-07-3983-02
降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）是一种由37个氨基酸组成的另一种血管活性肽。动物实验表明动脉粥样硬化兔血清中的CGRP明显降低。细胞培养证实，CGRP对人血管平滑肌细胞增殖有抑制作用，并推断其作用机制是通过抑制周期蛋白D、E。使VSMC停留于G0/G1期，限制细胞周期进程而达到抑制VSMC增殖[1-3]。然而，CGRP对VSMC表型转化的影响如何还未见报道。本实验通过建立血管平滑肌细胞增殖的器官模型，以CGRP为干预因素，研究CGRP对大鼠主动脉平滑肌细胞中HRG-1和SM22表达的影响。
1材料与方法
1.1动物150g-200g健康SPF级SD大鼠。
1.2主要试剂及仪器CGRP；噻唑蓝（MTT）；兔抗大鼠HRG-1抗体、兔抗大鼠SM22抗体；山羊抗兔二抗购于武汉博士德公司；标准胎牛血清（FBS）购于杭州四季青公司BCA蛋白定量试剂盒购于美国HyClone公司。
1.3实验方法
1.3.1大鼠主动脉血管平滑肌增殖器官模型的建立和实验分组选用体重150g-200g健康大鼠12只，腹腔注射浓度为3.6%的水合氯醛（1ml/100g），取大鼠腹主动脉，用Hanks液冲洗三遍，取出血管周围多余脂肪组织，剪成2.5cm左右小段，随机分成3组：A、B、C，每组两段血管。A组用含有CGRP（终浓度为2×10-7mol/L）和ox-LDL（终浓度50μg/ml）的培养液培养，B组用含有ox-LDL（终浓度50μg/ml）的培养液培养；C组用新取出大鼠主动脉，不予培养。以上步骤所制备材料供H-E染色和抗5-Brdu免疫细胞化学染色所用。
1.3.2细胞增殖情况的测定H-E染色和Brdu标记的免疫组织化学观察细胞增殖情况。每一批免疫组化均设已知阳性对照和用PBS代替一抗的空白对照。5-Brdu阳性表达定位于细胞核。评分标准：全部阴性细胞为0分；阳性细胞数≤10%为1分；11%-50%为2分；51%-75%为3分；>75%为4分。染色强度：0分为无染色；1分为淡黄色；2分为棕黄色；3分为深棕色。免疫组化结果根据染色阳性细胞数和染色强度分别评分，两者乘积0-1分为阴性（-）；2-3分为阳性（+）；4分以上为强阳性（++）。
1.3.3Real Time RT-PCR检测目的基因取材方法及培养方法同上。称重（约50mg）后将其剪成小块，放入预冷的研钵内快速研磨、匀浆，直至匀浆液变成无颗粒透明液体。进行总RNA提取、纯度和完整性检测。参照说明书进行逆转录反应，反应结束后，实验数据用系统自带的SDS软件（v1.4）进行分析。相对定量实验使用的分析方法为比较Ct值法。Ct值表示阈值循环，是荧光信号强度超过设置的阈值强度时所经历的循环数。根据公式：Ct=[目的基因-内参基因]实验组样品-[参照样品基因-内参基因]对照组样品，本文实验采用Ct最大的样品组为参照组。计算实验组样品相对于对照组基因的表达量2-Ct。
1.4统计学处理实验数据均以均数±标准差（χ±s）表示。实验数据资料统计采用统计学软件SPSS for Windows 13.0。两组间比较用独立样本t检验。P
2结果
2.1HE染色和免疫组化观察血管壁平滑肌细胞的增殖情况正常对照的未予培养组（C组）管壁未见增厚，其余各组均见管壁增厚，其中加了CGRP的A组较未加CGRP的B组增厚程度明显减弱且标记到增殖细胞减少。免疫组化检测VSMC增殖显示A组呈阴性（-），而B组呈强阳性（++）。
2.2Real time RT-PCR检测HRG-1、SM22a的表达情况首先分别求出每个样品中3个重复孔目的基因，HRG-1、SM22α和内参基因18S rRNA的平均Ct值后，应用内参基因18S rRNA对各实验组样品进行校正（Ct），再取其对数，对于HRG-1、SM22α表达的差异，分别在A组和B组之间进行比较，见表1、表2。比较HRG-1、SM22α在样本中的表达差异然后对各组的样品的Ct进行归一化处理（Ct），最后根据Ct算出各组样品与对照组样品间HRG-1，见表3。SM22的表达差异，见表4。
3讨论
本文通过Brdu标记和对HRG-1检测再次证实CGRP对血管平滑肌有抑制作用，CGRP对血管平滑肌细胞增殖抑制作用的机制之一可能是通过上调HRG-1来实现。HRG-1是一个平滑肌增殖通路中的负性调控基因，对这一基因的深入研究对控制血管平滑肌增殖有重要意义。本文实验用CGRP作用血管平滑肌增殖器官模型，通过Brdu标记细胞增殖和检测HRG-1的表达，发现CGRP对增殖模型中VSMC增生有明显的抑制作用，明显上调HRG-1基因的表达，两条途径验证的结果是一致的。
VSMC发育与分化是一个极其复杂的多基因调控过程。研究证实[4]，心血管疾病所伴随出现的VSMC增殖、迁移及表型转化等一些细胞事件与VSMC分化过程有许多相似之处，因此，探讨VSMC发育分化的调控机制将有助于揭示此类心血管疾病的病理本质。平滑肌细胞具有收缩型和合成型两种表型，不同表型的细胞具有不同的生物学特性和功能，收缩型VSMC呈分化状态，有较强的弹性，可以维持血管的生理功能，不能增殖；合成型VSMC呈去分化状态，核糖体和高尔基体等细胞器增多，合成和分泌功能增强，同时收缩功能消失，对外界各种有丝分裂原起反应而活跃增生[5]。增殖的合成型细胞可以从血管的中膜迁移至内膜并分泌大量的细胞外基质，并成为引起AS和血管再狭窄等血管性疾病的主要原因。既然引起VSMC发生增殖的主要原因是VSMC发生了由一系列生长因子和细胞因子引起的表型转变，使VSMC由收缩型转变为合成型，因此如何防治和逆转VSMC向合成型转变就成为近年来研究的热点和难点。SM22α经常作为一种分子模型被广泛用于VSMC基因表达调控的研究。CGRP抑制平滑肌细胞增殖有报道，而CGRP对平滑肌细胞表型转化的影响还未见文献报道，本文观察了CGRP对大鼠血管平滑肌细胞SM22α基因表达的影响，实验结果表明：CGRP可明显上调VSMC中SM22α的表达，这与平滑肌表型转化是平滑肌增殖的初始步骤理论相吻合。关于CGRP对血管平滑肌细胞表型转化的作用机理还有待进一步研究。
参考文献
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细胞增殖论文篇3
【关键词】 姜黄素;细胞周期;Tca8113细胞株
姜黄素（Curcumin）是从中药姜黄中提取的酚性色素，具有多方面的药理作用［1］ ，如抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂、抗动脉粥样硬化及抗肿瘤等。我们应用Tca8113细胞为靶点，探讨姜黄素对其增殖的细胞周期各时相的改变，旨在为舌癌治疗提供理论依据，兹将结果报告如下:
1 材料和方法
1.1 材料 Tca8113细胞株，由北京医科大学口腔医院蕙赠;姜黄素购于上海化学试剂采购站（分析纯）;RPMI1640培养基、MTT（塞唑蓝）购于美国Sigma公司;胎牛血清购于长春生物制品研究所。
1.2 方法
1.2.1 MTT比色法 取对数生长期的Tca8113细胞。经0.25%胰蛋白酶消化，收集细胞，调细胞数为2×10 8 .L。接种于96孔塑料培养板内，每孔100μl.孔。分别加入10、20、40g.L姜黄素，每个浓度6复孔，同时设空白对照组，共4组。培养24h，于培养结束前6h加入MTT试剂20μl.孔，终浓度为0.5g.L。继续培养6h后加入酸化异丙醇50μl.孔。振荡5min，使MTT还原产物完全溶解，用酶标仪在550波长处测定各孔吸光度A值，计算肿瘤细胞抑制率。
肿瘤细胞抑制率=（1-加药孔细胞A值÷对照孔细胞A值）×100%
1.2.2 应用流式细胞仪检测 Tca8113细胞周期各时相变化及凋亡率，细胞培养及分组同1.2.1，培养结束后，胰蛋白酶消化。收集细胞，PBS洗2次，离心弃上清，用70%冷乙醇固定，上机前过4S目网，调细胞数为1×10 9 .L，测定细胞周期各时相变化。
1.2.3 透射电镜观察 Tca8113细胞亚结构改变，收集经姜黄素作用的Tca8113细胞。离心弃上清，用2.5%戊二醛固定，1%锇酸后固定。环氧树脂包埋。超薄切片，醋酸铅-铀双重染色，透射电镜观察并拍照。
1.2.4 统计学分析 组间比较用t检验，数据以均数标准差（ˉx±s）表示。
2 结果
2.1 不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率的 影响 见表1。
表1 不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率的影响（略）
表1结果表明，不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率随着药物浓度的增加而升高，与对照组相比差异非常显著。
2.2 不同沈度姜黄素对Tca8113细胞周期及凋亡率的影响 见表2。
表2结果表明，随着姜黄素浓度增加，作用时间间延长，效果越明显，其凋亡率亦上升，20g.L组姜黄素对Tca8113细胞凋亡率可达11.5%。
表2 不同浓度姜黄素对Tca8113细胞周期及凋亡率的影响（略）
3 讨论
近年来，细胞周期的研究取得令人注目的成绩，特别是细胞周期中不同时相的改变为肿瘤预防和治疗提供了重要的理论依据。
我们应用MTT比色法测定姜黄素对Tca8113细胞的增殖抑制率，结果表明。姜黄素可明显抑制Tca8113细胞增殖，与对照组相比差异非常显著，且具有时间剂量依赖性。MTT试剂可被哺乳动物活细胞中线粒体脱氢酶还原成蓝色甲 颗粒，且甲 生成的量与活细胞数量及细胞活化状态呈线性关系［2］ 。因此被广泛用于抗肿瘤药物的筛选。
流式细胞仪结果显示，不同浓度的姜黄素对Tca8113细胞增殖周期均有明显影响，组间比较差异均显著，结果显示G 1 期细胞增多，S期细胞减少，G 2 .M期细胞相对增多，G 1 期细胞又称细胞复制前期，是指细胞从有丝分裂到DNA复制之前，G 1 期是制造产生rRNA、mRNA、tRNA及核蛋白体，所以说G 1 期是细胞复制周期运行的关键，同时G 1 期也是药物等因素作用的敏感点［3］ 。因而抑制细胞周期的G 1 期的RNA及核蛋白体的合成，可间接的使肿 瘤细胞的RNA合成减少，延缓肿瘤细胞的增殖。G 2 .M期细胞增多是细胞损伤的普遍反应，多种细胞损伤剂不仅可引起G 1 期细胞停滞，亦可引起G 2 .M期细胞阻滞［4］ 。我们的结果显示，姜黄素对Tca8113细胞G 1 期阻滞，G 1 期细胞堆积，不能进入S期，阻滞G 1 期细胞向S期的进程，从而使G 2 .M期细胞相对增多，细胞凋亡率升高。
电子显微镜观察所见，细胞肿胀、细胞核变小，细胞质高度空化。总之，根据我们的实验结果，证明姜黄素对Tca8113细胞增殖有明显的抑制作用，为舌癌治疗提供了理论依据。
参考文献
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细胞增殖论文篇4
【关键词】 葡萄原花青素
葡多酚，又称葡萄原花青素(grape procyanidins,GPC)，是从葡萄籽中提取的天然多酚类物质。据国内外报道，GPC不仅具有清除自由基、抗氧化等生物学功效，还能促进多种细胞的增殖活性〔1-3〕。本实验采用体外细胞培养，研究不同剂量GPC对小鼠肝细胞PKC蛋白表达的调控作用，探讨其与细胞增殖活性的关系。
1 材料与方法
1?1 材料
1?1?1 GPC样品 使用溶剂浸提法从葡萄籽中制取，含量>95%；标准品(日本岛田株式会社)。
1?1?2 试验动物 山东省实验动物中心提供的昆明小鼠，体重18～20g。
1?1?3 主要试剂与仪器 一抗小鼠PKC单克隆抗体(简称一抗)(武汉博士德公司)；二抗山羊抗小鼠IgG抗体HRP(简称二抗)(北京中杉金桥公司)；二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(武汉博士德公司)；PKC一抗工作浓度为1：50；RPMI1640培养基(美国GIBCO公司)；新生牛血清(奥地利PAA公司)；显微镜与照相机(日本OLIMPUS公司)；酶标仪(美国BECKMAN公司)。
1?2 实验方法
1?2?1 肝细胞悬液的制备 将新鲜小鼠肝组织剪碎，过100目不锈钢网，3层无菌沙布过滤，1000r/min离心10min，弃上清，加磷酸盐缓冲液(PBS)1000r/min离心10min，制成细胞浓度为1×106、细胞活力>95%的肝细胞悬液备用。
1?2?2 PKC蛋白的表达 将上述细胞悬液培养于含有10%新生牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中，将盖玻片置于6孔板培养皿中，加入终浓度10，50，100mg/L的GPC，空白对照加入RPMI1640，置37℃、5% CO2培养箱培养24h，取出盖玻片，肝细胞经4%多聚甲醛固定10min。用免疫细胞化学法按检测试剂盒说明检测肝细胞中PKC蛋白的表达〔4〕：10%H2O2灭活内原性过氧化物酶，5%小牛血清蛋白(BSA)封闭液室温20min，加入一抗，二抗(DAB)显色，苏木素-伊红(HE)染色，脱水，透明和封片。高倍(×400)显微镜下观察PKC蛋白的表达水平。选择细胞清晰的视野视察，在每个组观察2500个肝细胞记录其中的阳性细胞数。根据公式：PKC蛋白阳性表达率=PKC阳性细胞数/计数细胞总数×100%计算阳性表达率。
1?2?3 MTT法测定各组小鼠肝细胞的增殖活性 将肝细胞悬液接种于96孔培养板，每孔0?1ml，加入终浓度10，50，100mg/L GPC，置37mg/L GPC，置37℃、5%CO2培养箱培养24h，用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法在波长492nm测定细胞增殖活性，用吸光度(A)值表示。根据公式计算GPC对小鼠肝细胞增殖的促进率：促进率(%)=(GPC组-正常对照组)/正常对照组×100%。
1?2?4 统计分析 采用SPSS11?0统计软件进行t检验和χ2检验。
2 结果
2?1 PKC蛋白的表达结果 PKC蛋白在细胞内为胞浆表达，光镜下呈现棕黄色颗粒。 本实验结果可见，100mg/L GPC组细胞浆内棕黄色颗粒的细胞多、颜色深，为PKC蛋白强表达(图1)，正常对照组胞浆内表达的细胞数少、染色浅，为弱表达(图2)。2组的阳性表达率分别为34?24%和12?72%经χ2检验，差异有统计学意义(P<0?05)。10，50mg/L GPC组PKC表达与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0?05)，见表1。
2?2 增殖活性检测结果 100mg/L GPC组的增殖活性分别为(0?654±0?062)，正常对照组的增殖活性为(0?405±0?126)，经t检验，两者差异有统计学意义(P<0?05)。10，50mg/L GPC组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0?05)，见表2。
图1 高剂量GPC组PKC强表达(DAB×200)（略）
图2 低剂量GPC组PKC弱表达(DAB×2000)（略）
表1 各组PKC蛋白的表达（略）
注：与正常对照组比较，*P<0.05
表2 各组小鼠肝细胞增殖活性（略）
注：与正常对照组比较，*P<0?05
3 讨论
本研究显示，100mg/L GPC组PKC蛋白表达水平较正常对照组显著升高，且呈现随GPC剂量的升高，PKC阳性表达率逐渐升高的明显剂量-反应关系，表明GPC可激活PKC，使PKC蛋白表达水平上升，增强细胞内信息传递与细胞活化的影响，促进细胞的增殖分裂。本研究结果表明，GPC对肝细胞的增殖活性有促进作用，与文献报道GPC可促进细胞增殖活性的结果相一致〔5〕，也同本实验的PKC结果相吻合。综上所述，GPC可提高肝细胞PKC表达水平，对肝细胞增殖活性有促进作用。同时提示，GPC对肝细胞增殖活性的促进作用可能是通过对PKC调控而实现的。
【参考文献】
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细胞增殖论文篇5
方法：WST1法观察威灵仙皂苷对MR2细胞的增殖抑制作用；用流式细胞仪观察MR2细胞的凋亡率。
结果：威灵仙皂苷可明显抑制MR2细胞的增殖，诱导MR2细胞凋亡，且呈时间浓度依赖性。
结论：威灵仙皂苷能够明显抑制早幼粒细胞白血病耐药细胞株MR2增殖和诱导MR2细胞凋亡，呈时间浓度依赖性；高浓度威灵仙皂苷对MR2细胞的效果与亚砷酸无统计学差异。
关键词：威灵仙皂苷 MR2细胞 细胞凋亡
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）06-0009-02
随着全反式维甲酸和砷剂的广泛使用，急性早幼粒细胞白血病（APL）的预后已经得到明显改善。但是对全反式维甲酸耐药以及砷剂长期使用后的毒副作用仍然不利于患者的长期生存，因此仍然需要安全、有效、经济的方法，治疗全反式维甲酸耐药APL患者。威灵仙是一味价廉物美的中药，主要用于治疗风湿性骨痛，腰背痛。研究发现其发挥作用的主要成分是皂苷，且已有报道其有明显的抗恶性肿瘤的效果[1]。本研究选择APL耐药细胞株MR2为研究对象，初步探讨威灵仙皂苷对APL耐药细胞的凋亡作用。
1 材料与方法
1.1 细胞株：耐全反式维甲酸急性早幼粒细胞白血病细胞株（MR2细胞）引自四川大学华西医学院。
1.2 实验试剂：威灵仙皂苷（在泸州医学院药研所）自行提取[1]；二甲基亚砜DMSO购于Sigma公司；WST1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒购于江苏碧云天生物技术研究所；Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司；亚砷酸购于黑龙江哈尔滨医大药业有限公司（10mg/支）。
1.3 细胞培养：将MR2细胞接种于RPMI1640培养液中，置于50ml/L CO2、饱和湿度、37℃恒温孵箱中悬浮培养，每2-3d换液传代。
1.4 WST-1法检测威灵仙皂苷对MR2细胞的增殖抑制作用：选择对数期生长期MR2细胞，将细胞调整为浓度为1×104个/ml并接种于96孔酶标板，每孔加细胞悬液100ul，共设8个实验组（每组5个平行孔，实验重复三次），以终浓度0.01%DMSO为空白对照组，终浓度1.0umol/l亚砷酸为阳性对照组，终浓度200ug/ml、400ug/ml、600ug/ml、800ug/ml、1000ug/ml、1200ug/ml威灵仙皂苷为实验组。分别培养24h、48h、72h后。每孔加入10ul WST-1溶液，继续在细胞培养箱孵育2h后。在450nm测定，按以下公式计算抑制率。
细胞增殖抑制率（%）=（1-A实验组A对照组）×100%
1.5 流式细胞仪检测凋亡率：调整细胞浓度为1×106个/ml接种于六孔板，设五个实验组（每组设三个平行对照，实验重复三次），以终浓度0.01%DMSO为空白对照组，终浓度1umol/ml亚砷酸为阳性对照组，终浓度800ug/ml、1000ug/ml、1200ug/ml威灵仙皂苷为实验组。分别培养72h。用流式细胞仪检测细胞凋亡。
1.6 统计学分析：实验数据计算均值、标准差，各组应用方差分析，以a=0.05为检验水准，P
2 结果
2.1 威灵仙皂苷对MR2细胞有明显的生长抑制作用：不同浓度的威灵仙皂苷对MR2细胞均有明显的生长抑制作用，且呈时间和浓度依赖性。统计学分析表明，亚砷酸阳性对照组与皂苷实验组总的差异有统计学意义（见表1）。
2.2 流式细胞仪。Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡：分别用亚砷酸组与皂苷800ug/ml、1000ug/ml、1200ug/ml组作用MR2细胞72小时后应用流式细胞仪检测凋亡率为（见表2）：统计学分析：亚砷酸组与皂苷1200ug/ml组之间差异无统计学意义；亚砷酸组和皂苷1200ug/ml组与皂苷800ug/ml、1000ug/ml组间差异有统计学意义；皂苷800ug/ml组与皂苷1000ug/ml组间差异有统计学意义。
3 讨论
威灵仙是一味价廉物美的中药，近年来大量研究证明，其主要成分皂苷具有良好的抗肿瘤作用[1]。如人参皂苷抗肿瘤机制主要通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用[2]；九节龙皂苷通过抑制肿瘤细胞生长来抗小鼠肝癌和黑色素瘤[3]。提示皂苷有很好的研究和开发前景。但其抗白血病的作用和机制还未见报道。MR2细胞株来源于APL细胞株NB4细胞对ATRA耐药的细胞克隆，可表达PML-RARa融合蛋白，其重组蛋白配体结合功能区活性下降或丧失[4]。该细胞株可用于筛选新分化诱导剂和APL耐药机制的研究。在实验中我们通过WST-1证明威灵仙皂苷可明显抑制MR2细胞的生长增殖，用流式细胞仪定量、定性的证明威灵仙皂苷能够诱导MR2细胞凋亡。且WST-1和流式细胞仪的数据表明高浓度的威灵仙皂苷的增殖抑制率和凋亡率与亚砷酸组的差异无统计学意义，这意味着高浓度的威灵仙皂苷对MR2细胞的增殖抑制作用、凋亡作用与亚砷酸是一致的。总之，我们的研究显示威灵仙皂苷对MR2细胞有明显的诱导凋亡作用，但具体的作用机制有待进一步研究明确。
本实验证实，威灵仙皂苷具有抑制急性早幼粒细胞白血病MR2细胞株增殖及诱导其凋亡的作用，为临床威灵仙皂苷用于抗肿瘤治疗提供一定的理论依据。
参考文献
[1] 徐先祥，夏伦祝.大孔吸附树脂分离纯化威灵仙总皂苷的工艺研究.中药新药与临床药理，2006，17（1）：57-59
[2] 赵越，苏适.人参皂苷Rh2抗肿瘤作用的研究[J].微生物学杂志，2003，23（2）：61-63
细胞增殖论文篇6
【关键词】 硫酸氨基葡萄糖；大鼠；软骨细胞；增殖
Abstract Objective: The purpose of the present paper was to investigate the effect of glucosamin sulphat(GS) on the proliferation of rat chondrocyte in vitro. Methods: The rat articular chondrocytes were isolated by enzyme digestion and sub-cultivated in serial. The 4th chondrocyte was interfered with GS. The chondrocytes of different generations and the 4th medicine intefered generation were detected with such methodsas PCNA (proliferating cell nuclear antigen) ， MTT(methyl thiazolyl tetrazolium) assay for proliferation and Flow cytometry for analyses of cell cycle distribution and PI(proliferation index). Results: With rat chondrocytes sub-cultivated， MTT assay showed that the proliferating ability of chondrocytes decreased， the express of PCNA tapered in the experiment of immunohistochemistry， as well as PI descended in flow cytometry for analyses. GS can inhibit the tendency and strengthened the proliferating ability of chondrocytes in serial subcultivation. Conclusion: GS can significantly improve proliferation of chondrocytes in serial subcultivation.
Key words Glucosamin sulphat(GS); Rat; Chondrocyte; Proliferation
关节软骨缺损是临床上的常见损伤，它可导致关节面不平整，从而继发骨性关节炎。用组织工程软骨修复关节软骨缺损是目前正在尝试的一种新方法，具有良好的发展潜力。关节软骨细胞是组织工程理想的种子细胞，但如何分离获取数量多、活性高、分化良好的软骨细胞是组织工程培养技术中的重要问题之一。近年来对生长因子在关节软骨形成和退变过程中的作用日益受到重视，并开展了广泛的研究，认为种子细胞需要适应生长因子的调控才能获得良好的生物活性。硫酸氨基葡萄糖是关节软骨生物合成和刺激合成聚氨基葡萄糖及透明质酸骨架的基本物质，被认为是第一个改变骨关节炎病情的药物。本研究采用体外培养大鼠软骨细胞的方法，观察硫酸氨基葡萄糖对其增殖的影响，为优化组织工程的种子细胞提供一定的理论和实验依据。
1 材料
1.1 实验动物
清洁级SD（Sprague-Dawley）大鼠：福建医科大学实验动物中心提供（闽验证字20050001，合格证号2005C03，清洁级），3～4周龄，体重180～200g，皆为雄性，共8只。
1.2 主要试剂
αMEM培养基(Gibco公司)、胎牛血清（FBS，HyClone公司）；胰蛋白酶1∶250(Amersco公司)、Ⅱ型胶原酶(Sigma公司)、PBS(Gibco公司)；噻唑蓝（MTT，上海申能博采公司），二甲基亚砜(Amersco公司)；增殖细胞核抗原 (PCNA，美国NeoMarkers公司)；硫酸氨基葡萄糖(浙江海正药业)。
2 方法
2.1 大鼠软骨细胞的获取、鉴定与药物干预分组情况
取4周龄体重185～200g的SD大鼠，断颈处死，参考Hu等［1］软骨细胞分离培养方法进行实验，获取软骨细胞置于5%CO2混和气体环境中，37℃恒温箱内单层培养，隔3日首次换液，8～10 天达85%融合后进行传代培养。以传代次数（passage，P）分组，P0即原代细胞，P1即第1次传代后细胞，P2即第2次传代培养细胞，余类推。软骨细胞鉴定采用阿力新蓝染色法检测GAG合成、免疫组化法及RT－PCR法检测Ⅱ型胶原表达［2］。实验分组为P2组、P3组、P4组及硫酸氨基葡萄糖不同剂量组（低、中、高不同药物浓度干预后的P4软骨细胞组），硫酸氨基葡萄糖干预组分组的方法采用传代分组法：倒置相差显微镜下进行观察，当P3代软骨细胞融合达到85%时进行传代（1传3），以胰酶消化贴壁细胞，反复吹打，使细胞均匀悬浮，离心（1 500rpm，5 min），洗涤2次；对αMEM（含5%FBS）进行加药，配制含不同浓度的GS培养基，分别加药使各瓶培养基药物终浓度为GS 5mg/mL、GS 10mg/mL、GS 15mg/mL；分别以上述不同含药浓度培养基吹打混匀各瓶P3细胞，进行传代，使药物干预组软骨细胞进入P4代。按实验要求调整细胞浓度，分别接种软骨细胞于底面积25cm2培养瓶（细胞浓度5×105/mL）、6孔培养板（置入盖玻片，细胞浓度5×105/mL）、96孔培养板（细胞浓度4×105/mL）， 于37℃、5%CO2饱和湿度孵育箱中孵育，其中硫酸氨基葡萄糖分组参考剂量来源于Largo R等［3］、Mattei M等［4］及Dodge GR等［5］实验研究。
2.2 各代软骨细胞MTT比色试验
将不同代次大鼠软骨细胞以5×104/mL浓度接种于96孔培养板中，常规培养24h后用含体积分数为5%FBS的αMEM培养，分别加入硫酸氨基葡萄糖，使硫酸氨基葡萄糖终浓度为5、10、15mg/mL，加药后分别继续培养48h，加入MTT溶液显色。选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各个孔光吸收值。
2.3 各代软骨细胞周期分析及增殖指数检测
将培养的待测各代软骨细胞分别置5mL试管中，用PBS或生理盐水洗2次，制成单细胞悬液，无水乙醇固定细胞，加入PBS调整细胞浓度为5×105～5×106个细胞，加入1mL DNA荧光染料（PI），室温下避光染色15 min，以流式细胞仪(Becton Dickinson FACScan，美国)分析各代软骨细胞周期及检测增殖指数。
2.4 各代软骨细胞免疫细胞化法检测各组软骨细胞PCNA表达
将不同代次软骨细胞接种于6孔板，孔内均预置一块盖玻片，常规培养48h后取出盖玻片，用免疫组织化学二步法检测PCNA表达情况。结果分析：采用HPIAS21000高清晰度图像处理系统进行图像分析，测定PCNA阳性信号的面积密度( Sv =PCNA阳性信号面积和/窗口面积×窗口数)。
2.5 统计学方法
以上检测均随机取多个样本，每个样本多次重复。应用SPSS11．0统计软件进行分析。进行Oneway ANOVA检验和Pearson相关分析，定量资料实验结果以均数±标准差表示，P
3 结果
3.1 各组软骨细胞MTT比色结果
MTT比色分析显示，随着软骨细胞传代培养，从P2代细胞至P4代软骨细胞在传代培养过程中细胞能量代谢呈下降趋势，逐代相比OD值差异有统计学意义（P
3.2 各组软骨细胞细胞增殖指数结果
流式细胞术实验结果显示：随着软骨细胞传代培养，从P2代细胞至P4代细胞，细胞增殖指数呈下降趋势，分别为20.9%、16.8%、12.6%;GS干预后的P4各组细胞增殖指数高于P4细胞，分别为18.7%、19.4%、15.5%，其中GS 10mg/mL组促进软骨细胞增殖的作用最高。
3.3 各组软骨细胞PCNA检测结果
免疫细胞化学法检测各组软骨细胞PCNA表达显示：随着软骨细胞传代培养，从P2代细胞至P4代软骨细胞在传代培养过程中的阳性表达呈下降趋势，逐代相比其阳性表达有显著差异（P
4 讨论
维骨力（Viartil-s）是意大利罗达公司研发的用于治疗骨性关节炎的对因治疗的药物，该药既能抗炎止痛，又能延缓骨关节炎发展的作用，被认为是第一个改变骨关节炎病情的药物，又因体外实验证实其对软骨代谢有良好作用，也称之为软骨保护剂。其主要成份为硫酸氨基葡萄糖（glucosamine sulfate，GS），是关节软骨生物合成和刺激合成聚氨基葡萄糖及透明质酸骨架的基本物质［3］。而聚氨基葡萄糖和透明质酸是形成关节中蛋白聚糖所必需。GS的主要成分为“D－葡糖胺”，它是一种小分子化合物，容易透过生物膜，且与关节中的软骨有很强的亲和力，并与关节中的蛋白多糖分子结合。研究表明它能刺激软骨细胞产生具有正常多聚体结构的蛋白多糖，GS制剂可抑制胶原酶及磷脂酶A2活性，阻断超氧化物自由基产生及抑制蛋白水解酶活性，是阻止破坏软骨、肌腱、韧带的主要因素，补充软骨基质的丢失成分，抑制炎症过程，缓解疼痛，改善关节功能［6-8］。
实验所见软骨细胞在体外传代培养过程中细胞增殖能力呈下降趋势，本实验从MTT比色分析细胞能量代谢，流式细胞术考察其增殖期细胞含量，免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原表达等方面看到从P2代细胞至P4代细胞，软骨细胞增殖能力明显下降，如何以生长因子刺激促进软骨细胞的增殖能力对于将软骨细胞作为种子细胞用于软骨组织工程具有积极意义。
生长因子对靶细胞的调控与其剂量密切相关，因此，确定能产生最佳调控软骨细胞增殖的硫酸氨基葡萄糖剂量至关重要。本文在预实验的基础上用MTT比色试验所筛选的不同剂量的硫酸氨基葡萄糖能不同程度地促进软骨细胞的能量代谢。说明硫酸氨基葡萄糖能促进软骨细胞增殖，而且以GS 10mg/mL浓度为最佳。PCNA是一种仅在增殖细胞中合成或表达的核内多肽，其表达和合成与细胞周期有关。主要表达增殖细胞的S期、G1期、G2初期，因此成为检测细胞增殖活性最为有效的标志之一。本实验免疫组化结果证实，硫酸氨基葡萄糖以10mg/mL浓度时软骨细胞表达致密的棕褐色颗粒最多，其他组则较少，说明硫酸氨基葡萄糖可通过促进PCNA表达来调控DNA复制。细胞周期与细胞中DNA含量密切相关，DNA含量随着细胞周期各期而发生变化。当细胞受到某些因素刺激时，可使DNA含量发生变化，从而引起细胞周期发生改变。细胞增殖指数是S期与G2期DNA含量之和与S期、G2及G1期DNA含量的之和的比，它是反映细胞增殖的重要指标之一。本实验FCM结果显示，硫酸氨基葡萄糖能显著提高软骨细胞增殖指数，且以10mg/mL浓度时最明显。
综上所述，硫酸氨基葡萄糖不仅具有显著的生物活性，可以促进软骨细胞的增殖，而且还能阻止软骨细胞在连续体外培养过程中的增殖衰老趋势。本实验可以为优化组织工程中的种子细胞提供一定理论和实验依据，有关硫酸氨基葡萄糖抗软骨细胞传代老化的实验有待进一步探讨。
参考文献
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［3］Largo R，Alvarez-Soria MA，Diez-Ortego I，et al.Glucosamine inhibits IL-1beta-induced NFkappaB activation in human osteoarthritic chondrocytes［J］.Osteoarthritis Cartilage，2003，11(4):290-298.
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［5］Dodge GR， Jimenez SA.Glucosamine sulfate modulates the levels of Aggrecan and matrix metalloproteinase-3 synthesized by cultured human osteoarthritis articular chondrocytes［J］.Osteoarthritis Cartilage，2003，11(6):424-432.
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细胞增殖论文篇7
【关键词】Ki-67蛋白；星形细胞瘤；生物学行为；相关关系
【中图分类号】R730.264 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）11—0050—01
星形细胞瘤（astrocytomas）占所有原发性脑肿瘤的大部分，是最常见的颅内肿瘤。可发生于脑组织的任何部位，但大部分位于幕上和大脑半球，任何年龄均可发生，多见于成年人。大体观察，肿瘤横断面质地柔软，色灰红[1]。显微镜下观察，按照肿瘤分化程度不同将之分为4级，最常见者为弥漫纤维型星形细胞瘤，而原浆型星形细胞瘤少见[2]。采用免疫组化方法检测12例正常脑组织和48例脑星形细胞瘤组织中Ki-67蛋白的表达情况，现报告如下。
1临床资料及方法
1.1一般资料 收集我院2012年7月到2013年7月48例手术切除且保存完好的脑星形细胞瘤组织的石蜡标本。患者术前均未行放疗、化疗。其中，男32例，女16例，年龄15～72岁，平均年龄42.8岁。其中，星形细胞瘤Ⅰ级12例， Ⅱ级13例， Ⅲ级17例， Ⅳ级6例，通过内减压手术获得正常脑组织标本12例作为对照标本。
1.2方法 Ki-67以细胞核有棕黄色着色为阳性，采用Ki-67指数（Ki-67 labeling index，Ki-67LI）表示细胞的增殖程度，即随机选取5个高倍镜视野，在高倍镜（×400）下每个视野数200个瘤细胞，计算其阳性细胞总数，以百分数表示Ki-67 LI，坏死区、血管内皮细胞不被计算在内。
1.3统计学处理 采用数理统计软件SPSS 16.0统计软件包进行检验及相关分析，P
2结果
Ki-67表达水平随脑星形细胞瘤病理分级的增高而增高。脑星形细胞瘤组织中Ki-67蛋白的表达呈负相关。
3 讨论
星形细胞瘤为恶性肿瘤，偶尔用“良性星形细胞瘤”描述低度增生的肿瘤[3]。肿瘤的发生部位有两种：①发生于脑干的星形细胞瘤预后差，是因为这一区域关键结构受侵所致；②发生于功能部位的星形细胞瘤，比如语言和运动中枢，常得不到有效的治疗。高度恶性肿瘤可发生于任何年龄，但其恶性度随年龄增大明显增加[4]。影响星形细胞瘤临床表现的主要生物学因素如前述，即增生性、浸润性和对治疗的耐受性[5]。原发性脑肿瘤有弥散浸润的特点，呈膨胀性或由膨胀中心和周围的浸润带组成[6]。肿瘤的浸润边缘边界不清，如星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤，使其局部病灶治疗问题重重。肿瘤的生长可将脑组织推向一边，其表面仅有一薄层肿瘤细胞，这为外科切除提供了一个清楚的分界[7]。
Ki-67是与增殖细胞相关的核抗原，可能是为DNA复制提供场所的核 基质及染色体骨架的一种组成成分，具有非组蛋白的特点，其功能被认为与染色质和细胞有丝分裂密切相关同[8]。Ki-67可能是染色质内部及周围的非组蛋白基质，可看作染色体骨架，还有学者认为，Ki-67可能是有结合特性的重要结构蛋白，在有丝分裂中起着维持DNA规则结构的重要作用[9]。Ki-67抗原量随着细胞周期不同而改变，无论在正常细胞株或肿瘤细胞株中，其抗原性的表达都随细胞周期进展而增加[10]。其在细胞分裂后期开始出现表达，S期的后半期增加明显，其在细胞分裂后迅速降解或丢失抗原决定簇，半衰期为1h或更短，两者的比例细胞增殖率代表了分裂象细胞比例。本组资料显示，K-i67表达与星形细胞瘤的增殖和预后有关，促进脑星形细胞瘤血管生成和肿瘤细胞增殖，在肿瘤的增殖、侵袭过程中起着非常重要的作用。
参考文献：
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细胞增殖论文篇8
【摘要】目的 观察姜黄素对宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用。方法 MTT法检测姜黄素和放射线对Hela细胞的抑制作用，绘制细胞抑制率曲线，研究姜黄素与放射联合应用时的作用特点；流式细胞法检测细胞周期和凋亡。结果 姜黄素对Hela细胞增殖具有明显的抑制作用，并呈时间和浓度依赖性；单纯照射对宫颈癌增殖有平台效应， 联用姜黄素则可进一步增强对宫颈癌的杀伤效应；单独照射和姜黄素均能使细胞周期阻滞于放射敏感时相G2/M期，诱导细胞凋亡，联合作用效果更加显著。结论 姜黄素可通过阻滞细胞周期于G2/M期对宫颈癌Hela细胞产生放疗增敏作用。
放射治疗是宫颈癌的重要治疗手段，对宫颈癌的照射不可避免的会对宫颈周围膀胱、直肠等器官造成辐射损伤 [1]。故而，采用同步放化疗综合治疗模式，即通过同步应用小剂量化疗药物在不增加甚至降低射线剂量的基础上达到增强放射线对肿瘤细胞的杀伤作用已被广泛应用于临床多种肿瘤的治疗[2]。
姜黄素具有多种药理活性。有研究表明姜黄素对胰腺癌[3]、肾癌[4]、前列腺癌[5]具有放疗增敏作用，但对宫颈癌放疗作用报道较少，本文通对此进行了研究。
1 材料与方法
1.1 材料
人宫颈癌Hela细胞株（湖北医药学院临床研究所）；姜黄素（HPLC>98%，成都思科华生物技术有限公司）；Clinac 600C/D加速器（ 美国Varian 公司）；流式细胞仪（美国Beckman Coluter公司）。
1.2 方法
1.2.1细胞培养 宫颈癌Hela细胞培养于含10%新生牛血清的1640中，并置于含5%C02的37℃孵箱中常规培养，每2-3d传代1次，取对数生长期细胞用于实验。
1.2.2照射方法 在室温下采用6MV-X线照射，照射野10×10cm，剂量率40 cGy/min，源皮距为100cm，分别一次性给予各实验组6、8、10、12、14、16Gy剂量。
1.2.3放射线对Hela细胞增殖的影响 取对数生长期Hela细胞，经0.25%胰蛋白酶消化后制成单细胞悬液，参照文献按辐射剂量分为6、8、10、12、14、16Gy共6组，每组设5个复孔，给予一次性射线照射12、24、48h后，每孔加入20μL MTT（5g/L），继续孵育4h，弃各孔液体，每孔加入150μL二甲基砜，低速震荡10min，酶标仪检测各孔在562nm波长处吸光度值，计算抑制率，求出辐射剂量坪值，即细胞增殖抑制率达最高的射线剂量。细胞抑制率=（1-实验组平均吸光度值/对照组平均吸光度值） ×100%。
1.2.4MTT法测定姜黄素的辐射敏感性 取对数生长期细胞制成单细胞悬液，分为空白组、单药组、单放组、药放组。空白组只加细胞与培养液；单放组剂量取上述实验的坪值；单药组姜黄素终浓度参照文献确定为50，25，12.5，6.25，3.125μmol/L共5组，药放组辐射剂量和药物浓度分别同单放组剂量和单药组浓度，共5组，每组设5个平行样本，测定各组吸光值后通过公式计算细胞抑制率。
1.2.5细胞周期分析及凋亡检测 细胞分组及处理同1.2.4，取处理完毕的4组细胞各1×106个， PBS洗2次，加入70%冷乙醇4℃固定过夜，清除固定液，加入PBS100μl混匀细胞，再加入10g/LRNAase2μl充分混匀，置37℃水浴锅中加温30min，加入碘化丙啶（PI）染色液（20μg/ml），常温避光30min后，流式细胞仪检测，Multicycle软件分析，拟合计算出细胞各时相百分比和凋亡率。
1.3统计学分析 所得数据以均数±标准差（x±s）的形式表示，SPSS17.0软件模拟生存曲线并进行单因素方差分析（两两比较采用S-N-K法），以P
2 结果
2.1 Hela细胞对射线照射的敏感性 射线照射对宫颈癌细胞增殖可产生明显的抑制作用，在射线剂量12Gy以内时，随着射线剂量的加大和照射后作用时间的延长，对细胞增殖的抑制率也明显增加，呈现出一定的量效和时效关系。在12Gy处出现坪值，故选用12Gy加药物进行后续的增敏实验。
2.2姜黄素对Hela细胞增殖的影响 经不同浓度姜黄素作用24、48、72h后，Hela细胞增殖均受到不同程度的抑制，并呈时间，浓度依赖性。各浓度姜黄素作用48h，细胞增殖抑制率在7%-81%之间，与对照组比较，12.5μmol/L姜黄素即可产生有统计学差异的抑制作用（P
2.3姜黄素对Hela细胞的放射增敏作用 选取12Gy剂量射线加不同浓度姜黄素作用于Hela细胞结果显示出细胞增殖抑制率可进一步随药物浓度的增加而升高，当浓度大于25μmol/L时曲线趋于平坦。药物加辐射后，其24h细胞增殖抑制率均较单纯辐射或单纯药物组有统计学差异（P
2.4细胞周期分析及凋亡检测 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡结果表明，与空白组比较，单纯放射或药物均能提高G2/M期细胞比例，诱导细胞出现凋亡（P
3讨论
姜黄素具有抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗血管新生以及抗肿瘤等多种生物学功能。本研究中，笔者观察了姜黄素同步放疗对宫颈癌Hela细胞增殖的影响，结果发现，单纯应用姜黄素，细胞增殖抑制率与药物浓度的增加成正比；单纯应用放射线照射，细胞抑制率也随射线剂量的增加而增加，但当辐射剂量达到12Gy时细胞增殖抑制率达到坪台期，不再随射线剂量的加大而增加。在此基础上，选用12Gy放射线联合不同浓度的姜黄素做进一步的观察，结果显示，在单纯辐射剂量已达到“阈值”的情况下，联用姜黄素可使细胞增殖抑制效果得到进一步的提高，且对细胞增殖的抑制率高于单纯放射组和单纯药物组（P
为初步探明增效机制，笔者进一步检测了姜黄素同步放疗后对宫颈癌细胞凋亡和细胞周期的影响，结果发现，单独药物、单独射线均能对细胞产生诱导凋亡和G2/M期阻滞的作用，而联合应用后作用效果更为显著，这说明姜黄素的放疗增敏作用与其能阻滞细胞周期于对放疗敏感时相G2/M期有关。湖北省十堰市科技局基金资助项目（ZD2012026） 湖北医药学院第三临床学院资助项目（201201）
参考文献
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